Determination of contents of eight alkaloids in fruits of Macleaya cordata (Willd) R. Br. from different habitats and antioxidant activities of extracts

A reliable ultrasound-assisted extraction （UAE） method combined with HPLC-UV for quantification of eight active alkaloids in fruits of Macleaya cordata （Willd） R. Br. was developed. The optimization conditions of UAE were obtained by using Box-Behnken design of response surface methodology. Chromatography was carried out using a Kromasil C18 column by gradient elution with 0.1% phosphoric acid aqueous solution for HPLC-UV. All calibration curves showed good linear correlation coefficients （R^2〉0.999 6） and recoveries （from 97.3% to 104.9%） were acceptable. 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl （DPPH） method was employed to test the antioxidant activity of the extract from the samples. The proposed method was successfully applied to quantifying eight components in nine samples of M.cordata, and significant variations of alkaloid contents and antioxidant aetivity of the samples from different habitats were demonstrated. It presents a powerful proof for the selection of the best sources to extract eight kinds of alkaloids.

Stability of Sanguinarine and Chelerythrine in Macleaya cordata (Willd.) R. Br.

[Objectives]To explore the stability of sanguinarine and chelerythrine in Macleaya cordata(Willd.)R.Br.[Methods]The solubility and stability of sanguinarine and chelerythrine in seven solvents were measured by HPLC.Besides,the effects of water quality,light source,oxidant,temperature,and pH on stability were investigated.[Results]The solubility and stability of sanguinarine and chelerythrine in methanol and ethanol are good;the stability of sanguinarine and chelerythrine in distilled water and rainwater is not affected by light and is very stable,but they are unstable in tap water whether they are protected from light or not;oxidants have a great influence on the stability of sanguinarine and chelerythrine;sanguinarine and chelerythrine are stable at room temperature lower than 54℃;sanguinarine is stable in pH 2.5-7.0,while chelerythrine is stable in pH 2.5-8.0.[Conclusions]The good stability of sanguinarine and chelerythrine under specific conditions shows that they have broad development prospects and value.

博落回不同部位四种生物碱的含量差异分析

建立可同时测定博落回中血根碱等四种生物碱类有效成分的HPLC方法,评价博落回不同部位生物碱有效成分含量的差异。采用Waters-Symmetry C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),以乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,波长284 nm,进样量5μL,柱温30℃。结果显示,血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱、别隐品碱四种生物碱在一定浓度范围内线性关系良好,平均回收率范围分别在98.88%~99.73%、97.97%~99.20%、95.18%~99.86%、95.76%~100.48%。博落回的根、茎、叶中四种生物碱有效成分含量差异较大,根和叶中四种生物碱的含量远大于茎,说明根和叶是博落回合成生物碱类次级代谢产物的主要部位。叶中血根碱、白屈菜红碱的含量是根中含量的2倍。综上所述,建立的HPLC法具有简单、稳定、准确的特点,为博落回的合理有效利用提供参考。

有毒植物博落回中生物碱的检验研究进展

博落回是罂粟科有毒植物,植株含有乳黄色有毒汁液,其主要毒性成分为异喹啉类生物碱,其中血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱含量较高,可致人中毒死亡。中毒事件多发于煎服博落回植株及食用含有博落回花粉的蜂蜜。对博落回中生物碱的检验是法庭科学中的一项重要研究课题。通过查阅文献,梳理了博落回中生物碱的提取、分离和检验方法,以高效液相色谱质谱联用和超高液相色谱质谱联用技术为主,为博落回及衍生产品中有毒成分的鉴定提供理论基础。

博落回根的化学成分研究

目的:研究博落回根的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、重结晶、半制备液相色谱等进行分离纯化,根据波谱数据进行结构鉴定。结果:从博落回根中分离得到7个化合物,通过质谱、核磁等波谱手段确定了结构,分别鉴定为:6-氰基二氢白屈菜红碱(1)、6-氰基二氢白屈菜黄碱(2)、二氢白屈菜玉红碱(3)、6-甲氧基去甲白屈菜红碱(4)、二氢血根碱(5)、6-丙酮基二氢血根碱(6)、豆甾醇(7)。结论:其中,化合物1、2为新的天然化合物,化合物4首次从该植物中分离得到。

博落回中生物碱的超声提取和分离

运用超声波辅助提取技术,通过L9(3)4正交试验考察了乙醇浓度(A)、液固比(B)和超声时间(C)3个因素对博落回生物碱提取的影响,同时还研究了D101大孔树脂对粗提液中生物碱的吸附和分离效果.结果表明最佳提取工艺为A3B1C3,即用9倍量的90%的乙醇超声提取45 min.D101大孔树脂能从博落回的pH2～3的盐酸提取液中以游离碱形式全部吸附其生物碱,分别采用50%乙醇和丙酮洗脱能有效地将极性和弱极性生物碱分离开来.

博落回内生放线菌的分离及活性菌株的鉴定

目的:从博落回Macleaya cordata(Willd.)R.Br根部筛选具有抑菌活性的放线菌,并对其进行种属鉴定。方法:采用平板涂布法分离皖西大别山野生植物博落回根部的内生放线菌;采用琼脂块法初步研究博落回内生放线菌的抑菌活性;通过形态特征、生理生化特性及分子生物手段鉴定菌种。结果:从博落回根部共分离筛选得到内生放线菌15株,有6株放线菌对供试菌株表现出抑菌活性,占总分离菌株的40%,其中菌株BL7对金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的拮抗作用明显,其抑菌圈直径分别为29、20 mm。根据菌株BL7的形态学特征、生理生化特征并结合16S r DNA系统发育分析将其初步鉴定为茂原链霉菌Streptomyces mobaraensis。结论:链霉菌属放线菌在医药上具有广阔的应用前景。而茂原链霉菌Streptomyces mobaraensis首次从博落回植株中筛选得到,具有进一步研究开发的价值。

HPLC法同时测定博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱的含量

目的采用HPLC法同时检测博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱含量。方法采用Luna-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液(pH 3.5)-乙腈(78∶22)为流动相,流速为0.8 mL/min,柱温25℃,检测波长284 nm。结果原阿片碱、别隐品碱含量测定方法的线性关系良好,线性范围和相关系数分别为4.2～52μg/mL(r=0.999 4),6.9～86μg/mL(r=0.999 9);平均回收率分别为99.2%、99.4%;RSD分别为0.9%、1.8%(n=6)。结论该方法操作简便、准确、灵敏度高,适合于博落回中原阿片碱、别隐品碱含量的同时测定,不同部位两种生物碱均存在一定的差异。

一测多评法测定博落回果实中原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱的含量

目的建立一测多评法测定博落回中原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱的含量。方法以博落回果实为研究对象,建立别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱对原阿片碱的相对校正因子,利用该相对校正因子计算别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱的含量,实现一测多评;同时采用外标法测定药材中4种生物碱的含量,比较两种方法的差异,验证一测多评法的准确性和可行性。结果 9批博落回果实中4个生物碱的含量可以用一测多评法进行测定,其计算值与实测值间无显著差异。结论建立的一测多评法同步测定博落回果实中的原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱是可行的、准确的。

超临界CO_2流体萃取博落回总生物碱的研究

目的从博落回中提取生物碱,为博落回生物碱的提取、纯化提供方法和依据。方法采用超临界CO2结合使用甲醇、乙醇、丙酮作为夹带剂和Na2CO3碱化处理原料研究对生物碱提取率及提取物中总生物碱的影响。通过元素分析,计算提取生物碱的平均相对分子质量,获得各种提取条件下对生物碱分子的提取能力。结果在318.15K、35MPa条件下,相对于单纯使用超临界CO2萃取,使用甲醇作为夹带剂和Na2CO3碱化剂可使生物碱的提取率从0.0436%提高到0.2019%,提取物中生物碱的质量分数从12.5%提高到20.03%,提取生物碱的平均相对分子质量从334.63提高到400.03。结论超临界CO2中夹带甲醇或乙醇可以提高对生物碱的提取能力,丙酮的影响很小;碱化处理原料,可以使超临界CO2及其夹带剂提取更大相对分子质量的生物碱物质。

博落回果荚中生物碱的研究

目的:研究博落回果荚的化学成分。方法:采用硅胶柱层析以及制备高效液相色谱法进行分离纯化,并根据波谱学数据鉴定化合物的结构。结果:从博落回果荚的乙醇提取物中分离纯化得到8个生物碱,分别鉴定为:6-氰基二氢血根碱(1)、6-丙酮基二氢血根碱(2)、6-丙酮基二氢白屈菜红碱(3)、白屈菜红碱(4)、二氢白屈菜红碱(5)、13,14-去氢-N-甲基黄连碱(6)、N-甲基氢化小檗碱(7)、小檗碱(8)。结论:其中,化合物1、6为新的天然产物,化合物7为首次在博落回属植物中报道。

罂粟科3种植物叶片生物碱抗氧化活性比较

为比较罂粟科3种植物叶片中生物碱的抗氧化活性,采用体积分数为80%乙醇浸提博落回、角茴香和秃疮花3种植物叶片中的总生物碱,用常见生物碱显色反应检测,利用硅胶柱层析纯化,并且用邻苯三酚自氧化法测定其超氧阴离子的清除效果,番红花红O-Mn2+-H2O2光度法测定其对羟基自由基的清除效果,总生物碱的还原性。结果表明,3种总生物碱对这两种自由基有较好的抗氧化活性,角茴香对羟基自由基的清除作用较强,IC50为0.170 g/L。当质量浓度为1 g/L时,秃疮花对超氧阴离子的清除率92.09%,3种植物的总生物碱都有还原性,但效果都不如硫脲。

博落回鲜叶中生物碱类化学成分的分离与结构鉴定

目的:研究博落回叶的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱以及制备液相色谱法进行分离纯化,并根据波谱数据鉴定化合物结构。结果:从博落回新鲜叶的乙醇提取物中分离纯化得到14个生物碱,分别鉴定为:原阿片碱(1)、别隐品碱(2)、血根碱(3)、白屈菜红碱(4)、去甲基白屈菜红碱(5)、去氢紫堇碱(6)、N-甲基四氢黄连碱(7)、黄柏碱(8)、6-甲氧基去甲基血根碱(9)、6-氰基二氢血根碱(10)、6-氰基二氢白屈菜红碱(11)、6-丙酮基二氢血根碱(12)、二氢血根碱(13)、二氢白屈菜红碱(14)。结论:其中化合物5~9为首次在博落回属植物中分离得到。

博落回不同部位提取物对大肠菌群的抑菌作用研究

研究了博落回提取物对大肠菌群的抑制作用。本实验以大肠杆菌、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌为指示菌,采用牛津杯法筛选对三种指示菌有最佳抑制作用的博落回组织粗提物;对抑菌效果好的粗提物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,采用滤纸片法筛选出抑菌活性最高的萃取物,并测定其最小抑制浓度和最小杀菌浓度。实验结果表明博落回不同部位粗提物有抑制指示菌的活性,其中以博落回根部提取物的抑菌活性最佳;根部萃取物抑菌实验结果表明正丁醇萃取物对三种指示菌均有较好的抑制效果,抑菌圈直径均在12 mm以上,远高于粗提物,对大肠杆菌,其最小抑制浓度和最小杀菌浓度分别为400、600μg/m L,对产气肠杆菌与阴沟肠杆菌,其最小抑制浓度均为500μg/m L,最小杀菌浓度均为700μg/m L。博落回根部提取物对上述三种指示菌均有抑制作用,尤其以正丁醇萃取物的抑菌效果最佳。

基于质谱示踪研究博落回根的化学成分

目的:研究博落回根的化学成分。方法:采用LC-MS确定分离目标,运用硅胶柱层析以及制备液相色谱法进行分离纯化,并根据波谱数据鉴定化合物结构。结果:从博落回根的乙醇提取物中分离纯化得到8个化合物,分别鉴定为:6-hydroxymethyldihydrosanguinarine(1)、7-去甲基二氢白屈菜红碱(2)、四氢非洲防己胺(3)、四氢小檗红碱(4)、hunnemannine(5)、白藜芦醇(6)、对羟基苯甲醛(7)、2,2-二甲氧基乙酸(8)。结论:8个化合物均首次在博落回属中分离得到。

基于HPLC-Q-TOF/MS技术鉴定博落回叶中化学成分

目的快速获取博落回叶中的生物碱组分信息。方法应用HPLC-Q-TOF/MS技术鉴定博落回叶的化学成分。结果从博落回叶的甲醇提取物中鉴定了19个化合物,包括17个生物碱（3个苯并菲啶类、1个二氢苯并菲啶类、2个苄基异喹啉类、2个原小檗碱类、5个四氢原小檗碱类、3个普罗托品类和1个氮甲基-四氢原小檗碱类生物碱）、2个黄酮类化合物（1个黄酮苷和1个槲皮素）。结论化合物1~6,8首次在博落回中报道。

博落回急性及亚慢性毒性试验

博落回对小鼠经口急性毒性和对大鼠腹腔注射亚慢性毒性试验结果表明:博落回生物碱硫酸盐对昆明系小鼠的急性毒性为;水溶液LD_(50)=900 mg·kg^(-1),水混悬液LD_(50)=1043 mg·kg^(-1),均属低毒级。博落回注射液对Wistar大鼠亚慢性毒作用的靶器官主要为肝,长时间或大剂量接毒引起肝细胞变性、增生,使雄性动物肝/体比明显增高,而血清谷-丙转氨酶下降。

博落回白绢病的病原鉴定及防治

目的:明确博落回根腐病致病菌病原,提出合理的防治措施。方法:运用致病菌形态学观察、致病菌内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列分析生开展鉴定研究,针对致病菌的生物学特性分析其防治策略。结果:通过形态学和分子生物学鉴定证明病害为齐整小核菌(Sclerotium rolfsii sacc.)导致的白绢病,防治方法需要以生物防治为主,最终实现白绢病安全、有效防控。结论:通过研究证明博落回的病害为白绢病,提出了安全有效地防治策略,能够保证药材的品质,保护生态环境。

血根碱酊剂体外抗真菌初步研究

通过分析博落回(Macleaya cordata(willd)R.Br.)提取物——血根碱(制成血根碱酊剂)、总生物碱对须癣毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)、玫瑰色毛癣菌(Trichophyton rosaceum)、许兰黄癣菌(Trichophyton schoenlei-ni)、红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)几种皮癣真菌的抑菌试验,以探讨血根碱酊剂和总生物碱对皮癣致病真菌的抑制作用。结果表明:血根碱酊剂对须癣毛癣菌、许兰黄癣菌的最小抑菌浓度为16μg/mL,对玫瑰色毛癣菌的最小抑菌浓度为128μg/mL,对红色毛癣菌的最小抑菌浓度为64μg/mL;在含等量血根碱的条件下,血根碱酊剂的抗皮癣真菌效果比博落回总生物碱好。血根碱酊剂具有良好的抗真菌效果,可用于治疗脚癣。

博落回药材的提取工艺研究

目的研究博落回药材的提取工艺。方法采用正交试验法,以白屈菜红碱得率及固形物含量为指标,考察乙醇浓度、提取温度、pH3个因素对博落回提取工艺的影响。结果优化的博落回提取工艺为A2B1C2,即取博落回药材,以80%乙醇提取,调节pH=5.0,60℃温浸提取。结论该最佳工艺可行。