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产Macrolactins的海洋细菌X-2中Ⅰ型PKS基因簇的筛选鉴定与功能分析 被引量:3
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作者 董晓毅 王梁华 +3 位作者 孙铭娟 宗英 焦豫良 焦炳华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1367-1372,共6页
Macrolactins是近年来从Actinomadura sp.和Bacillus sp.等海洋来源的微生物中分离的一群24元大环内酯类化合物,具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤等生物学活性。本室从东海海泥中分离到一株海洋细菌X-2,可产生多种Macrolactins。本研究自行设... Macrolactins是近年来从Actinomadura sp.和Bacillus sp.等海洋来源的微生物中分离的一群24元大环内酯类化合物,具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤等生物学活性。本室从东海海泥中分离到一株海洋细菌X-2,可产生多种Macrolactins。本研究自行设计了一套针对Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因中酮缩合酶(ketosynthase,KS)片段的简并引物,使用PCR方法直接克隆到了X-2基因组中的一段长约645bp的Ⅰ型KS基因片段,提交GenBank获登录号EF486351,并以之为探针筛选X-2的fosmid基因组文库,得到了3个阳性克隆,测序获得的序列经同源性分析和功能预测,初步证实获得了该菌中负责生物合成Macrolactin的部分Ⅰ型PKS基因簇的功能序列。 展开更多
关键词 macrolactin 聚酮合酶 枯草芽孢杆菌
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两株产生大环内酯Macrolactin S的海洋细菌的筛选及鉴定
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作者 韩文菊 卢小玲 +4 位作者 许强芝 刘小宇 杨桥 王国飞 焦炳华 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期24-27,共4页
目的:从中国东海分离筛选抗菌活性微生物,确定活性菌株的分类地位。方法:随机挑选30株本室保存的分离自中国东海的细菌,利用抗大肠杆菌模型进行活性筛选。对活性菌株进行形态特征、生化特征、盐需求测试及16S rDNA序列分析,并将所测得... 目的:从中国东海分离筛选抗菌活性微生物,确定活性菌株的分类地位。方法:随机挑选30株本室保存的分离自中国东海的细菌,利用抗大肠杆菌模型进行活性筛选。对活性菌株进行形态特征、生化特征、盐需求测试及16S rDNA序列分析,并将所测得的序列在NCBI数据库进行相似性搜索,选取其中具有代表性的序列以邻接法构建系统进化树,将菌株鉴定到属。结果:筛选出活性菌株F81612和F201721,它们的最适生长盐浓度分别为10%和7.5%,菌株形态特征、生化性质与Bacillus sp.相符,菌株F81612和F201721的16S rDNA序列分别与Bacillus subtilis和Bacillus amyloliquefaciens相似程度最大。结论:利用抗大肠杆菌模型筛选到两株产大环内酯Macrolactin S的细菌,均为中等嗜盐的海洋Bacillus sp.。 展开更多
关键词 macrolactin S 芽孢杆菌 鉴定 16S RDNA
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一株海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)生产Macrolactin B的发酵条件优化 被引量:3
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作者 王洪强 何山 +2 位作者 杨锐 朱鹏 严小军 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1592-1596,共5页
从浙江台州近海上层海水中分离到一株可产Macrolactin类大环内酯抗生素的海洋细菌,经形态特征分析及16S rRNA测序比对,鉴定并将其命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ESB-2。运用Minitab软件,通过Plackett-Burman和Box-Be... 从浙江台州近海上层海水中分离到一株可产Macrolactin类大环内酯抗生素的海洋细菌,经形态特征分析及16S rRNA测序比对,鉴定并将其命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ESB-2。运用Minitab软件,通过Plackett-Burman和Box-Behnken实验及响应面分析对该菌生产Macrolactin B的发酵条件进行优化,得到该菌生产Macrolactin B的最佳发酵条件为:葡萄糖17.0mg/L,蛋白胨5mg/L,酵母粉1mg/L,FePO40.01mg/L,初始pH 6.0,培养温度27.2℃,接种量5%,装液量57.6%,培养时间4d,在优化发酵条件下,Macrolactin B的最高产量达到13.6?g/mL,为目前已报道的最高产量,为该活性物质药源问题的解决打下了良好基础。 展开更多
关键词 海洋解淀粉芽孢杆菌 macrolactin B 发酵优化 响应面法
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海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien)产抗生素Macrolactin A的碳源优化 被引量:2
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作者 侯东园 吴祖芳 张鑫 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1071-1077,共7页
为提高一株海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ESB-2生产大环内酯类抗生素Macrolactin A的能力,利用大孔树脂对发酵液进行粗提取,利用高速逆流色谱法,高效、快速分离制备出高纯度的Macrolactin A。采用高效液相色谱法检测... 为提高一株海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ESB-2生产大环内酯类抗生素Macrolactin A的能力,利用大孔树脂对发酵液进行粗提取,利用高速逆流色谱法,高效、快速分离制备出高纯度的Macrolactin A。采用高效液相色谱法检测不同碳源对Macrolactin A产量的影响,且在优化基础上采用摇瓶发酵得到海洋解淀粉芽孢杆菌的发酵过程曲线。结果表明:高速逆流色谱法能够高效快速的制备出Macrolactin A纯品,纯度达到95%以上,明显优于高效液相色谱;添加葡萄糖、蔗糖和麦芽糖均有利于Macrolactin A的生成,麦芽糖为最佳碳源,最佳浓度为1%,其产量达到18.5mg/L,是优化前的2倍多。本研究可为提高Macrolactin A的产量、解决其药源问题、实现规模化生产打下了良好的基础。 展开更多
关键词 高速逆流色谱 海洋解淀粉芽孢杆菌 macrolactin A 碳源优化
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产Macrolactin A抗生素海洋解淀粉芽孢杆菌的鉴定及发酵条件优化 被引量:13
5
作者 杨桥 韩文菊 +4 位作者 张文俊 卢小玲 刘小宇 许强芝 焦炳华 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第4期311-315,346,共6页
为筛选海洋微生物来源的抗生素资源,从我国东海海泥中分离到一株可产大环内酯抗生素Mac-rolactinA(MLA)的海洋细菌,经形态特征、生理生化特性及16SrRNA测序及比对、细胞脂肪酸成分分析等多项指标测定,鉴定并将其命名为解淀粉芽孢杆菌(Ba... 为筛选海洋微生物来源的抗生素资源,从我国东海海泥中分离到一株可产大环内酯抗生素Mac-rolactinA(MLA)的海洋细菌,经形态特征、生理生化特性及16SrRNA测序及比对、细胞脂肪酸成分分析等多项指标测定,鉴定并将其命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)JY-863。利用Plackett-Burman设计及响应面法对影响该菌株发酵产MLA的主要因素进行了优化。确立其最适发酵条件为:初始pH值6,温度29.9℃,装液量52.3%,转速130r/min,接种量10%,培养时间7d,在优化发酵培养条件下,产生的MLA含量提高了5倍,达到18.5μg/ml。 展开更多
关键词 macrolactin A抗生素 鉴定 发酵 PLACKETT-BURMAN设计 响应面法
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海洋芽孢杆菌B-9987中macrolactin生物合成基因簇分析及反式酰基转移酶高表达 被引量:5
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作者 刘扬 郑华 +2 位作者 姚婷婷 田黎 李文利 《中国海洋药物》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期69-75,共7页
目的对海洋芽孢杆菌B-9987中macrolactin生物合成基因簇及其关键基因进行分析、鉴定及功能研究。方法通过生物信息学手段对基因簇的基因组成和功能结构域进行了分析;构建了用于酰基转移酶基因高表达的大肠杆菌—芽孢杆菌穿梭载体,采用... 目的对海洋芽孢杆菌B-9987中macrolactin生物合成基因簇及其关键基因进行分析、鉴定及功能研究。方法通过生物信息学手段对基因簇的基因组成和功能结构域进行了分析;构建了用于酰基转移酶基因高表达的大肠杆菌—芽孢杆菌穿梭载体,采用电击转化方法导入B-9987之中进行高表达。结果 Macrolactins是由位于同1个操纵子的9个基因bmmA-I所编码的反式酰基转移酶聚酮合酶体系组装而成,反式酰基转移酶(trans-acyltransferase,trans-AT)BmmA的高表达使macrolactin A的产量提高了约0.6倍。结论 Macrolactin生物合成基因簇在具有生物防治活性的芽孢杆菌中普遍存在,且高度保守;反式酰基转移酶的高表达能够增加macrolactin A的产量。 展开更多
关键词 海洋芽孢杆菌 macrolactin 生物合成基因簇 反式酰基转移酶聚酮合酶
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响应面法优化暹罗芽孢杆菌产大环内酯的发酵培养条件
7
作者 张梦菲 余炼 +5 位作者 李菲 李喆 苏芯莹 蓝彩碧 朱虎 秦莹 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期299-308,共10页
【目的】大环内酯(MLNs)是一类由聚酮链环化而成的新型化合物,具有显著的抗菌、抗病毒和抗肿瘤活性,但因传统发酵的大环内酯产量较低而限制了其广泛应用。旨在提高暹罗芽孢杆菌K53合成MLNs的产量,以期为MLNs的批量生产提供科学依据。【... 【目的】大环内酯(MLNs)是一类由聚酮链环化而成的新型化合物,具有显著的抗菌、抗病毒和抗肿瘤活性,但因传统发酵的大环内酯产量较低而限制了其广泛应用。旨在提高暹罗芽孢杆菌K53合成MLNs的产量,以期为MLNs的批量生产提供科学依据。【方法】基于前期研究发现,通过单因素试验研究碳源、氮源、氨基酸等营养成分对菌株K53中MLNs发酵产量的影响,确定关键营养因子,运用响应面分析法对关键营养因子进行优化,获得发酵MLNs的最佳工艺参数。【结果】单因素试验中,菌株K53的发酵培养基中葡萄糖为最优碳源,酵母提取物和(NH_(4))_(2)SO_(4)分别为最优有机氮源和无机氮源,额外添加组氨酸和缬氨酸可提高MLNs的产量。响应面优化中,菌株K53的最佳发酵培养基:22.0 g/L葡萄糖、3.0 g/L(NH_(4))_(2)SO_(4)、1.0 g/L酵母提取物、6.1 g/L缬氨酸和5.9 g/L组氨酸,其中缬氨酸和组氨酸为合成MLNs的前体物质。在该培养基中MLNs的产量达到5.37×10^(2)μg/mL,与理论预测的最大值(5.46×10^(2)μg/mL)非常接近,与优化前的菌株合成MLNs产量(1.31×10^(2)μg/mL)相比提高4.10倍。【结论】响应面法优化后的发酵培养基有利于提高菌株K53的MLNs产量,为菌株MLNs的后续开发应用提供参考。 展开更多
关键词 大环内酯 暹罗芽孢杆菌 发酵培养基 前体物质 响应面优化
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Macrolactins:biological activity and biosynthesis
8
作者 Ting Wu Fei Xiao Wenli Li 《Marine Life Science & Technology》 2021年第1期62-68,共7页
Marine microorganisms have proven to be a rich source of natural products with unique structures and novel activities,due to their special living conditions.Macrolactins(MLNs),mostly produced by marine-derived microor... Marine microorganisms have proven to be a rich source of natural products with unique structures and novel activities,due to their special living conditions.Macrolactins(MLNs),mostly produced by marine-derived microorganisms,are a group of 24-membered lactone natural products,which exhibit potent antibacterial,antifungal,antiviral,anticancer,antiinfammatory,anti-angiogenic and other activities.Their extensive biological activities make them potential compounds for drug development.MLNs are biosynthesized via a type I polyketide synthase(PKS)pathway with diferent tailoring steps,such as epoxidation,glycosylation and acylation.These modifcation steps provide opportunities to diversify their structures by combinatorial biosynthesis strategies.This review mainly focuses on the newly discovered MLNs in the past fve years,including their biological activities and relevant biosynthetic studies. 展开更多
关键词 macrolactins Biological activities BIOSYNTHESIS Structural diversity
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A stereoselective synthesis of the C(3)-C(13) and C(14)-C(24) fragments of macrolactin A
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作者 李树坤 徐睿 +1 位作者 肖相树 白东鲁 《Chinese Journal of Chemistry》 SCIE CAS CSCD 2000年第6期910-923,共14页
Synthetic studies towards the C(3)-C(13) and C(14)-C(24) segments (3,4) of the potent antiviral and antitumor compound macrolactin A (1) are presented. Compound 3 was constructed via a convergent and facile approach, ... Synthetic studies towards the C(3)-C(13) and C(14)-C(24) segments (3,4) of the potent antiviral and antitumor compound macrolactin A (1) are presented. Compound 3 was constructed via a convergent and facile approach, exploiting Wittig olefination to generate the sensitive E, Z-diene moiety. Compound 4 was synthesized from the chiral-pool derived sulfone 39a via an α-alkylation-desulfonation reaction sequence. Cu(II)-catalyzed coupling of a Grignard reagent with an allylic bromide and Julia olefination were also investigated for the preparation of compound 4. 展开更多
关键词 macrolactin A ANTIVIRAL stereoselective synthesis Wittig reaction sulfone alkylation Julia olefination
全文增补中
从海洋细菌X-2中筛选Ⅰ型PKS基因簇
10
作者 赫荣乔 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1510-1510,共1页
与发达国家的相关工作相比较,我国对海洋微生物功能基因资源的利用和开发尚处于初期。因此,在国内开展海洋微生物功能基因的研究和利用,不但在相关领域具有理论意义,同时具有潜在的社会效益和应用价值。Macrolactins是一类24员大环... 与发达国家的相关工作相比较,我国对海洋微生物功能基因资源的利用和开发尚处于初期。因此,在国内开展海洋微生物功能基因的研究和利用,不但在相关领域具有理论意义,同时具有潜在的社会效益和应用价值。Macrolactins是一类24员大环内酯类化合物,具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤等多种生物学活性。国际同行的研究表明,Macrolactins有18个家族成员(Macrolactin A—R),主要为海洋来源的Actinomadura sp.和Bacillus sp.。 展开更多
关键词 macrolactin 聚酮合酶 枯草芽孢杆菌
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mlnB基因敲除对解淀粉芽孢杆菌W1杀螨活性的影响
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作者 黄莎莎 何鹏飞 +2 位作者 何月秋 李兴玉 吴毅歆 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第5期1128-1135,共8页
【目的】研究拟通过构建W1菌株突变体及其杀螨抑菌活性检测以从分子水平探究并验证此菌株的杀螨机理,为二斑叶螨的防治提供一种新的微生物资源和防治策略,为后续开发利用更多微生物资源奠定基础,也为新型微生物杀螨剂的研发与应用提供... 【目的】研究拟通过构建W1菌株突变体及其杀螨抑菌活性检测以从分子水平探究并验证此菌株的杀螨机理,为二斑叶螨的防治提供一种新的微生物资源和防治策略,为后续开发利用更多微生物资源奠定基础,也为新型微生物杀螨剂的研发与应用提供理论基础。【方法】前期对解淀粉芽孢杆菌W1的次级代谢产物的活性化合物进行研究,已确定其对二斑叶螨的杀虫活性物质为二酮哌嗪类,大环内酯类及巨杆菌素类等化合物。大环内酯类化合物中以大环内酯A为主要杀螨活性物质,而大环内酯A是由mln基因簇调控合成。通过构建敲除整合载体pBS-mlnB-kan^(R)转化导入W1菌株自然感受态细胞等操作,获得了其杀螨活性化合物——大环内酯生物合成缺陷突变体W1△mlnB::kan^(R),利用PCR扩增及产物测序和HPLC-MS/MS技术证实敲除突变体的成功构建,并检测其杀螨抑菌活性。【结果】mlnB基因的敲除不仅导致W1菌株无法合成大环内酯A,还削弱了其对大白菜软腐病菌、柑橘溃疡病菌、大白菜黑腐病菌及茄科青枯菌的拮抗活性,相比W1野生型菌株二斑叶螨的致死率73.33%~77.22%,大环内酯合成缺陷突变体的杀螨活性也下降了46.66%~50.55%。【结论】解淀粉芽孢杆菌W1菌株合成的大环内酯A具有杀二斑叶螨活性,同时还能抑制大白菜软腐病菌、柑橘溃疡病菌、大白菜黑腐病菌以及茄科青枯病菌。大环内酯A合成受阻后,W1菌株的活性均明显地被削弱。 展开更多
关键词 解淀粉芽孢杆菌 大环内酯A 基因敲除 二斑叶螨
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7-O-丁二酰大环内酯菌素A对人肺癌细胞H460的抑制作用及其机制
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作者 杨培树 郝文立 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期82-88,共7页
探讨7-O-丁二酰大环内酯菌素A对人肺癌细胞侵袭转移的抑制作用及其机制。7-O-丁二酰大环内酯菌素A处理人肺癌细胞H460后,采用MTS、细胞黏附、Transwell和划痕实验观察7-O-丁二酰大环内酯菌素A对细胞生长、体外黏附能力及侵袭转移的影响... 探讨7-O-丁二酰大环内酯菌素A对人肺癌细胞侵袭转移的抑制作用及其机制。7-O-丁二酰大环内酯菌素A处理人肺癌细胞H460后,采用MTS、细胞黏附、Transwell和划痕实验观察7-O-丁二酰大环内酯菌素A对细胞生长、体外黏附能力及侵袭转移的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化,RT-PCR和Western blot检测7-O-丁二酰大环内酯菌素A对β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、vimentin、N-cadherin、CD44、integrinβ1、bcl-2、Survivin和MMP-2/9的mRNA和蛋白表达的影响以及AKT和m TOR的磷酸化的变化。结果表明:7-O-丁二酰大环内酯菌素A显著抑制H460细胞的体外增殖和体外黏附,诱导细胞发生凋亡,且抑制细胞体外迁移和侵袭能力。Western blot和Real-time PCR结果显示,7-O-丁二酰大环内酯菌素A下调细胞中Bcl-2、Survivin、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、vimentin、N-cadherin、CD44、integrinβ1和MMP-2/9的表达,以及AKT和m TOR的磷酸化。7-O-丁二酰大环内酯菌素A可抑制人肺癌细胞H460的体外生长,并抑制其体外黏附和侵袭转移能力。 展开更多
关键词 7-O-丁二酰大环内酯菌素A 肺癌 H460 抗肿瘤 抗侵袭
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二十四元大环内酯生物合成研究进展
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作者 甘雨满 黄炳耀 +2 位作者 唐振洲 林霄 高程海 《广西科学》 CAS 2020年第5期487-492,共6页
二十四元大环内酯Macrolatins对大部分革兰氏阳性菌和阴性菌具有显著抑制活性,在疾病治疗、农业病虫害防治等领域具有潜在的应用价值。但野生菌株代谢产生的二十四元大环内酯产量较低,不利于该类化合物的进一步研究。基于此,本文介绍了... 二十四元大环内酯Macrolatins对大部分革兰氏阳性菌和阴性菌具有显著抑制活性,在疾病治疗、农业病虫害防治等领域具有潜在的应用价值。但野生菌株代谢产生的二十四元大环内酯产量较低,不利于该类化合物的进一步研究。基于此,本文介绍了二十四元大环内酯生物合成基因簇、基因簇重构、工程菌株构建和发酵优化方面取得的研究成果,简要分析二十四元大环内酯生物合成所面临困境以及下一步研究应该重点关注的方向,为其进一步研究和开发利用提供参考依据。 展开更多
关键词 二十四元大环内酯 PKS基因簇 工程菌株 发酵优化 生物合成
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海洋芽孢杆菌B-9987中抗MDR菌活性成分研究 被引量:2
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作者 张君 任鹏飞 +2 位作者 田黎 李花月 李文利 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2016年第5期45-49,共5页
目的挖掘具有优良多重耐药菌(MDR)抗菌活性的次级代谢产物,为海洋新药研发提供分子多样性。方法对海洋芽孢杆菌B-9987进行大发酵,将发酵产物进行提取分离,每一步分离过程进行MDR活性追踪。结果 B-9987粗提物对4株MDR菌(金黄色葡萄球菌CC... 目的挖掘具有优良多重耐药菌(MDR)抗菌活性的次级代谢产物,为海洋新药研发提供分子多样性。方法对海洋芽孢杆菌B-9987进行大发酵,将发酵产物进行提取分离,每一步分离过程进行MDR活性追踪。结果 B-9987粗提物对4株MDR菌(金黄色葡萄球菌CCARM 3090、沙门氏菌CCARM 8250、大肠杆菌CCARM 1009、粪肠球菌CCARM 5203)具有良好的抗菌活性。通过HPLC分离纯化及MS、NMR等波谱分析获得了化合物1(Macrolactin F)和化合物2(Bacillaene A)。化合物1对MDR菌没有抗菌活性。由于化合物2对光、温度、氧气十分不稳定,无法直接测试活性。对含有化合物2的组分进行活性测试,确定了B-9987的MDR菌抗菌活性来自于Bacillaene类化合物。结论鉴定了B-9987中的抗MDR菌活性成分。 展开更多
关键词 海洋芽孢杆菌B-9987 多重耐药菌 macrolactin Bacillaene
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一株产新型大环内酯抗生素海洋解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定 被引量:11
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作者 杨桥 韩文菊 +5 位作者 张文俊 卢小玲 刘小宇 许强芝 缪辉南 焦炳华 《中华航海医学与高气压医学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期92-95,共4页
目的对分离自中国东海30in深海泥的一株产新型大环内酯抗生素(macrolactins,MLS)的菌株进行形态、生理生化特性及分子水平的分类学研究。方法通过细菌培养特征观察,菌株生长条件测定、生理生化指标及全细胞脂肪酸成分分析,并特异... 目的对分离自中国东海30in深海泥的一株产新型大环内酯抗生素(macrolactins,MLS)的菌株进行形态、生理生化特性及分子水平的分类学研究。方法通过细菌培养特征观察,菌株生长条件测定、生理生化指标及全细胞脂肪酸成分分析,并特异性扩增其16SrDNA序列,测序比对及构建系统发育进化树,利用本实验室所建立的抗菌模型评价代谢产物的抗菌活性。结果该菌株与芽孢杆菌属其他种共享97%~99%的保守序列,其中与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的16SrDNA序列保守度高达99.6%。15:1isoH/13:030H为该菌株的主要脂肪酸组分。结论该菌株属于芽孢杆菌属,定名为解淀粉芽孢杆菌MS1721株,其所产大环内酯MLS表现出较强的抗菌活性。 展开更多
关键词 海洋解淀粉芽孢杆菌 大环内酯抗生素 分离 鉴定
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Establishment of an efficient transformation protocol and its application in marine-derived Bacillus strain 被引量:10
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作者 LIU Yang ZHENG Hua +3 位作者 ZHAN GuiHua QIN Wen TIAN Li LI WenLi 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2014年第6期627-635,共9页
Marine-derived Bacillus strains have been proved to be a very promising source for natural product leads.However,transformation of environmental strains is much more difficult than that of domesticated strains.Here,we... Marine-derived Bacillus strains have been proved to be a very promising source for natural product leads.However,transformation of environmental strains is much more difficult than that of domesticated strains.Here,we report the development of an efficient and robust electroporation-based transformation system for marine-derived Bacillus marinus B-9987,which is a macrolactin antibiotics producer and a very promising biological control agent against fungal plant diseases.The transformation efficiency was greatly enhanced 103-fold by using unmethylated plasmid to bypass modification-restriction barrier,and using glycine betaine to protect cells from electrical damages during electroporation.Addition of HEPES and 2 mmol L?1MgCl2 further improved the efficiency by additional 2-fold,with a maximum value of 7.1×104 cfu/μg pHT3101.To demonstrate the feasibility and efficiency of the protocol,a green fluorescent protein reporter system was constructed;furthermore,phosphopantetheinyl transferase gene sfp,which is essential to the biosynthesis of polyketides and nonribosomal peptides,was overexpressed in B-9987,leading to increased production of macrolactin A by about 1.6-fold.In addition,this protocol is also applicable to marine-derived Bacillus licheniforms EI-34-6,indicating it could be a reference for other undomesticated Bacillus strains.To our knowledge,this is the first report regarding the transformation of marine-derived Bacillus strain. 展开更多
关键词 MARINE-DERIVED Bacillus marinus ELECTROPORATION macrolactin green fluorescent protein phosphopantetheinyl transferase
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Bacillus marinus A72遗传转化体系建立及其PKS基因簇解析
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作者 罗双宇 黄明娟 +3 位作者 梁莉芬 高程海 甘雨满 刘永宏 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1235-1243,共9页
海洋芽孢杆菌(Bacillus marinus)A72代谢产物macrolactin C对甘蔗黑穗病菌具有很强的抑制作用,但产量较低不利于推广应用。代谢工程手段是提高其产量的有效策略,而高效的遗传操作体系和关键基因是决定因素。通过对菌株培养条件、外源DN... 海洋芽孢杆菌(Bacillus marinus)A72代谢产物macrolactin C对甘蔗黑穗病菌具有很强的抑制作用,但产量较低不利于推广应用。代谢工程手段是提高其产量的有效策略,而高效的遗传操作体系和关键基因是决定因素。通过对菌株培养条件、外源DNA修饰以及电脉冲强度进行优化,建立A72高效的遗传转化体系,遗传转化效率为(2.86±0.54)×10^(4)CFU/μg DNA,比优化前提高658.3倍。结合基因组测序技术和Antismash在线平台,阐明A72聚酮化合物合成酶(Polyketide synthase,PKS)基因簇结构组成。过表达pksE基因,工程菌macrolactin C合成速率加快,比对照组提前16 h完成发酵过程,初步确认pksE基因为调控macrolactin C合成的潜在关键基因。本研究建立了A72高效的遗传转化体系,成功解析PKS基因簇并初步确认一个潜在关键基因,为后期代谢工程改造提供技术保障和潜在靶点。 展开更多
关键词 海洋芽孢杆菌 macrolactins 遗传转化 PKS基因簇 基因过表达
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