新疆野生大环柄菇的分子鉴定与遗传多样性分析

【目的】从分子水平研究鉴定新疆野生大环柄菇属菌株,分析其遗传多样性,为育种亲本材料的选择提供依据。【方法】采用ITS序列测定技术对供试菌株进行物种鉴定,并利用ISSR标记技术对17个野生大环柄菇菌株进行遗传多样性分析。【结果】供试的17个菌株均为裂皮大环柄菇Macrolepiota excoriata。筛选出的10条ISSR引物共扩增出了116条重复性较好,清晰的DNA条带,多态性条带总数为75条,多态比率约为64.66%。各供试菌株之间遗传相似性系数范围约在0.71~0.99,当遗传相似性系数为0.85时,17个供试菌株可分为8个类群。【结论】裂皮大环柄菇在新疆也有分布,且其野生菌株具有比较丰富的遗传多样性。

丝状真菌原生质体技术研究(Ⅵ)——高脚小伞原生质体的制备与再生

报道高脚小伞菌丝体原生质体制备及再生的结果．多种因素影响原生质体的产量及再生率，在最适条件下，原生质体产量可达２．５４×１０６个／ｍｌ，再生率达２３．６％，还对原生质体的活力及核数进行了测定。

脱皮大环柄菇化学成分分析及其抗氧化活性评价

【目的】分析脱皮大环柄菇化学成分并评价其抗氧化活性,为脱皮大环柄菇的综合利用提供科学依据。【方法】联合运用丙酮提取和真空旋转水蒸气蒸馏法从脱皮大环柄菇新鲜子实体中获得脱皮大环柄菇挥发油和丙酮粗提物,采用气相色谱—质谱联用技术(GC-MS)分析脱皮大环柄菇挥发油化学成分,运用试管预试法检测丙酮粗提物的化学成分,通过自由基清除试验评价其抗氧化活性。【结果】GC-MS分析结果表明,脱皮大环柄菇挥发油主要化学成分为酮类化合物,其中4-甲基-4-羟基戊酮相对含量高达86.32%。试管预试法检测结果显示,脱皮大环柄菇丙酮粗提物含有生物碱、甾醇和萜类成分。自由基清除试验结果表明,脱皮大环柄菇丙酮粗提物具有有效的抗氧化活性,其清除羟自由基(·OH)和DPPH自由基的半数清除浓度(EC50)分别为260.45和552.87μg/m L。【结论】脱皮大环柄菇挥发油化学成分独特,含7种酮类化合物、1种醇类化合物和1种酯类化合物,丙酮粗提物因含有生物碱、甾醇和萜类等活性成分且具有有效的抗氧化活性,值得进一步研究开发。

高大环柄菇原生质体制备的研究

以高大环柄菇为出发菌株,对其原生质体制备条件进行研究,具体分析了酶浓度、菌龄、渗透压稳定剂以及酶解时间和温度等因素对高大环柄菇原生质体产出量的影响。结果表明:采用液体发酵培养第5 d的菌丝体,以0.5 mol/L NaC l作渗透压稳定剂,加入1.5 g/L混合酶(即纤维素酶与蜗牛酶按1∶1混合)在30℃下酶解3.5 h,制备原生质体效果最佳,原生质体产出量可达6.1×107个/mL。

一种大环柄菇属真菌的分子鉴定及其固体培养条件优化

测定大环柄菇属一种真菌(Macrolepiotasp.)的rDNA ITS序列,根据序列构建系统发育树;采用固体培养方法在不同培养基和不同培养条件下对该菌菌丝体的生长条件进行分析,最后采用正交试验,考察碳源、氮源、pH值和矿质元素对该菌菌丝生长的影响。结果表明,Macrolepiotasp.与来自日本的Macrolepiota sp.Oku X-2000和Macrolepiota sp.TMI-23928亲缘关系近;正交试验结果表明,碳源、pH值、矿质元素和氮源对该菌菌丝体的生长速度有显著影响,固体培养条件优化结果为葡萄糖、豆饼粉、pH5且培养基中缺乏KCl。经优化后,菌丝体的生长速度可以达到2.28 mm.d-1。

1株野生高大环柄菇的鉴定、生物学特性及仿野生栽培

【目的】为丰富山东省食用菌栽培品种,实现高大环柄菇的人工栽培提供参考依据。【方法】采用形态学和分子学相结合的方法对采自烟台的1株野生大环柄菇属真菌进行鉴定;采用单因素试验,以菌丝生长量为指标研究其生物学特性,并在此基础上进行仿野生栽培。【结果】经形态学和分子学鉴定,确定该真菌(编号EF-5)为大环柄菇属高大环柄菇,其子实体直径8.5 cm,上有同心圆状排列的棕褐色鳞片,子实体中央乳头状凸起,褐色;菌柄中生,长8.2 cm,直径0.8 cm,上有双层移动菌环;菌褶近白色,不等长,离生,孢子印白色;菌落不规则圆形,灰白色,菌丝多分枝,具锁状联合;其菌丝生长的最佳条件:氮源为土豆浸粉,碳源为糖蜜,温度为25℃,pH为8.0,无机盐为硫酸锰;此菌在麦粒二级种培养基上的生长时间为60 d,接种栽培料后66 d长满菌袋,经仿野生栽培成功获得了子实体。【结论】采集的野生大环柄菇属真菌为高大环柄菇;此菌二级种生长缓慢,栽培周期长,在实验室无法获得子实体,经仿野生栽培虽然获得子实体,但总产量较低。