CD74基因表达对急性髓系白血病细胞增殖与侵袭的抑制作用

目的:探讨白细胞分化抗原74(CD74)基因表达对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、侵袭及巨噬细胞移动抑制因子(MIF)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响。方法:收集83例AML患者的骨髓样本(AML组)、25例正常供者的骨髓样本(对照组)及人AML细胞系HL60、MOLM-13、THP-1、U-937、人原代正常骨髓单个核细胞(BMMC)为研究对象,Western blot检测AML骨髓样本及各细胞系中CD74蛋白表达;利用Lipofectamine ^(TM) 2000转染试剂盒对MOLM-13细胞进行转染,并分为空白组(细胞不进行转染)、si-NC组(将si-NC转染于细胞)、si-CD74组(将si-CD74转染于细胞);Western blot检测各组细胞中CD74、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及MIF/ERK信号通路相关蛋白MIF、磷酸化细胞外信号调控蛋白激酶(p-ERK)、ERK表达水平;CCK-8法检测各组MOLM-13细胞在0、24、48、72 h的增殖情况;Transwell实验检测各组MOLM-13细胞侵袭情况。结果:与对照组比较,AML组骨髓细胞中CD74蛋白表达水平显著升高(P<0.05),CD74蛋白在HL60、MOLM-13、THP-1、U-937细胞系中均高表达,且在MOLM-13细胞系中表达量最高。与空白组和si-NC组比较,si-CD74组MOLM-13细胞的OD450值(在24、48、72 h时)、细胞侵袭数目、CD74、MMP-9、MIF和p-ERK蛋白表达显著降低(P均<0.05),但空白组与si-NC组比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论:干扰AML细胞中CD74表达,可抑制细胞增殖与侵袭,其作用机制可能与抑制MIF/ERK信号通路有关。

巨噬细胞移动抑制因子在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤组织中的表达及作用

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化及与脑水肿的关系。方法将144只7日龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血组、抗MIF中和抗体干预组,于缺氧缺血模型制成后1 h、6 h、12 h、24 h、3d、7 d处死,用免疫组化方法检测脑缺血侧皮质区MIF、MMP-9的表达,Western blot法检测pERK1/2蛋白相对表达量,干湿法测定脑含水量。结果与假手术组相比,缺氧缺血组MIF在缺氧缺血后1 h表达增加,24 h达高峰(P<0.05);MMP-9在缺氧缺血后6 h表达增加,24 h达高峰(P<0.05);pERK1/2在缺氧缺血后1 h表达迅速升高,6 h迅速降低,12 h又开始增加,24 h达第2次高峰(P<0.05);脑含水量在缺氧缺血后6 h开始增加,3 d达高峰(P<0.05)。抗MIF中和抗体干预组MIF、pERK1/2、MMP-9表达及脑含水量较缺氧缺血组均下降(P<0.05)。结论缺氧缺血新生大鼠脑组织MIF表达升高,可能通过激活ERK1/2途径诱导MMP-9表达升高,进而引起脑水肿的发生。

巨噬细胞游走抑制因子在肝细胞癌组织中的表达及其与ERK1/2信号通路关系的初步研究

目的探讨巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其与ERK1/2信号通路之间相关性,为深入研究MIF促进HCC的分子机制建立理论依据。方法2020年2月至2021年8月,收集天津医科大学肿瘤医院及解放军联勤保障部队第九四〇医院有乙肝肝硬化(HBV-LC)基础的HCC癌组织和癌旁组织各52例作为试验组,其中男39例,女13例,年龄35~65岁。选择20例正常肝组织作为对照组,采用免疫组化检测2组肝组织中MIF、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白的表达,采用原位杂交检测2组肝组织中ERK1/2 mRNA表达;选择HepG2肝癌细胞和L-02正常肝细胞与不同浓度rMIF共培养,通过Western印迹法检测2种肝细胞ERK1/2蛋白的表达及其磷酸化水平,通过RT-PCR检测2种肝细胞ERK1/2 mRNA的表达水平,计量资料采用单因素方差分析,计数资料采用χ^(2)检验。结果MIF、ERK1/2、p-ERK1/2和ERK1/2 mRNA在HCC和癌旁组织中表达均明显增强(HCC组表达MIF为78.8%,癌旁组表达MIF为75.0%;HCC组表达ERK1/2为80.8%,癌旁组表达ERK1/2为71.8%;HCC组表达p-ERK1/2为75.0%,癌旁组表达p-ERK1/2为46.2%;HCC组表达ERK1/2 mRNA为76.9%,癌旁组表达ERK1/2 mRNA为78.8%),与正常肝组织比较,差异有统计学意义(P<0.05),HCC与癌旁组织比较差异无统计学意义(P>0.05)。HepG2肝癌细胞ERK1/2、p-ERK1/2和ERK1/2 mRNA表达明显升高,且随rMIF浓度的递增而增加,当rMIF浓度为200 ng/ml时升高最明显,与L-02正常肝细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MIF、ERK1/2和p-ERK1/2在HCC组织和HepG2肝癌细胞中高表达,提示MIF可能通过ERK1/2信号通路促进肝细胞癌的发生与发展。