腺病毒转染MafA诱导人脐带间充质干细胞表达胰腺细胞特异性基因

背景:人脐带间充质干细胞经化学药物或共培养等方法诱导后胰岛素分泌量低,转染胰腺发育特异性基因诱导干细胞向成熟β细胞分化是近年来的研究热点。目的:探讨MafA基因转染后人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的潜能。方法:腺病毒携带外源性β细胞发育的关键转录因子Maf A(Ad-MafA-EGFP),转染入第3代人脐带间充质干细胞,诱导后7 d观察细胞的形态学变化,应用PCR检测细胞中胰腺细胞特异性基因(glucagon、Pdx1、Nkx2.2)的表达。结果与结论:(1)经Ad-Maf A-EGFP转染后,倒置相差显微镜下观察人脐带间充质干细胞形态未见明显变化;(2)荧光显微镜下观察Ad-MafA-EGFP已进入细胞内;(3)经Ad-MafA-EGFP诱导后,人脐带间充质干细胞中人源性胰腺前体细胞glucagon、Pdx1、Nkx2.2基因表达增高,为人脐带间充质干细胞进一步分化成熟胰腺β细胞提供实验依据。

MafA磷酸化在胰岛素基因表达中的作用

目的探讨肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)磷酸化在胰岛素基因表达中的作用。方法在不同浓度的葡萄糖或糖原合成酶激酶3(GSK3)抑制剂中培养Ins-1细胞24h后,分别采用Western blotting和RT-PCR法检测MafA蛋白和胰岛素基因的表达。结果高糖组完全磷酸化的MafA和insulin 2mRNA表达均降低(P<0.05)。GSK3抑制剂组完全磷酸化的MafA降低(P<0.05),同时insulin 2mRNA表达降低(P<0.01),分别下降了31.45%和46.77%。结论 MafA在葡萄糖调节胰岛素基因表达中发挥重要作用,葡萄糖毒性可能通过抑制转录因子MafA降低insulin 2基因表达。MafA经GSK3磷酸化后促进insulin 2基因转录。