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蛆虫分泌物对糖尿病大鼠溃疡组织bFGF和结缔组织生长因子表达的影响及抗菌作用研究 被引量:10
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作者 王寿宇 吕德成 +1 位作者 王媛媛 王江宁 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期472-475,共4页
目的探讨蛆虫分泌物对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠溃疡组织bFGF和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响及预防细菌感染的作用。方法取3月龄雄性SD大鼠40只,体重300~350g,制备DM大鼠溃疡创面模型。... 目的探讨蛆虫分泌物对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠溃疡组织bFGF和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响及预防细菌感染的作用。方法取3月龄雄性SD大鼠40只,体重300~350g,制备DM大鼠溃疡创面模型。随机分为2组(n=20),实验组创面涂以丝光绿蝇蛆虫的分泌物,对照组不予处理。术后1~21d观察创面大体情况,7、14、21d分别记录两组溃疡面积;术后14d取两组溃疡组织,制备组织切片,行HE染色观察;3、7、14d取溃疡表面分泌物行常规细菌培养,检测细菌感染情况;术后7、14、21d用免疫组织化学法处理切片,显微镜下对bFGF、CTGF阳性表达细胞进行计数分析。结果实验组创面清洁,新鲜肉芽生长,无脓性分泌物,愈合情况良好,无金色葡萄球菌感染;对照组创面渗出、糜烂严重,创面不断加大加深,愈合情况不良,金色葡萄球菌感染率为60%。术后7、14、21d实验组溃疡面积分别为(1.83±0.23)、(0.39±0.08)cm2和0,对照组分别为(2.18±0.67)、(3.57±0.53)、(3.94±0.67)cm2;两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。14d组织学观察示实验组上皮组织新生,创缘炎性坏死物减少,纤维瘢痕形成;对照组大量炎性细胞浸润,坏死组织较多。术后7、14d,实验组bFGF阳性表达数分别为23.76±3.34、52.76±4.84,对照组为18.88±2.16、46.04±4.00;实验组CTGF阳性表达数分别为18.76±3.24、46.52±4.07,对照组为12.52±3.03、40.52±3.96;两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);21d,两组bFGF及CTGF阳性表达数差异无统计学意义(P>0.05)。结论蛆虫分泌物能提高DM溃疡组织bFGF、CTGF的表达,有效促进创面愈合,预防组织细菌感染。 展开更多
关键词 糖尿病 溃疡组织 蛆虫分泌物 抗菌作用
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蛆分泌物对大鼠溃疡创面的愈合作用研究 被引量:8
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作者 王寿宇 王媛媛 +1 位作者 吕德成 王江宁 《组织工程与重建外科杂志》 2006年第5期280-281,共3页
目的探讨蛆分泌物对大鼠糖尿病模型溃疡创面的愈合作用。方法制备糖尿病大鼠模型,在大鼠背部制造创面,实验组创面涂以丝光绿蝇蛆虫的分泌物,对照组不予处理。于伤后不同时间用透明膜法测定创面面积并进行病理检查。结果经过蛆分泌物处... 目的探讨蛆分泌物对大鼠糖尿病模型溃疡创面的愈合作用。方法制备糖尿病大鼠模型,在大鼠背部制造创面,实验组创面涂以丝光绿蝇蛆虫的分泌物,对照组不予处理。于伤后不同时间用透明膜法测定创面面积并进行病理检查。结果经过蛆分泌物处理后的创面在伤后4周的愈合率达到100%,同期糖尿病大鼠创面不断扩大,不愈合并伴细菌感染。病理检查蛆分泌物组表皮细胞再生,有大量的再生毛细血管及纤维母细胞。结论蛆分泌物有明显的促进创面愈合的作用。 展开更多
关键词 分泌物 糖尿病大鼠 溃疡创面 病理检查 纤维母细胞 糖尿病模型 病大鼠模型 愈合作用 细菌感染 细胞再生 丝光绿蝇 毛细血管 创面愈合 予处理 愈合率 实验组 对照组 不愈合 制造 蛆虫
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异生物素及其代谢物在反刍家畜体组织的分泌与排泄机理 被引量:6
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作者 龙瑞军 王元素 +2 位作者 董世魁 卢辉 J.PAGELLA 《草业学报》 CSCD 2005年第3期50-55,共6页
胆汁分泌和尿液排泄是异生物素如芳香族和脂环族化合物排出反刍动物有机体的主要途径。渗透过滤是胆汁分泌的主要机制,离子运输对共轭态异生物素的胆汁分泌具有重要作用,其影响因素主要为代谢物极性、分子量和结构。胆汁分泌促进了异生... 胆汁分泌和尿液排泄是异生物素如芳香族和脂环族化合物排出反刍动物有机体的主要途径。渗透过滤是胆汁分泌的主要机制,离子运输对共轭态异生物素的胆汁分泌具有重要作用,其影响因素主要为代谢物极性、分子量和结构。胆汁分泌促进了异生物素在动物体内持续地进行肠肝循环。肾脏中的分泌排泄过程在肾单位中进行。代谢物的尿液排泄包括3个基本过程:肾小球过滤、肾小管分泌和肾小管再吸收。家畜有机体排出异生物素的其他途径有唾液、乳汁、汗水和气体。家畜对某一特定饲料的采食量以及饲料本身的属性直接影响异生物素经尿液的排泄,以此建立合理的关系模型就可以根据尿液中的排泄量测定或预测家畜的采食量。 展开更多
关键词 反刍动物 体组织 异生物素 分泌 排泄
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弓形虫ESA诱导小鼠产生的CD8^+ T细胞对早期黑色素瘤生长的影响 被引量:7
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作者 焦玉萌 方强 +4 位作者 夏惠 王雪梅 陶志勇 陈兴智 沈继龙 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期95-98,共4页
目的观察弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)对B16F10黑色素瘤接种小鼠CD8+T细胞的影响,以及CD8+T细胞对B16F10黑色素瘤的作用。方法取RH株弓形虫速殖子体外培养12 h后,收集培养液,离心取上清,获得弓形虫ESA。15只C57BL/6小鼠随机分为A、B和C三... 目的观察弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)对B16F10黑色素瘤接种小鼠CD8+T细胞的影响,以及CD8+T细胞对B16F10黑色素瘤的作用。方法取RH株弓形虫速殖子体外培养12 h后,收集培养液,离心取上清,获得弓形虫ESA。15只C57BL/6小鼠随机分为A、B和C三组(每组5只)。B组和C组每鼠右腋窝皮下接种B16F10黑色素瘤细胞2×105个,A组注射等量无菌PBS。接种后第7天,C组每只小鼠腹腔注射TgESA 100μl。接种后第13天,处死小鼠,无菌取脾。流式细胞仪检测各组小鼠CD3+CD8+T细胞所占脾细胞比例;采用免疫磁珠分选B组和C组脾细胞中的CD8+T细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测两组CD8+T细胞对B16F10细胞的杀伤作用,分别设效靶细胞比为2.5∶1、5∶1和10∶1。另取30只C57BL/6小鼠随机分为E、F和G三组(每组10只),每鼠接种B16F10细胞2×105个。接种同时,F组和G组小鼠分别尾静脉注射分离自B组和C组的CD8+T细胞(2×105个/鼠)。观察小鼠瘤体生长情况,记录各组小鼠死亡数和死亡时间,共观察35 d。结果流式细胞仪检测结果显示,A、B和C组脾脏CD3+CD8+T细胞占脾细胞的比例分别为(13.86±0.13)%、(14.18±0.27)%和(15.74±0.28)%,C组显著高于其他两组(P<0.05)。LDH释放试验结果显示,不同效靶细胞比时,C组的CD8+T细胞杀伤活性均显著高于B组(均P<0.05)。G组的平均出瘤时间[(14.9±1.2)d]晚于F组[(11.9±0.7)d]和E组[(9.4±1.2)d](P<0.05)。3组小鼠自出瘤后瘤体均不断增长,但增长速度无明显差异,G组的瘤体面积始终小于其他两组(均P<0.05)。E、F和G组小鼠分别于B16F10细胞接种后第26、29和30天开始出现死亡,至观察终点(第35天),3组小鼠存活的数量分别为3、5和7只。结论TgESA可上调B16F10黑色素瘤小鼠CD8+T细胞的数量和杀伤功能,上调的CD8+T细胞具有早期延缓肿瘤生长的作用。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 排泄分泌抗原 CD8+ T细胞 黑色素瘤
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弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的脾与肠相关淋巴组织细胞免疫效应及动态变化 被引量:8
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作者 刘娟娟 殷国荣 +2 位作者 张建红 孟晓丽 陈洁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第8期580-583,共4页
目的观察弓形虫与Vero细胞共培养提取的排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的脾及肠相关淋巴组织(GALT)细胞免疫效应及动态变化。方法84只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组以ESA(20μg/只)为抗原,对照组用未接种弓形虫... 目的观察弓形虫与Vero细胞共培养提取的排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的脾及肠相关淋巴组织(GALT)细胞免疫效应及动态变化。方法84只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组以ESA(20μg/只)为抗原,对照组用未接种弓形虫的细胞培养上清液(20μl/只),鼻内免疫2次,间隔2周。末次滴鼻后第1、2、3、4、5、6、7周处死小鼠,分离脾、派伊尔结(PP)及小肠上皮内淋巴细胞(IEL)并计数。结果实验组小鼠脾淋巴细胞第3周达高峰,第1、2、3周明显高于对照组;PP淋巴细胞明显增生,第3周达高峰,第1、2、3、4、5周显著高于对照组;IEL第2周增生达高峰,第1~3周显著高于对照组。结论弓形虫ESA鼻内免疫BALB/c小鼠可有效诱导不同黏膜部位及系统特异性的细胞免疫应答,且可持续较长时间。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄-分泌抗原 鼻内免疫 细胞免疫应答
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弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制 被引量:28
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作者 王艳华 李克生 +3 位作者 才学鹏 杜慧芳 李学瑞 张德林 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期29-32,共4页
将样品垫(加样区)、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上,组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进... 将样品垫(加样区)、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上,组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进行动物弓形虫病血清抗体检测,并用弓形虫IHA诊断试剂进行对照试验。经对已知弓形虫阴、阳性血清检测,与弓形虫IHA检测结果的符合率为82.5%,金标试纸条较弓形虫IHA诊断试剂能提前2 d检测到抗体。结果表明,检测弓形虫抗体免疫胶体金试剂(金标试纸条)的敏感度高于IHA。 展开更多
关键词 弓形虫 快速检测 排泄分泌抗原 羊抗弓形虫抗体 肢体金试纸条
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弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导体液免疫应答的动态观察 被引量:6
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作者 殷国荣 周永安 +2 位作者 刘娟娟 孟晓丽 刘红丽 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2007年第3期135-140,共6页
观察从Vero细胞与弓形虫速殖子共培养液分离的排泄-分泌抗原(Excreted-secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠诱导的体液免疫应答及动态变化,为弓形虫复合黏膜疫苗候选抗原提供实验依据。BALB/c小鼠84只随机分为实验组和对照组,实... 观察从Vero细胞与弓形虫速殖子共培养液分离的排泄-分泌抗原(Excreted-secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠诱导的体液免疫应答及动态变化,为弓形虫复合黏膜疫苗候选抗原提供实验依据。BALB/c小鼠84只随机分为实验组和对照组,实验组以ESA为抗原(20μg/只),对照组用未接种弓形虫的细胞培养上清液20μL(μg/只),滴鼻免疫2次(间隔2周)。分别于2次免疫后第1、2、3、4、5、6、7周颈椎脱位处死小鼠。ELISA法测定血清IgG、IgA,粪便sIgA及肠液sIgA。结果表明,免疫组小鼠血清IgG、IgA和粪便sIgA及肠液sIgA均增高。血清IgG、IgA水平分别第5周、第4周达高峰,免疫后第1~7周(P〈0.05)显著高于对照组。粪便sIgA第4周即达高峰,之后逐渐降低,至第7周仍(P〈0.05)显著高于对照组。肠液sIgA第4周达高峰,第2、3、4周(P〈0.05)高于对照组。可见,弓形虫ESA鼻内免疫BALB/c小鼠可有效诱导体液免疫应答,特异性抗体生成明显且可持续较长时间。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄-分泌抗原 鼻内免疫 黏膜免疫 IgA
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小鼠腹水中弓形虫排泄分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答 被引量:6
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作者 刘娟娟 殷国荣 +3 位作者 管志玉 石蓉 张宇斌 孟晓丽 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第2期110-114,共5页
目的观察弓形虫感染小鼠腹水中分离的排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠对不同粘膜部位和系统的免疫效应。方法将5~6周龄BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,实验组分别用从感染弓形虫后24、48、72 h小鼠腹... 目的观察弓形虫感染小鼠腹水中分离的排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠对不同粘膜部位和系统的免疫效应。方法将5~6周龄BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,实验组分别用从感染弓形虫后24、48、72 h小鼠腹水中提取的ESA 20μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔2周;对照组用20μl/只PBS滴鼻。观察小鼠健康和死亡情况,记录体重。末次免疫后第3周处死小鼠,计数PP(Peyer’s patches)个数;分离PP淋巴细胞、脾淋巴细胞、小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)及肠系膜淋巴结细胞(mesenteric lymph node lympho-cyte,MLNL)并计数。眼眶采血和收集直肠内粪便,ELISA检测血清特异性IgG水平及粪便sIgA。结果72 h ESA组小鼠免疫后健康状况较差,体重逐渐降低,死亡4只;其他组小鼠体重仍呈增高趋势。各实验组小鼠IEL、MLNL、脾淋巴细胞以及PP淋巴细胞的增殖活性均高于对照组(P〈0.05),72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组(P〈0.01)。免疫后第3周,各实验组小鼠血清IgG、粪便sIgA水平均高于对照组(P〈0.05),72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组(P〈0.01)。结论感染后不同时间提取的腹水弓形虫ESA鼻内免疫小鼠均可诱导不同粘膜部位及系统特异性的免疫应答,48 h ESA的免疫效果最好。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄-分泌抗原(ESA) 粘膜免疫 鼻内免疫 粘膜疫苗
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用弓形虫代谢分泌抗原制备间接血凝诊断试剂的研究 被引量:8
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作者 张德林 李学瑞 杜重波 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第9期15-18,共4页
用弓形虫代谢分泌抗原 (E/SA)致敏绵羊红细胞制备间接血凝诊断试剂 ,进行人和动物弓形虫病血清抗体检测 ,并用弓形虫虫体抗原致敏的红细胞间接血凝诊断试剂进行对照试验。结果表明 ,在弓形虫阴性、阳性血清检测中 ,弓形虫E/SA间接血凝... 用弓形虫代谢分泌抗原 (E/SA)致敏绵羊红细胞制备间接血凝诊断试剂 ,进行人和动物弓形虫病血清抗体检测 ,并用弓形虫虫体抗原致敏的红细胞间接血凝诊断试剂进行对照试验。结果表明 ,在弓形虫阴性、阳性血清检测中 ,弓形虫E/SA间接血凝诊断试剂与弓形虫虫体抗原间接血凝诊断试剂的符合率为 10 0 % ;在人工感染兔血的检测中 ,E/SA致敏的间接血凝诊断试剂比虫体抗原致敏的间接血凝诊断试剂的阳性检出时间提前 2d 。 展开更多
关键词 弓形虫 代谢分泌抗原 间接血凝诊断试剂 制备 血清抗体检测
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布鲁氏菌病弱毒活疫苗经不同黏膜途径免疫奶牛的排菌程度及免疫反应 被引量:7
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作者 王苗苗 徐磊 +6 位作者 王楠 张贺 张金亚 曹如周 郭志刚 杨宏军 毛开荣 《中国兽药杂志》 北大核心 2017年第4期1-5,共5页
为探究布鲁氏菌病疫苗经不同黏膜途径免疫奶牛后对体液免疫与细胞免疫水平及疫苗体外排菌方面的影响,将80头10~12月龄的奶牛平均分为四组,通过眼部滴注(A组)、口腔喷注(B组)、阴道灌注(C组)三种黏膜免疫途径对奶牛接种布鲁氏菌病弱毒活... 为探究布鲁氏菌病疫苗经不同黏膜途径免疫奶牛后对体液免疫与细胞免疫水平及疫苗体外排菌方面的影响,将80头10~12月龄的奶牛平均分为四组,通过眼部滴注(A组)、口腔喷注(B组)、阴道灌注(C组)三种黏膜免疫途径对奶牛接种布鲁氏菌病弱毒活疫苗(A19株),并与皮下注射免疫组(D组)进行比较,测定了免疫后7 d内黏膜免疫组的排菌情况,180 d内四组免疫奶牛的抗体效价和60 d内四组免疫奶牛的外周血淋巴细胞细胞因子分泌(IFN-γ、IL-2和IL-4)水平。结果显示:黏膜免疫组在免疫后5 d内均有不同程度的排菌,以免疫后1 d内排菌量为最高,并且在黏膜免疫组中阴道灌注组排菌量最低;各组奶牛在免疫后20 d时MSAT测定抗体效价平均值均上升至最高,之后持续下降,黏膜免疫组的抗体水平显著低于注射免疫组,且在黏膜免疫组中阴道灌注组的抗体水平最高;A组和B组奶牛在免疫后120 d RBT检测无阳性,C组在免疫后150 d RBT检测无阳性,D组在免疫后180 d RBT检测阳性率35%;B组、C组在免疫后7 d,A组、D组在免疫后20 d IFN-γ分泌量达到最高值,各组IL-2和IL-4分泌量未见明显变化,黏膜免疫组中阴道免疫组的IFN-γ分泌量为最高,仅次于注射免疫。结果表明,阴道灌注是一种较优的奶牛布鲁氏菌病黏膜免疫方式。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病疫苗 黏膜免疫 排菌 抗体 细胞因子
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急性感染猪瘟病毒猪体外排毒规律的观察 被引量:3
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作者 刘俊 王琴 +6 位作者 范学政 徐璐 黄伟 汤波 沙莎 陈蕾 周远成 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第4期15-17,共3页
为研究CSFV感染后在体外的传播途径、排毒规律,针对CSFV基因组设计了一对引物和一条探针,建立了一套CSFV荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并以质粒为标准品得到扩增标准曲线。对18个CSFV阳性质控样本检测全阳性,6个CSFV阴性质控样本检测全... 为研究CSFV感染后在体外的传播途径、排毒规律,针对CSFV基因组设计了一对引物和一条探针,建立了一套CSFV荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并以质粒为标准品得到扩增标准曲线。对18个CSFV阳性质控样本检测全阳性,6个CSFV阴性质控样本检测全阴性,显示良好敏感性和特异性。应用此方法对石门株感染的16头60日龄长白猪和1头阴性对照猪的粪便、尿液、眼分泌物和唾液中病毒含量进行了动态测定,结果表明从感染后第1天到频死前第8天,粪便中均能检测出病毒;尿液和眼分泌物至少能从第3天,唾液从第4天开始检测出病毒,且病毒含量呈增加趋势。本研究对急性感染猪瘟病毒猪体外排毒规律进行了系统研究,为弄清CSFV感染病程、致病机理及临床诊断奠定了重要理论基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 排泄物 分泌物 荧光定量PCR
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不同剂量弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答 被引量:3
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作者 申金雁 管志玉 +3 位作者 刘红丽 孟晓丽 王海龙 殷国荣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第3期186-189,共4页
目的观察不同剂量弓形虫排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答,确定适宜免疫剂量。方法40只BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为5组,每组8只。分别用5、10、20和30μgESA滴鼻免疫小鼠2次,间隔1... 目的观察不同剂量弓形虫排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答,确定适宜免疫剂量。方法40只BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为5组,每组8只。分别用5、10、20和30μgESA滴鼻免疫小鼠2次,间隔14d,对照组用20μl/只PBS滴鼻。于末次免疫后第14d,颈椎脱臼处死小鼠,ELISA法检测鼻咽冲洗液和小肠冲洗液sIgA、血清IgG抗体水平,分离并计数肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepitheliallym-phocytes,iIEL)、肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL)及脾淋巴细胞。结果实验期间,小鼠健康状况良好。随鼻内免疫ESA剂量的增加,特异性抗体水平不同程度的升高,MLNL、iIEL及脾淋巴细胞也显示不同程度的增生性应答。其中,30μg组小鼠血清IgG、脾淋巴细胞数量与10μg组、5μg组和PBS组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);30μg组小肠冲洗液sIgA、鼻咽冲洗液sIgA、iIEL和MLNL数量,20μg组小肠冲洗液sIgA和MLNL数量与5μg组及PBS组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);20μg组血清IgG与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论20μg和30μgESA鼻内免疫能有效诱导粘膜及系统免疫应答。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄分泌抗原 鼻内免疫 粘膜疫苗
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Vero细胞无血清培养制备弓形虫排泄-分泌抗原适宜条件的筛选 被引量:2
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作者 吴静 刘娟娟 +3 位作者 殷国荣 孟晓丽 刘红丽 王海龙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第10期903-905,共3页
目的筛选Vero细胞无血清培养制备弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)的适宜条件。方法采用拉丁方析因设计。第一部分:在血清浓度为0.5%、1.0%、2.0%、4.0%的培养基中,共培养Vero细胞与弓形虫速殖子,分别于培养3、6、12、24h时,改为无血清培养基,... 目的筛选Vero细胞无血清培养制备弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)的适宜条件。方法采用拉丁方析因设计。第一部分:在血清浓度为0.5%、1.0%、2.0%、4.0%的培养基中,共培养Vero细胞与弓形虫速殖子,分别于培养3、6、12、24h时,改为无血清培养基,继续培养至第7天,收集培养上清液,制备ESA,并检测蛋白含量。第二部分:在含1.0%血清培养基中共培养Vero细胞与弓形虫速殖子,分别于培养12、24、48、72h时,改为无血清培养基,继续培养至第7、9、11、13天,收集培养上清液,制备ESA,并检测蛋白含量。结果Vero细胞与弓形虫速殖子在1.0%血清浓度培养基中培养12或24h时,无血清培养基继续培养7d,制备的ESA蛋白含量显著高于其他血清浓度(0.5%、2.0%、4.0%)及含血清培养时间(3、6h)。Vero细胞与弓形虫速殖子在含1.0%血清培养基中共培养12、24h,无血清培养基继续培养至第13天,制备的ESA蛋白含量显著高于其他培养时间(48、72h)和无血清培养基继续培养时间(7、9、11d)。结论培养基的血清浓度以及含血清和无血清培养时间是影响体外制备ESA的重要因素。Vero细胞与弓形虫速殖子在1.0%血清浓度培养基中培养12h,无血清培养基继续培养13d,为制备ESA的适宜条件。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 排泄-分泌抗原 VERO细胞 无血清培养
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STAg联合ESA鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用 被引量:3
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作者 王海龙 唐旭 +2 位作者 殷国荣 孟晓丽 马广源 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2008年第4期205-209,共5页
观察弓形虫可溶性速殖子抗原(Soluble tachyzoite antigen,STAg)与排泄-分泌抗原(Excreted/secreted antigens,ESA)单独或联合鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用。分别用PBS 20μL和STAg 20μg、ESA 20μg及联合抗原(STAg 10μg+E... 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(Soluble tachyzoite antigen,STAg)与排泄-分泌抗原(Excreted/secreted antigens,ESA)单独或联合鼻内免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用。分别用PBS 20μL和STAg 20μg、ESA 20μg及联合抗原(STAg 10μg+ESA 10μg)鼻内免疫BALB/c处女鼠2次,间隔2周。末次免疫后第13天处女鼠与雄鼠以2∶1同居。妊娠第8天用弓形虫速殖子(8000个/只)灌胃攻击所有孕鼠。妊娠第18天处死,计算活胎率,并测定孕鼠肝、胎盘和胎鼠脑组织弓形虫抗原和孕鼠脾组织内虫荷,同时测定孕鼠小肠冲洗液SIgA、血清IgG水平。结果表明,ESA组和联合抗原组活胎率显著高于PBS组,STAg组、ESA组和联合抗原组胎盘及胚胎感染率均低于PBS组,联合抗原组最低。孕鼠在弓形虫速殖子攻击后,PBS组明显出现竖毛、倦怠、腹部塌陷等异常表现,感染率为100%,死亡率为22.22%,而STAg组、ESA组和联合抗原组有轻微症状,感染率分别为85.71%、57.14%、57.14%,死亡率分别为16.67%、0%、0%。STAg组、ESA组和联合抗原组脾组织内虫荷均显著低于PBS组,减虫率分别为72.19%、72.29%、78.45%,ESA组和联合抗原组小肠冲洗液特异性SIgA均显著高于PBS组,联合抗原组最高,血清特异性IgG抗体水平差异不显著。由此可见,ESA单独或与STAg联合免疫可诱导孕鼠小肠液高水平SIgA,显著降低脾组织虫荷,显著提高胚胎存活率,表现出明显的垂直传播阻断的作用。 展开更多
关键词 弓形虫 可溶性速殖子抗原 排泄分泌抗原 黏膜免疫 垂直传播
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刚地弓形虫代谢分泌抗原对山羊IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-4表达水平的影响 被引量:2
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作者 芦赟 张燕丽 +5 位作者 曹丽艳 王艳华 苟惠天 付宝权 李文卉 张德林 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期395-400,共6页
为了探索刚地弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)对山羊的免疫保护机制,将山羊随机分为6组,即E/SA组、E/SA+CpG组(未乳化)、E/SA+CpG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CpG组、对照组,每组3只,分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及... 为了探索刚地弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)对山羊的免疫保护机制,将山羊随机分为6组,即E/SA组、E/SA+CpG组(未乳化)、E/SA+CpG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CpG组、对照组,每组3只,分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及感染后第2周采集山羊血清,用ELISA法检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的表达水平。结果显示,各免疫组免疫后IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的含量分别为175.40~215.60、89.95~253.80、230.40~301.50、39.20~54.20pg/mL,而免疫前分别为14.00~18.75、30.91~42.20、10.75~18.30、20.40~24.60pg/mL,对照组分别为16.50~36.56、37.75~58.20、11.50~21.75、21.61~27.60pg/mL,免疫组在免疫后体内IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的含量明显升高,均显著高于对照组(P<0.05)。表明,E/SA可引起IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4水平的升高,说明E/SA免疫后可引起山羊较强的细胞免疫和体液免疫应答。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 代谢分泌抗原 干扰素-Γ 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-2 白细胞介素-4
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刚地弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答 被引量:3
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作者 刘娟娟 殷国荣 +1 位作者 周永安 孟晓丽 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2007年第2期66-69,共4页
目的 观察刚地弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫小鼠后对不同黏膜部位和系统的免疫效应。方法 用Vero细胞培养刚地弓形虫,提取ESA抗原;将5—6周龄BALB/c小鼠随机分为6组,每组10只,实验组分别用培养5、7、9、11和14d提取的ESA20... 目的 观察刚地弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫小鼠后对不同黏膜部位和系统的免疫效应。方法 用Vero细胞培养刚地弓形虫,提取ESA抗原;将5—6周龄BALB/c小鼠随机分为6组,每组10只,实验组分别用培养5、7、9、11和14d提取的ESA20μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔为2周;对照组用无攻虫的细胞培养上清液滴鼻。观察小鼠健康和死亡情况,记录体重。在末次免疫后第3周处死小鼠,分别分离派伊尔结(PP)、脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞(IEL)、肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL),并加以计数。收集粪便和眶血样本,ELISA检测粪内sIgA水平及血清IgG特异抗体。结果 实验期间小鼠健康状况良好,对照组和实验组小鼠体重均不同程度增加;末次免疫后第3周,实验组粪便sIgA、血清IgG、PP细胞、脾淋巴细胞、MLNL、IEL的数量均高于对照组,14d组(P〈0.01)的抗体滴度和各淋巴细胞计数最高。结论 用刚地弓形虫速殖子与Vero细胞共培养5—14d提取的ESA鼻内免疫小鼠均可诱导黏膜及系统特异性的免疫应答,共培养第14天提取的ESA免疫效果优于其他时间组。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 ESA 鼻内免疫 黏膜免疫
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ESA与STAg联合滴鼻免疫小鼠诱导的特异性免疫应答 被引量:2
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作者 刘红丽 管志玉 +2 位作者 殷国荣 马晓明 韩惠瑛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第12期910-912,923,共4页
目的观察弓形虫排泄分泌抗原(ESA)与可溶性速殖子抗原(STAg)联合或单独滴鼻免疫小鼠的免疫应答效果,筛选弓形虫黏膜疫苗候选抗原。方法将40只BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只。实验组分别用20μgSTAg、30μgESA及二抗原联合(15μgESA与1... 目的观察弓形虫排泄分泌抗原(ESA)与可溶性速殖子抗原(STAg)联合或单独滴鼻免疫小鼠的免疫应答效果,筛选弓形虫黏膜疫苗候选抗原。方法将40只BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只。实验组分别用20μgSTAg、30μgESA及二抗原联合(15μgESA与10μgSTAg)滴鼻免疫2次,间隔14d,对照组用PBS以20μl/只滴鼻。于末次免疫后第14天,取血清,收集小肠冲洗液,检测特异性抗体,分离肠上皮内淋巴细胞(iIEL)和脾淋巴细胞并计数。结果整个实验期间,各组小鼠健康状况良好,体重逐渐增加。STAg组、ESA组及联合抗原组小鼠黏膜、血清中特异性抗体水平依次升高,脾淋巴细胞和iIEL增殖反应逐渐增强。联合抗原组和ESA组血清IgG抗体和小肠冲洗液sIgA升高尤为显著。同时,联合抗原组、ESA组脾淋巴细胞和iIEL增生显著高于对照组。结论ESA单独或联合STAg滴鼻免疫小鼠均能激发弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答。两种抗原联合免疫的研究,将有助于制定更加完善的弓形虫疫苗研究策略。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄分泌抗原 可溶性速殖子抗原 联合抗原 鼻内免疫 黏膜免疫
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弓形虫排泄/分泌抗原的免疫保护性研究进展 被引量:4
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作者 吴静 殷国荣 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2006年第6期309-312,共4页
弓形虫排泄/分泌抗原(ESA)是虫体在黏附、侵入宿主细胞及在纳虫泡中寄生过程中分泌、排泄的抗原物质。近期的研究主要通过体外培养法获取ESA,并对其进行分子生物学及免疫学特性研究。ESA中的多种成分具有较强的免疫原性,可诱导细胞及体... 弓形虫排泄/分泌抗原(ESA)是虫体在黏附、侵入宿主细胞及在纳虫泡中寄生过程中分泌、排泄的抗原物质。近期的研究主要通过体外培养法获取ESA,并对其进行分子生物学及免疫学特性研究。ESA中的多种成分具有较强的免疫原性,可诱导细胞及体液免疫应答并产生抗弓形虫感染的保护作用。研究ESA的免疫保护作用对揭示弓形虫带虫免疫及免疫逃避机制有重要意义,对弓形虫病的诊断及免疫预防、疫苗候选抗原的制备具有重要价值。 展开更多
关键词 弓形虫 排泄分泌抗原 保护性免疫
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利用弓形虫病人血清筛选弓形虫速殖子特异性抗原 被引量:1
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作者 张影 张瑾 +3 位作者 杨英超 薄淑英 辛晓芳 王国治 《中国药事》 CAS 2011年第6期550-553,共4页
目的筛选能引起人体免疫反应的弓形虫抗原标记。方法利用实验室保存的9份弓形虫病人血清标准品、6份阴性血清标准品,以及2份弓形虫病人血清国际标准品作为一抗,分别与刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的可溶性速殖子抗原(soluble tach... 目的筛选能引起人体免疫反应的弓形虫抗原标记。方法利用实验室保存的9份弓形虫病人血清标准品、6份阴性血清标准品,以及2份弓形虫病人血清国际标准品作为一抗,分别与刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)进行免疫印迹反应。结果发现STAg中有10条蛋白带与所用阳性血清均发生免疫反应;ESA中有4条蛋白带能与所有阳性血清发生免疫反应,这些蛋白与阴性血清均不发生免疫反应。其中分子量为30、35、49、50、54kDa的STAg抗原以及分子量为23、24、28kDa的ESA抗原能与所用阳性血清发生较强免疫反应。结论本实验结果将有助于寻找在弓形虫病人体内能够引起免疫反应的弓形虫诊断抗原和免疫保护性抗原,为弓形虫诊断试剂以及疫苗开发奠定初步基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 可溶性速殖子抗原 排泄-分泌抗原 血清标准品 免疫印迹
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伊氏锥虫排泄分泌抗原用于免疫预防的初步研究
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作者 谢超 孙恩贵 +2 位作者 刘俊华 王祥生 杨发青 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期87-89,共3页
以不同剂量的伊氏锥虫排泄分泌抗原(ESA)对小鼠进行常规免疫,用同株伊氏锥虫攻击,观察并记录小鼠死亡时间、死亡只数,比较免疫后血清抗体水平。结果表明:除对照组和5μg组未产生特异性抗体外,其余各组均产生较高滴度的抗体... 以不同剂量的伊氏锥虫排泄分泌抗原(ESA)对小鼠进行常规免疫,用同株伊氏锥虫攻击,观察并记录小鼠死亡时间、死亡只数,比较免疫后血清抗体水平。结果表明:除对照组和5μg组未产生特异性抗体外,其余各组均产生较高滴度的抗体,其中200μg组为1∶6400,100μg组为1∶3200。ESA50,100和200μg免疫组可对小鼠产生有效的保护,小鼠存活时间较对照组延长2~3倍。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 排泄分泌抗原 抗原 免疫原性
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