凹叶厚朴大、小孢子发生和雌、雄配子体发育的研究

凹叶厚朴花药四囊型,腺质绒毡层有1-2层细胞,小孢子形成时胞质分裂方式为修饰性同时型．小孢子四分体排列方式为左右对称型,成熟花粉粒为二细胞型。四分体和小孢子在发生时有不规则变形。子房单心皮。心皮腹面壁上着生2个胚珠,胚珠倒生型,厚珠心,双珠被;抱原细胞一个,并且自表皮下第2层细胞处分化。胚囊发育为单孢蓼型。凹叶厚朴的胚胎学特征与木兰科其它植物的胚胎学特征基本相同,属于较原始的被子植物胚胎类型。在凹叶厚朴大、小孢子发生和雌、雄配子体发育过程中存在部分败育现象。本文初步探讨了凹叶厚朴濒危的生殖生物学原因。

厚朴DNA分子标记的研究——正品的RAPD研究

目的 利用RAPD技术探讨厚朴种内关系、道地性问题 ;寻找正品厚朴DNA指纹特征。方法 选择代表厚朴主要分布区的 11个产地 33个的个体材料作为样本 ,经DNA提取 ,用 74个随机引物进行PCR扩增。结果 从17个引物中得到 116条带 ,用于种内关系探讨 ,经聚类分析 ,得到 3个主要分支及反映正品种及优良品种的特异性引物和条带。结论 (1)将厚朴分为 3个地理宗更合适 ,分别是 :典型的厚朴、典型的凹叶厚朴及中间类型 ,这与叶的形态等性状一致 ;(2 )“川朴”及“温朴”有明显的遗传分化 ,且与有效成分相关 ,故厚朴的道地性主要来源于遗传差异 ;(3)

凹叶厚朴种子休眠与萌发特性的研究

用组织切片法对凹叶厚朴种子胚形态结构的观察、种皮透水性的测定、种子不同部位浸提液的生物测定,初步探讨了凹叶厚朴种子的休眠原因.结果表明:凹叶厚朴种子的胚已分化完全;内种皮有阻碍种子吸水的作用;外种皮和中种皮以及胚乳存在较多的发芽抑制物质.对凹叶厚朴种子的萌发试验表明,用1 500 mg/L赤霉素(GA3)浸种后低温层积处理是解除休眠、促进萌发的最佳方法,种子发芽率可达72%,比单独低温层积处理提高了17%.

凹叶厚朴细弱枝与粗壮枝导管分子的比较研究

对凹叶厚朴粗壮枝和细弱枝的次生木质部进行离析研究,发现其导管穿孔板有两种类型,即单穿孔板和梯状穿孔板。在细弱枝中,具不同类型穿孔板的导管分子有八种类型,即一端为单穿孔板的导管分子,另一端为梯状穿孔板的导管分子;只有一端为单穿孔板的导管分子;只有一端为梯状穿孔板的导管分子;两端均为单穿孔板的导管分子;两端均为梯状穿孔板的导管分子;具三个单穿孔板的导管分子;两端具单穿孔板的导管分子,中间具多个梯状穿孔板的导管分子;具多个梯状穿孔板的导管分子。粗壮枝除了无具多个梯状穿孔板的导管分子外,其它细弱枝的导管分子的类型都具有。细弱枝的导管分子宽而长,粗壮枝导管分子窄而短。

凹叶厚朴粗壮枝和细弱枝的树皮和韧皮部结构的比较研究

凹叶厚朴的树皮由外向内为周皮、皮层、初生韧皮部的纤维束和次生韧皮部。筛管分子具有复筛板或单筛板、P—蛋白质 ,筛板孔开放 ,可见联络索 ,无淀粉粒。伴胞为与筛管分子等长的一列或单个细胞。粗壮枝周皮的木栓层约 6层细胞组成 ,皮层中油细胞、淀粉粒、石细胞较多。细弱枝周皮的木栓层约 3层细胞组成 ,皮层中油细胞、淀粉粒、石细胞较少。粗壮枝和细弱枝筛管分子宽度相当 ,但前者筛管分子较长 ,筛管蛋白质较多 ,后者筛管分子较短 ,筛管蛋白质较少。

凹叶厚朴离体培养初探

为了建立优质凹叶厚朴的离体快繁再生体系,分别对凹叶厚朴茎段外植体的消毒条件、腋芽诱导培养两个方面进行了初步研究,结果表明:最佳消毒条件为70%C2H5OH处理60 s,HgCl2处理12 min;最佳腋芽诱导配方为B5+NAA 0.05 mg.L-1+6-BA 1.0 mg.L-1,腋芽诱导率可达55%。

濒危植物凹叶厚朴幼苗更新及环境解释

凹叶厚朴为我国二级保护野生植物,由于其较高的药用价值,野生资源遭到无节制的盗砍,造成种群数的衰退和群落残败。调查浙江省遂昌县桂洋林场不同群落野生凹叶厚朴的更新状况,结果表明:凹叶厚朴种群大小级为不典型的"J"型,种群在较长的时间内保持稳定状态;凹叶厚朴以萌生更新为主,随着群落郁闭度的增加,萌生苗的比例增高,但不同群落平均萌枝数量、平均胸径及株高无显著差异。实生苗随着郁闭度的增加植株呈现变矮、变细的趋势;凹叶厚朴实生和萌生苗在不同群落中年龄结构差异均极大,针阔叶混交林中更新良好,针叶林大量高龄幼苗生长缓慢,且植株不易进入上层空间,常绿阔叶林中存在严重的更新不良现象;各群落中,更新幼苗株高和胸径增长量均随郁闭度的增加呈现极显著下降的趋势,其中实生苗的下降趋势更为明显;影响实生更新的主要环境因子为草本层盖度和厚度、枯落物盖度、腐殖质厚度及土壤含水率;影响种群萌生更新的主要环境因子为群落的光照及温湿度。因此,降低上层林冠密度,减少草本层、枯落物等的覆盖对于维持种群的发展、缓解其濒危状况具有重要的意义。

凹叶厚朴树体厚朴酚、和厚朴酚含量变化模型的研究

为了研究凹叶厚朴树厚朴酚、和厚朴酚的积累分布规律,以10年生凹叶厚朴为试验材料,建立了凹叶厚朴树体解析木高度与厚朴酚、和厚朴酚及树皮厚度含量的数学模型。结果表明:解析木高度与总酚含量、厚朴酚含量、和厚朴酚含量关系最优模型依次为y=─0.053 636x3+0.665 503x2─2.543 869x+3.964 848,y=─0.008939x3+0.110 233x2─0.419 464x+0.693 864,y=─0.044 697x3+0.555 271x2─2.124 405x+3.270 985;树体解析木高度与树皮厚度关系最优模型为y=─0.008 965x3+0.031 331x2─0.143 492x+4.941 212,可用于凹叶厚朴树体厚朴酚、和厚朴酚含量的预测,为科学采收厚朴皮提供了理论依据。

不同树龄三种厚朴中厚朴酚与和厚朴酚含量的研究

在依据树皮年轮鉴定厚朴年龄的基础上,应用高效薄层扫描法,对不同生长年限的厚朴、凹叶厚朴、大叶木兰中所含厚朴酚、和厚朴酚的动态分布进行了含量测定,为道地药材的质量评价及合理采收提供了参考。

凹叶厚朴愈伤组织的超低温保存

采用单因子比较和均匀设计法，研究凹叶厚朴（Magnoliabiloba（RehdetWils）Cheng）愈伤组织超低温（－196℃）保存的影响因素。结果表明：超低温保存的适宜材料是4周龄的愈伤组织。经4～6℃低温下预培养12天的愈伤组织抗冻能力最强。较好的冷冻保护剂是12．5％DMSO＋5％Suc＋0．25％LH。较佳的冷冻程序是以0．5℃／min的降温速度从0℃降到－30℃，停留1h，然后浸入液氮中贮存。30℃水浴中化冻与自来水流水（18．5±1℃）冲洗化冻效果一样良好。化冻后的愈伤组织在黑暗中培养生长较好，存活率高。

凹叶厚朴不同林分树干生长规律研究

2012年在福建明溪县胡坊镇选取4种厚朴林分进行调查，对平均木采用树干解析法取样，对凹叶厚朴与杉木、绿竹和油茶混交及其纯林的生长规律进行研究。结果表明，凹叶厚朴混交林胸径连年生长量达到最大值的时间（第3年）比纯林早1 a，树高连年生长量（第2年）早3 a，材积连年生长量（第8～9年）早3 a，在前10 a混交林的胸径、树高、材积平均生长量（平均值分别约为1.23 cm、1.42 m、0.0037 m3）始终比纯林（分别约为0.81 cm、1.00 m、0.0027 m3）大；且3种混交林直径、树高和材积的连年生长量和平均生长量达到最大值的时间一致，但数值存在差异：厚杉＞厚竹＞厚油混交林，说明凹叶厚朴与杉木混交能很好地促进凹叶厚朴的生长，混交效果最好，其次为凹叶厚朴绿竹混交林，再次为凹叶厚朴油茶混交林，最差的为凹叶厚朴纯林。

不同树龄凹叶厚朴7种次生代谢产物积累研究

目的:建立研究同一地域来源、不同树龄的凹叶厚朴7种次生代谢产物质量分数变化,为确定凹叶厚朴最佳采收条件提供参考依据.方法:利用高效液相色谱法(HPLC)对绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、和厚朴酚与厚朴酚进行分离,并建立标准曲线及回归方程.分析随着树龄的增加,其叶、枝皮、茎皮和根皮中7种次生代谢产物质量分数积累情况.结论:不同树龄的凹叶厚朴叶片、枝皮、茎皮和根皮中7种代谢产物质量分数随着树龄积累差异较大,绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素等主要存在于在树龄相对较小的叶片和枝皮中,随着树龄从7年增加至26年其积累变化不明显;厚朴酚与和厚朴酚主要分布于凹叶厚朴的树皮中,其中根皮质量分数最高,茎皮、枝皮次之;7至13年树龄的植株,其厚朴酚与和厚朴酚积累量随树龄增加而明显增加,13至26年树龄的植株随树龄增加二者积累量增幅不大.因此,凹叶厚朴的最适采收对象是树龄超过13年之后的植株.

闽产厚朴的质量研究

本文报道了闽产厚朴中有效成分厚朴酚、和厚朴酚的积聚动态与其树龄、树径、生长部位的关系,为厚朴的采收、质量控制、临床使用提供了实验依据。

凹叶厚朴扦插繁殖的生根机理研究

为了探索凹叶厚朴扦插生根的方法及其生根机理,促进凹叶厚朴优良无性系的快速推广栽培。以半木质化枝条为插条,依据单因素试验结果,设计L9(34)正交试验,优化扦插生根配方;定期采集插条下段,测定其韧皮部内的营养物质的含量及氧化酶的活性变化;定期采集插穗下部制作石蜡切片,观察生根部位及发生过程。凹叶厚朴的最佳扦插生根配方为:以泥炭土:珍珠岩:黄沙(1:1:1)为基质,用KIB A1000mg/L浸泡30min,生根率可达94.4%;生根过程中,用KIBA浸泡的插条与对照相比,其内的营养物质含量及PPO及POD活性的变化规律相同,但试验组各项峰值到达的时间比要对照早10天,对应的生根时间也早10天;PPO及POD活性最高值达到时间与生根时间相符;凹叶厚朴的不定根产生有潜伏型根原基和诱导型根原基两种类型,潜伏型根原基存在于幼茎的皮层外方,诱导型根原基存在于皮层叶隙维管束的外方,不定根的形成主要以诱导型根原基为主。

凹叶厚朴离体胚培养的研究

为了满足市场的资源需求,建立优质凹叶厚朴离体再生体系,为凹叶厚朴工厂化生产提供理论依据,以优质凹叶厚朴离体胚为外植体,以B5为基本培养基,6-BA、NAA、消毒时间为因素,采用L9(33)正交设计,进行无菌苗培养优化试验。结果表明:最佳消毒方法为0.1%升汞浸泡8 min,污染率为12.6%,外植体生长良好;最佳组合为B5+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+消毒时间8 min,发芽率高达87%。

凹叶厚朴内生真菌研究初报

从凹叶厚朴(Magnolia officinalissubsp.biloba)根、茎、叶中分离获得内生真菌共计28株,经形态观察,鉴定出13个属。研究表明凹叶厚朴不同部位内生真菌的数量、分布、种群及其组成存在差异。

施肥、修剪等措施对凹叶厚朴中厚朴酚、和厚朴酚含量累积的影响

目的:提高凹叶厚朴的品质,缩短生产周期,为凹叶厚朴种植提供科学参考依据。方法:本次实验通过采用施肥、修枝、环割、铁丝环扎对凹叶厚朴进行处理,采用HPLC测定两年后厚朴中厚朴酚、和厚朴酚的含量,计算总酚含量增长率。结果:凹叶厚朴中总酚含量累积增长(Y)与肥料中的氮肥、磷肥正相关,与钾肥负相关,回归方程为:Y=1.804+2.470N+2.746P-15.616K(r=0.982)。修枝处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增长了310%,环割处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了125.65%,铁丝环扎处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了343.2%,而同期的空白组中凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了84.62%。实验结果显示不同栽培措施的效果由大到小的顺序是:铁丝环扎>修枝>环割。结论:凹叶厚朴中厚朴酚、和厚朴酚含量的积累可以通过改变土壤的肥力、环割、修枝等栽培措施得以提高。

厚朴苗根腐病的病原菌鉴定

经病原菌分离培养、致病性测定、形态特征观察及专化型试验结果表明,厚朴苗根腐病由尖镰孢霉内的一个新的专化型(Fusarium oxysporum Schlecht f. sp. magnoliae)为害所致。

凹叶厚朴杉木混交林生物量及分布格局研究

应用平均标准木法和样方收获法对凹叶厚朴杉木混交林各经营模式林分的生物量、生物量组成及分布的研究结果表明：不同经营模式的林分中，以行间混交的生物量及生产力最高， 分别为７４．９６ ｔ／ｈｍ ２ 和６．２５ｔ／ （ ｈｍ ２·ａ）； 混交林各经营模式的营养空间分布均比杉木纯林合理。

凹叶厚朴叶总黄酮纯化工艺研究

[目的]研究凹叶厚朴叶总黄酮纯化工艺。[方法]采用大孔树脂纯化方法,考察大孔树脂静态和动态吸附对凹叶厚朴总黄酮纯度的影响,并比较凹叶厚朴叶总黄酮纯化前后的总黄酮纯度及其DPPH和ABTS体外模型的抗氧化活性。[结果]确定最佳型号大孔树脂为HPD722大孔树脂,其对凹叶厚朴叶总黄酮具有较好的纯化作用,最佳纯化工艺为上样液浓度为0.12 g/m L,以2 BV/h上样,上样体积为5.5倍柱体积,用3.5倍柱体积10%乙醇除去杂质,再用4倍柱体积50%乙醇洗脱。凹叶厚朴叶总提物经HPD722大孔树脂纯化后总黄酮纯度由原来的27.44%提高到61.67%,且清除DPPH自由基能力纯化后[IC50为(19.97±0.85)mg/L]较纯化前[IC50为(44.88±1.31)mg/L]强,清除ABTS自由基能力纯化后[IC50为(169.78±0.99)mg/L]较纯化前[IC50为(592.2±13.14)mg/L]也得到提高。[结论]HPD722大孔树脂可以作为凹叶厚朴叶总黄酮纯化的吸附剂,为凹叶厚朴叶总黄酮资源开发提供依据。