厚朴中总鞣质提纯工艺及抗菌活性研究

通过响应面设计优化厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils.)中总鞣质的提取工艺,并进一步纯化。结果表明,厚朴中总鞣质的最佳提取工艺为料液比1∶13、提取时间100 min、乙醇浓度80%、超声功率80 W,厚朴总鞣质提取量为0.1810 mg/g,与理论值0.1888 mg/g差距小。利用正交试验考察明胶溶液沉淀法对厚朴总鞣质的最佳纯化工艺为浓缩液比重1.5 mg/mL、明胶溶液浓度4%、明胶溶液添加量8 mL/100 mg,厚朴总鞣质提取量为2.743 mg/g。利用最小抑菌浓度测定法比较总鞣质对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抗菌活性,表明厚朴中总鞣质具有一定的抗菌活性。

凹叶厚朴与厚朴的挥发油成分和体外抑菌活性比较分析

试验旨在对比研究凹叶厚朴与厚朴挥发油的化学组成及抑菌活性。挥发油通过水蒸气蒸馏法提取,采用气相色谱-质谱(GC-MS)对凹叶厚朴与厚朴挥发油成分进行分析和鉴定,运用峰面积归一化法确定各成分的含量,使用比浊法研究凹叶厚朴与厚朴挥发油对金黄色葡萄球菌的体外抑制作用。GC-MS结果显示,两种挥发油中芳樟醇、α-松油醇、α-桉叶醇、β-桉叶醇等12种共有成分在凹叶厚朴中的含量大于厚朴,合计占各自挥发油含量的58.25%、46.02%。抑菌试验结果表明,凹叶厚朴与厚朴挥发油对10种金黄色葡萄球菌均具有抑制作用,其中凹叶厚朴对ATCC25923等8种菌的抑菌效果显著优于厚朴。研究表明,试验结果可为中草药添加剂的开发应用及抑菌剂的研发提供一定参考。

高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚

建立了高速逆流色谱分离制备厚朴的有效成分厚朴酚与和厚朴酚的新方法,溶剂系统为石油醚乙酸乙酯甲醇1%醋酸(5∶5∶7∶3,V/V),上相为固定相,下相为流动相。从100mg厚朴粗提物制得和厚朴酚33.3mg,厚朴酚19.5mg,经高效液相色谱分析,纯度均大于99.5%,其化学结构由1HNMR和13CNMR鉴定。

湖北恩施产厚朴ISSR指纹图谱构建

目的:构建湖北恩施产厚朴的ISSR指纹图谱。方法:采用ISSR标记技术对厚朴基因组DNA进行PCR扩增。结果:2个ISSR引物即可构建恩施产厚朴的ISSR指纹图谱。引物ISSR826的扩增产物中可见构建恩施产的厚朴特征带,分子量为950 bp及550 bp。结论:ISSR标记技术可用于区分厚朴药材产地和品种。

凹叶厚朴中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的成分

凹叶厚朴是四川省人工栽种的一种用途广泛的常用中药.在发现凹叶厚朴乙醇提取物具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性基础上,通过活性跟踪,对该提取物进行了分离,发现其中的生物碱显示了较强的抑制活性.通过溶剂萃取、树脂吸附和反复硅胶柱层析等分离方法从凹叶厚朴乙醇提取物中分离得到6个生物碱,用质谱和核磁共振等波谱方法分别鉴定为木兰箭毒碱,木兰花碱,鹅掌楸碱,蕃荔枝碱,罗默碱和Lysicamine,并应用小肠α-葡萄糖苷酶模型测定了它们对α-葡萄糖苷酶的抑制作用.其中,番荔枝碱和木兰箭毒碱的抑制活性较好,分别为60%和62%;其它4个生物碱成分活性几乎相当,鹅掌楸碱为46%,罗默碱为51%,Lysicamine为49%,木兰花碱为51%.

四川规模化栽培区产厚朴有效成分含量的影响因素研究

目的:研究厚朴有效成分含量与胸径、树高、树皮厚、海拔、经度之间的关系,为厚朴良种选育提供理论基础。方法:以四川西南地区规模化栽培区产厚朴的树皮为研究对象,采用HPLC法检测厚朴酚与和厚朴酚含量,比较不同地区间的质量差异,同时统计分析影响厚朴有效成分含量的关键因素。结果:5个栽培区产厚朴的厚朴酚含量在1.72%~2.70%之间,和厚朴酚含量在1.42%~3.23%之间,总酚含量最高的地区为都江堰(5.16%),最低的地区为汶川(3.69%);厚朴有效成分含量与其胸径、树高、树皮厚、海拔、经度均具有一定相关性。结论:四川西南地区规模化栽培区产厚朴品质较好,其有效成分含量较高;厚朴总酚含量与胸径、树高、树皮厚呈正相关;厚朴酚与海拔呈正相关,和厚朴酚与海拔、经度呈负相关。

厚朴内生真菌的研究(Ⅰ):菌种分离及其鉴定

从两个不同来源的厚朴Magnolia officinalisRehd.etW ils.的茎中,分离获得内生真菌48株,经显微形态观察,鉴定为1纲、3目、6科、16属。不同来源的厚朴内生真菌的种群、数量及分布部位存在显著差异。

川厚朴愈伤组织培养的初步研究

采用川厚朴顶芽、茎段、叶柄、叶片为外植体,采用正交设计研究不同激素及浓度组合对外植体的影响,筛选出最佳启动培养基为B5+2,4 D3 0mg·L-1(单位下同)+NAA0 5mg·L-1。川厚朴顶芽为最佳取材外植体。继代培养基配方为B5+2,4 D3 0mg·L-1+NAA0 1mg·L-1。

厚朴过氧化物酶的纯化、性质及清除双酚A特性研究

厚朴为鄂西南道地药材,其药用部位主要为干皮和枝皮,在其漫长生长过程中产生的大量叶片不能实现经济价值;我们前期研究发现厚朴叶片具有较高过氧化物酶活性,而过氧化物酶在酚类物质生物降解途径中能够发挥重要作用。为充分开发厚朴叶的经济价值,进一步提高资源综合利用效率,我们对厚朴叶过氧化物酶进行了纯化并初步研究了其性质;在此基础上,进一步研究了厚朴叶过氧化物酶在降解环境污染物双酚A上的特性。结果显示,经过硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析,从厚朴叶中分离提纯过氧化物酶,纯化倍数为52.8倍,回收率为14%。该酶的比活力为184140 U/mg蛋白,最适p H为6.0,对H_2O_2的Km值为4.23mmol/L,对愈创木酚的Km值为57.86 mmol/L,最适温度为80℃,热稳定性较好,75℃以下不易失活。其活性受到硫酸亚铁明显抑制。厚朴叶POD对BPA具有良好清除能力,在p H 4～9,温度25～65℃,H_2O_2/BPA浓度之比为0.8条件下,经过3 h,4000 U/L POD对0.2 mmol/L BPA清除率可达95%以上,MLP在酚类物质生物降解途径中具有潜在的重大利用价值。

基于GIS的全国厚朴质量适宜性研究

目的:通过对厚朴中的厚朴酚、和厚朴酚含量及其比值与产地生态因子之间的相关性考察,进行全国厚朴质量适宜性等级划分,为确定厚朴的优质药材种植区提供科学依据。方法:对全国43个样点的厚朴药材进行质量分析,利用统计方法分析厚朴的酚含量及其比值与影响因子之间的关系;应用地理信息系统进行全国厚朴质量适宜性等级划分。结果:十月降水量、海拔、十一月降水量等12个生态因子是影响厚朴质量的主要生态因子;厚朴酚与和厚朴酚比值具有明显的区域质量特征。结论:湖北和重庆是厚朴的道地产区。

厚朴多糖提取工艺及其体外抗氧化活性

通过Box-Behnken试验优化提取厚朴多糖的工艺;以超氧阴离子自由基、1,1-二苯基-二苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和2,2’-连氮基-双-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS+·)清除能力,Fe2+螯合力、铁离子还原抗氧化力(ferric reducing antioxidant power,FRAP)为指标,探究厚朴多糖的体外抗氧化活性。结果表明,提取厚朴多糖的最佳工艺条件为p H 7.3、液固比32∶1(m L/g)、提取温度78℃、提取时间139 min,此条件下多糖提取率达3.35%~3.52%。体外抗氧化活性结果表明,厚朴多糖超氧阴离子自由基清除力为(18.72±2.12)μmol·VC/mg,DPPH自由基清除能力达(0.59±0.05)μmol Trolox/mg,ABTS+·清除能力为(0.57±0.04)μmol Trolox/mg,Fe2+螯合力为(0.38±0.02)μmol·EDTA/mg,FRAP值为(2.19±0.31)μmol Trolox/mg。

不同遮光处理对平茬后厚朴萌蘖株部分形态及生理指标的影响

以自然光照(遮光率0.0%)为对照,对遮光率20.0%、52.5%和78.6%条件下平茬后厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils)萌蘖株的部分形态和生理指标进行比较。结果表明:随遮光率提高,3个遮光处理组萌蘖株的株高呈现逐渐增大的趋势,萌蘖株叶中的叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素和总叶绿素含量也基本上呈现逐渐增大的趋势,但萌蘖株的地径却呈现逐渐减小的趋势。萌蘖株的冠幅,单桩的萌蘖株数、叶片总数和叶芽总数,叶长和叶宽,单叶的干质量和叶面积,叶中叶绿素a含量与叶绿素b含量的比值(Chla/Chlb)和可溶性糖含量均在遮光率52.5%条件下最大,但仅冠幅、单桩叶片总数、单叶面积和叶中可溶性糖含量显著大于对照,分别较对照增加156.21%、28.18%、129.02%和64.31%;并且,多数指标在遮光率20.0%条件下居中、在遮光率78.6%条件下最小。然而,萌蘖株的叶长宽比、比叶质量及叶的相对含水量和可溶性蛋白质含量则在遮光率52.5%条件下最小,但仅比叶质量显著小于对照,较对照减少37.43%;并且,多数指标在遮光率20.0%条件下居中、在遮光率78.6%条件下最大。研究结果显示:适当的遮光处理能够促进平茬后厚朴萌蘖株的生长,遮光率52.5%为最优的遮光处理条件。

不同花期厚朴雌雄蕊和花瓣香气组成成分的分析和比较

采用固相微萃取和GC-MS技术,对初花期、展瓣期、盛花期和盛花末期厚朴(Magnolia officinalis Rehd.etWils.)雌雄蕊和花瓣香气的组成成分及其相对含量进行了分析和比较。结果表明:不同花期厚朴雌雄蕊和花瓣香气的组成成分及其相对含量差异明显。雌雄蕊和花瓣香气分别含有52和37种成分,总计67种;其中,1-甲氧基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯、1-香叶基乙醚、D-柠檬烯、莰烯、月桂烯和石竹烯等成分的相对含量均较高。初花期、展瓣期、盛花期和盛花末期雌雄蕊香气分别含有26、26、27和24种成分,花瓣香气则分别含有22、19、16和21种成分;不同花期雌雄蕊和花瓣香气的共有成分为1-甲氧基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯、D-柠檬烯和石竹烯。不同花期厚朴雌雄蕊和花瓣香气成分可分为萜烯类、醇类、芳香烃类、醚类、醛酮类、酯类、烷烃类和含氮类8类,共有类型为萜烯类和醇类,其中,萜烯类是主要组成成分。厚朴雌雄蕊和花瓣在不同花期均释放出较多的萜烯类化合物,其相对含量随着花的发育呈先升高后降低的趋势。根据感官分析与GC-MS分析结果综合判断:萜烯类化合物是组成厚朴花香气的重要成分;花瓣是香气释放的主要部位,而雌雄蕊则在香气释放过程中起辅助作用。

厚朴的任意引物PCR指纹图谱分析

目的 鉴别中药材厚朴、凹叶厚朴及其常见的伪品和混淆品。方法 采用任意引物 PCR (arbitrarilyprim ed PCR,AP- PCR)技术扩增植物基因组 DNA样品。结果 AP- PCR技术获得清晰可靠的 DNA指纹图谱 ,根据琼脂糖凝胶上显示的 DNA带型差异可迅捷地区分厚朴、凹叶厚朴及其伪品、混淆品。结论 为应用 AP- PCR技术在分子水平上鉴别中药材厚朴 ,保证引种的准确性奠定了基础。

基于代谢组学的厚朴与枳实配伍减毒机制分析

目的利用1H NMR为基础的代谢组学研究厚朴及厚朴配伍枳实的肝肾毒性。方法 18只大鼠随机分成3组:空白组、厚朴组和厚朴枳实组。以1H NMR为基础的代谢组学分析空白组、厚朴组和厚朴枳实组大鼠尿液和血清样品代谢轮廓,同时进行肝、肾组织病理学检查。结果厚朴组和空白组样品代谢轮廓具有明显差异,厚朴枳实组的代谢轮廓同空白组样品接近,肝、肾组织病理学检查同时证实了数据分析。结论厚朴与枳实配伍使用能够有效减少厚朴对肝肾所产生的毒性。

厚朴离体叶片衰老过程的生理生化测定

随着厚朴叶片离体衰老时间的延长,蛋白质,叶绿素含量明显下降,质膜透性增加。与自由基代谢有关的超氧物歧化酶活性在叶片衰老过程中不断下降,表明自由基代谢失调引起的膜脂过氧化的加剧是厚朴叶片衰老的重要原因之一。高温加速厚朴叶片的衰老进程,而营养液则延缓了厚朴叶片的衰老。

5种不同产地厚朴挥发油化学成分的GC-MS分析

[目的]分析比较不同产地厚朴的挥发油成分,为厚朴的应用提供参考。[方法]采用水蒸气蒸馏法提取厚朴挥发油,运用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对挥发油成分进行分离鉴定,并采用面积归一化法确定各成分的相对百分含量。[结果]从5种不同产地厚朴的挥发油中共鉴定出80个化学成分,有18种成分为5个产地共有。[结论]不同产地厚朴挥发油的含量及化学成分组成有较大的差别。

不同树龄凹叶厚朴7种次生代谢产物积累研究

目的:建立研究同一地域来源、不同树龄的凹叶厚朴7种次生代谢产物质量分数变化,为确定凹叶厚朴最佳采收条件提供参考依据.方法:利用高效液相色谱法(HPLC)对绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、和厚朴酚与厚朴酚进行分离,并建立标准曲线及回归方程.分析随着树龄的增加,其叶、枝皮、茎皮和根皮中7种次生代谢产物质量分数积累情况.结论:不同树龄的凹叶厚朴叶片、枝皮、茎皮和根皮中7种代谢产物质量分数随着树龄积累差异较大,绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素等主要存在于在树龄相对较小的叶片和枝皮中,随着树龄从7年增加至26年其积累变化不明显;厚朴酚与和厚朴酚主要分布于凹叶厚朴的树皮中,其中根皮质量分数最高,茎皮、枝皮次之;7至13年树龄的植株,其厚朴酚与和厚朴酚积累量随树龄增加而明显增加,13至26年树龄的植株随树龄增加二者积累量增幅不大.因此,凹叶厚朴的最适采收对象是树龄超过13年之后的植株.

湖北恩施产厚朴叶形变化与药材质量的关系初探

目的:探索湖北恩施产厚朴叶形变化与药材质量的关系。方法:采用高效液相色谱法测定厚朴酚、和厚朴酚含量,流动相为甲醇-水(78∶22),检测波长为294 nm。结果:叶先端凸尖者、叶片短小者,厚朴叶的酚含量通常较高;在一定年限之内,树皮较厚者,厚朴皮的酚含量较高。结论:湖北恩施产厚朴叶形变化与叶自身酚含量的高低直接相关,与药材质量关联性不强。

凹叶厚朴扦插繁殖的生根机理研究

为了探索凹叶厚朴扦插生根的方法及其生根机理,促进凹叶厚朴优良无性系的快速推广栽培。以半木质化枝条为插条,依据单因素试验结果,设计L9(34)正交试验,优化扦插生根配方;定期采集插条下段,测定其韧皮部内的营养物质的含量及氧化酶的活性变化;定期采集插穗下部制作石蜡切片,观察生根部位及发生过程。凹叶厚朴的最佳扦插生根配方为:以泥炭土:珍珠岩:黄沙(1:1:1)为基质,用KIB A1000mg/L浸泡30min,生根率可达94.4%;生根过程中,用KIBA浸泡的插条与对照相比,其内的营养物质含量及PPO及POD活性的变化规律相同,但试验组各项峰值到达的时间比要对照早10天,对应的生根时间也早10天;PPO及POD活性最高值达到时间与生根时间相符;凹叶厚朴的不定根产生有潜伏型根原基和诱导型根原基两种类型,潜伏型根原基存在于幼茎的皮层外方,诱导型根原基存在于皮层叶隙维管束的外方,不定根的形成主要以诱导型根原基为主。