MDS基因突变及三种剂量DAC联合预激方案治疗的疗效观察

目的 探讨MDS细胞分子遗传学临床特点及三种剂量DAC联合预激方案治疗的疗效。方法 采用WHO-MDS诊断分型标准,用G/R显带染色体分析;NGS二代测序突变基因;三种不同剂量DAC联合预激化疗方案治疗中高危MDS患者86例,A组(DAC20mg/m^(2)),B组(DAC15mg/m^(2)+CAG),C组(DAC15mg/m^(2))。结果 在86例MDS患者中,共检测到55(63.95%)例基因突变。共检测到26种基因突变类型。分别是:FLT3,TET2,CEBPA,NPM1,RUNX1,STAG2,IDH2,DNMT3A,WT1,EZH2,GATA2,IKZF1,ASXL1,NRAS,SRSF2,RAD21,TP53,CSF3R,IDH1,ETV5,SMC3,AML1-ETO,SF3B1。前5位的基因是:TET2,DNMT3A,ASXL1,SF3B1,NRAS。治疗方案完成≥2疗程患者占94.2%;有效率:A组(93.3%),B组(96.4%),C组(92.8%);ORR 80.8%。完成≥4疗程患者例占84.8%:有效率:A组(86.7%),B组(85.7%),C组(82.1%);ORR 84.9%。A、B、C 3组间有效率χ2检验无显著性差异(P>0.05)。结论 三种不同剂量地西他滨组合方案均可用于中高危MDS患者。根据患者体能状况评分系统选择个体化治疗中高危MDS更为重要。

敲除Attractin或Mahoganoid基因对雄性小鼠生殖内分泌激素的影响

目的:探讨敲除Attractin(Atrn)或Mahoganoid(Md)基因对雄性小鼠生殖内分泌激素的影响。方法:选取成年雄性Atrn基因敲除纯合子、Md基因敲除纯合子及正常小鼠(均为C3H/Hej种系)各12只设为Atrn基因敲除组、Md基因敲除组和对照组。内眦静脉取血清取外周血,化学发光法检测血清睾酮(T)、雌二醇(E2)浓度,用酶联免疫法(ELISA)检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和泌乳素(PRL)浓度,进行组间浓度对比。结果:Atrn基因敲除组和Md基因敲除组的外周血E2、LH、FSH、PRL浓度均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);血清T浓度Atrn基因敲除组高于对照组,而Md基因敲除组低于对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Atrn或Md基因敲除后雄性小鼠的外周血E2、LH、FSH、PRL浓度均有下降,其具体机制及对外周血T浓度的影响有待进一步研究。

地西他滨抑制SHP-1基因甲基化对MDS细胞株Skm-1增殖及凋亡影响

目的:探讨DCA作用于MDS细胞模型后的表型及分子机制,通过细胞增殖、侵袭迁移及细胞凋亡等多重维度研究化疗药物作用于MDS细胞后的反应,揭示DCA治疗MDS的分子机理及其与SHP-1基因甲基化的关系。方法:采用MTT法测定不同浓度DCA处理后的MDS细胞存活率,采用Transwell实验检测DCA对MDS细胞侵袭和迁移能力的影响,应用AnnexinV-FITC/PI法检测细胞凋亡情况,Western blot免疫蛋白印迹和real time PCR实验研究DCA治疗MDS的作用机制。结果:实验发现,DCA作用于MDS skm-1细胞能抑制肿瘤增殖,且2.0及5.0μmol/L DCA组相对0.5μmol/L DCA组与阴性对照组相比吸光度降低、抑制效应更加明显。与对照组比较,应用DCA后MDS skm-1细胞穿过Transwell上室底膜的数量显著下降。在0.5、2.0及5.0μmol/L DCA处理后,MDS细胞凋亡率依次为4.54%、9.31%及16.58%,对照组细胞凋亡率为3.20%。这表明,细胞凋亡率随DCA浓度显著增加。在经不同浓度DCA处理的MDS细胞系中,SHP-1基因甲基化状态随着药物浓度升高而减弱,SHP-1表达量升高,STAT3表达量减少,而STAT3磷酸化水平则受到明显抑制。结论:通过对DCA作用于MDS细胞后的表型反应分析,发现其主要通过抑制增殖和转移并诱导凋亡来干预MDS,并具有药物剂量依赖性,这揭示了DCA治疗能够改善SHP-1基因的甲基化进而抑制p-STAT3表达的分子机制。

人TLR4及MD2基因反义真核表达载体的构建

目的 构建人TLR4及MD2基因反义真核表达载体 ,为研究其在肺炎症反应中的作用奠定基础。方法 通过PCR技术扩增出TLR4及MD2基因片段 ,然后分别反向插入真核表达载体pEFBOS的多克隆位点 ,最后对产生的重组子进行酶切和测序鉴定。结果 扩增出的TLR4目的片段为 2 6kb ,MD2为 0 5kb ,并成功地连接到pEFBOS载体上 ,DNA测序结果也显示插入片段为目的片段。

抗人肝癌MDscFV基因的表达及其免疫活性初步研究

将抗人肝癌单克隆抗体MD的重链可变区VH和轻链可变区VL基因重组,并使其表达。采用PT-PCR技术扩增VH及VL基因,通过重叠延伸拼接PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,体外构建加MDscFV基因,经过常规转化与筛选,诱导表达蛋白。MDscFV基因全长为732bp,VH354bp位于上游;VL330bp位于下游。重组蛋白相对分子量36kDa。scFV保留了与亲本抗体MD相似的免疫活性。成功地构建了抗人单链抗体MDscFV,并获得了较高水平的功能性表达。

去铁胺(DFO)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1的P15^(INK4B)基因去甲基化

目的探讨铁螯合剂去铁胺(deferoxamine,DFO)诱导骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞株SKM-1的P15INK4B基因去甲基化作用。方法以枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)和DFO处理SKM-1细胞,按不同铁负荷分成3组:对照组、FAC组和FAC+DFO组,分别检测不同铁负荷组细胞内可变铁池(labile ironpool,LIP)、细胞内活性氧类(reactive oxygen species,ROS)、P15INK4B基因甲基化状态、P15INK4B基因mRNA表达情况、细胞增殖(CFSE的平均荧光强度MFI)、细胞早期凋亡率以及细胞周期。结果与对照组相比,FAC组的LIP(64.04%±2.12%vs.1.45%±0.65%)、ROS(45.57%±1.18%vs.33.38%±12.96%)、细胞增殖MFI(23.01%±5.20%vs.51.67%±1.61%)明显升高,P15INK4B基因mRNA表达水平(0.72±0.08 vs.1)和细胞早期凋亡率(13.97%±2.25%vs.22.53%±1.76%)明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与FAC组相比,FAC+DFO组的LIP(8.34%±4.21%vs.64.04%±2.12%)、ROS(34.39%±2.12%vs.45.57%±1.18%)、细胞增殖MFI(37.34%±6.61%vs.23.01%±5.20%)明显减少,P15INK4B基因mRNA表达水平(1.50±0.15 vs.0.72±0.08)和细胞早期凋亡率(55.07%±1.30%vs.13.97%±2.25%)明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);3组细胞周期的差异无统计学意义。结论 DFO可使LIP和ROS降低,诱导铁过载的SKM-1细胞P15INK4B基因去甲基化,使其mRNA重新表达,并可抑制铁过载的SKM-1细胞增殖,促进其凋亡。

Mahoganoid基因的研究进展

近年来,常染色体隐性基因Mahoganoid已成为科学家的研究热点之一。该基因编码蛋白Md具有特征的C3HC4RING结构域,基于这一结构,认为该蛋白可能是作为一种E3泛肽连接酶起作用。Mahoganoid基因在生物体内广泛分布,并具有多个等位基因,在色素形成,体质量控制,神经系统退行性变及生殖系统方面都发挥重要的生理和病理作用。介绍Mahoganoid基因特点、基因表达、基因功能及分子作用机理。为以后的课题研究提供方向。

MDS1-EVI1基因多态性与鼻咽癌相关性研究

目的探讨MDS1-EVI1基因SNP rs6774994多态性与云南鼻咽癌之间的相关性研究.方法采用TaqMan-PCR方法检测MDS1-EVI1基因rs6774994基因型与等位基因频率.结果 (1)鼻咽癌组和对照组MDS1-EVI1基因rs6774994各基因型(P=0.843)和等位基因频率(P=0.784)组间分布差异无统计学意义(P>0.05);(2)鼻咽癌患者MDS1-EVI1基因rs6774994,有家族遗传史患者GG基因型携带者高于无家族遗传史患者(P<0.01),且病理分化类型为非低分化鳞癌的患者GG基因型携带者高于低分化鳞癌患者(P<0.01).结论 MDS1-EVI1基因rs6774994可能不增加云南人罹患鼻咽癌的风险.MDS1-EVI1基因rs6774994GG等位基因可能与家族遗传史和病理分化类型有一定相关性.

Mahoganoid基因在小鼠精子发生中的动态表达及对雄鼠生殖力影响

目的探讨Mahoganoid(Md)基因在小鼠精子第一发生波中的动态表达以及其基因缺失对雄性小鼠生殖力的影响。方法采用荧光实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)相对定量法检测Mahoganoid mRNA在7、14、21、28、35、60d龄C3H/HeJ雄鼠睾丸中的表达;对Md基因缺失纯合子(Md^(nc))及C3H/HeJ雄鼠精子密度,精子活力,异常精子形态百分率分析,并通过交配实验观察其使正常雌鼠受孕分娩情况。结果 Mahoganoid mRNA在7d龄C3H/HeJ雄鼠睾丸有低表达,14 d表达开始上调,21 d上升趋势明显,35 d时表达水平为60 d 91%;Md^(nc)可以与雌鼠交配,但无幼鼠出生;Md^(nc)雄鼠精子快速前向运动百分比明显低于C3H/HeJ雄鼠精子(P<0.01)。结论 Mahoganoid基因与精子发生相关,Mahoganoid基因缺失会导致雄性小鼠精子活力下降,影响其生殖能力。

应用cDNA微阵列对MDS骨髓细胞基因表达谱的初步研究

目的 应用cDNA微阵列初步研究骨髓增生异常综合征 (MDS)的基因表达谱。方法将 2例患者骨髓单个核细胞RNA各取等量混合后进行逆转录Cy5标记 ,和Cy3标记的正常对照cD NA混合 ,然后与H14 1微阵列杂交。结果 H14 1s芯片中共点样 13484个基因克隆 ,其中 10 6 4个靶克隆是针对同一基因内不同序列的cDNA片段 ,重复点样至少 2次 ,表达结果在 2张芯片内各自完全一致的分别为 6 2 5个 (5 8 7% )和 6 30个 (5 9 2 % ) ,而 2张芯片之间对应位置点检测结果完全相同的为783个 (73 6 % )。MDS患者存在表达差异的基因为 4 0 9个 ,其中 10 1个基因参与造血调控 ,主要涉及转录因子、细胞周期调节蛋白、代谢相关基因、表面黏附分子等。结论 cDNA微阵列可高效提供丰富的基因表达信息 ,并为深入研究MDS的发病分子机理提供线索。重复点样实验可降低微阵列操作过程引起的表达偏差。

骨髓增生异常综合征(MDS)基因诊断研究

目的根据Southern印迹杂交结果设计并合成适当引物。方法以32例MDS、13例可疑MDS、53例其他血液病和8例正常人骨髓细胞DNA为模板进行PCR。根据PCR结果和用于上述Southern印迹杂交的限制性酶切位点,设计并合成2个寡核苷酸(Oligos)经地高辛标记,对33例MDS(包括转白血病者),3例可疑MDS和19例其他血液病患者骨髓细胞涂片作原位杂交(ISH)。结果 MDS有共同的PCR产物电池带型。MDS原位杂交均呈阳性反应。对照组19例中仅有1例AA阳性反应,可疑MDS 3例中有2例阳性反应,且杂交信号的增强与MDS转白血病相关(P<0.01),也与SCD阴性相关(P<0.01)。结论建立起MDS PCR基因诊断法,笔者设计的两条Oligos所包含的限制性酶切位点的确是MDS C-erbB重排位置和重排/扩增位置,为MDS基因治疗提供了靶基因的靶位置。

枝状枝孢霉MD2的候选基因A00981的克隆及转基因菌株的构建

目的:为揭示真菌紫杉醇合成分子机制.方法:克隆了产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的候选基因A00981,该基因DNA和cDNA序列分别为969 bp和894 bp;其编码蛋白含有298个氨基酸、无跨膜结构和信号肽,与酰基辅酶A脱氢酶(ACAD)具有73%的一致性.进一步构建该基因的超表达载体pTFC-A00981,并转化枝状枝孢霉MD2,共获得9株转基因菌株.结果:Southern blot分析证明其中5株转基因菌株的外源基因是以单拷贝方式插入.结论:该结果为深入分析超表达候选基因A00981对枝状枝孢霉MD2紫杉烷类合成的影响奠定了基础.

微阵列芯片技术及其在MDS基因表达研究中的应用

MDS是一种恶性骨髓造血干细胞克隆性疾病 ,研究MDS基因表达对于明确其发生、发展的规律具有重要作用 ,有助于指导临床分型、治疗和判断预后。微阵列芯片技术是在 2 0世纪90年代逐渐发展起来的一项全新技术 ,它在分子生物学领域中的应用有力地促进了生物学、医学的发展 ,促进对多种疾病 ,尤其是恶性疾病的发病机制的深入认识[1～7] 。本文综述微阵列芯片技术的基本原理及其在MDS研究中的应用。

柱型苹果MdCoLBD1/2基因生物信息学及SNP分析

柱型苹果(Columnar apple)是苹果株型育种的珍贵资源。利用同源基因克隆方法,以柱型苹果‘威塞克旭’一年生枝上休眠期芽cDNA为模板,克隆得到了LOB DOMAIN家族(LBD)的2个同源基因,命名为MdCoLBD1/2,分别编码195和240个氨基酸。该基因有LBD家族的典型结构域,如C盒、GAS盒、亮氨酸拉链(Leu zipper)结构以及LOB Domain区域等。MdCoLBD1/2分别定位于第10条染色体Chr10:18985568..19005801和MdCoLBD2Chr10:18985594..19005850区间。MdCoLBD1/2与白梨、葡萄、草莓、椰子、梅、核桃的氨基酸的相似性均在60%以上。聚类分析表明MdCoLBD1和白梨、梅、草莓亲缘关系较近,MdCoLBD2与葡萄、核桃亲缘关系较近,MdCoLBD1/2与亚洲棉、陆地棉的聚类关系均较远。通过测序分析了MdCoLBD1/2基因在30个不同类型材料中的碱基序列差异,得到MdCoLBD1有8个碱基差异位点,MdCoLBD2有5个碱基差异位点。

基于LDA模型和MDS算法的多基因组可视化

面向多基因组的研究,以建模多个体关系和比较个体差异为主要研究内容。多基因组可视化可以帮助研究者依据多个体关系,有目的地分析、比较多基因组之间的差异。多个基因组遗传变异层面的比较,因为变异数量巨大、并且绝大部分变异并无信息性,故而很难在有限的显示空间内可视化。本文根据多基因组可视化的需求,分析了多基因组可视化的数据降维策略,提出了基于LDA模型及KL散度的多基因组相似度求解方法,建立了基于MDS算法的多基因组可视化降维方法,并使用千人基因组第三阶段的基因组变异数据,验证上述方法的可靠性。

MDS、急性白血病的ras癌遗传基因

部分骨髓异常增生综合征(简称MDS)被认为是前白血病状态,ras癌遗传基因在MDS、急性白血病的部分病例中,其基因的位点发生突变而被活化,与白血病化有着重要的关系。MDS是以造血细胞的分化异常、异形性和异常增殖为主要特点的综合征。部分病例异形成性增强,并且获得自主的增殖能力,而进展成为白血病。白血病化的过程可以分为分化异常和自主增殖两种表现。

苹果多肽激素基因Md CEP1促进花青苷积累

据《园艺学报》2018年第6期《过表达苹果多肽激素基因Md CEP1促进花青苷积累》(作者李睿等)报道,以王林苹果愈伤组织为试材,初步探讨了苹果多肽激素Md CEP1(C-TERMINALLY ENCODED PEPTIDE1)在调控花青苷合成方面的作用。结果表明,Md CEP1位于苹果第15号染色体,只有1个外显子。蛋白序列比对显示,不同物种中CEP结构域非常保守。启动子分析表明,Md CEP1启动子序列包含多个顺式作用元件,包括与分生组织有关的CAT-box元件、赤霉素响应元件(P-box)、光响应元件(MNF1)和与类黄酮合成相关的MYB类蛋白结合位点(MBSI)。

骨髓增生异常综合征患者血浆DNA中FHIT基因启动子区甲基化状态及地西他滨的去甲基化作用

本研究旨在检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者血浆DNA中FHIT基因启动子区域甲基化状况及地西他滨对其甲基化的影响。采用甲基化特异性聚合酶链反应法检测1例初治的MDS患者、3例MDS转化而来的AML患者在地西他滨序贯半量CAG方案化疗前后血浆DNA中FHIT基因启动子区域CPG岛甲基化情况,并分析其临床疗效。结果表明,3例患者治疗前有FHIT基因甲基化。治疗1个疗程后其中2例患者FHIT基因甲基化得到逆转,4例患者中有2例获得临床缓解,2例无效。结论:MDS的发生可能与FHIT基因甲基化相关,地西他滨对MDS患者血浆DNA中FHIT基因高甲基化具有明显的去甲基化作用。血浆DNA的FHIT基因甲基化检测可能成为MDS辅助诊断和预后判断的分子标记。