阔叶十大功劳作用于FABP5介导免疫细胞干预肝癌的研究

目的探讨阔叶十大功劳(KYSDGL)通过介导免疫细胞干预肝癌的作用机制。方法通过网络药理学、分子对接和生物信息学等方法探索KYSDGL的活性成分以及靶点,并对肝癌数据集GSE45267、GSE89377进行挖掘,分析出KYSDGL通过介导免疫干预肝癌的作用机制,并加以实验验证。结果获得7个KYSDGL介导免疫细胞干预肝癌的靶点;分子对接显示其中有6个靶点(PTGS2、FABP5、ADRB2、AGTR1、ESR1、RORA)能与KYSDGL中的成分结合;且与对照组相比,肝癌组基因表达均具有显著差异性,和性别、癌症分期、淋巴结转移状况的临床指标具有很强的相关性;6个关键靶点的10年生存预后分析显示仅有FABP5及ESR1有预后价值;进一步免疫浸润分析结果显示,FABP5的表达水平与免疫细胞浸润有显著相关性;最后通过THPA数据库病理切片验证FABP5蛋白在人癌症组织中高表达,在对照组中低表达,我们通过Western blot实验也验证了与HepG2肝癌细胞组相比,KYSDGL含药血清组的FABP5蛋白表达下调(P<0.05)。结论KYSDGL可通过抑制FABP5的高表达而调控肿瘤免疫,从而达到干预肝癌的目的。

阔叶十大功劳抗炎作用机制的实验研究及网络药理学分析

基于网络药理学及动物实验研究苗药阔叶十大功劳抗炎的有效成分及作用机制。用二甲苯、角叉菜胶分别制作小鼠及大鼠的炎症模型,并灌胃阔叶十大功劳(小鼠剂量为1.950 mg/kg;大鼠剂量为1.350 mg/kg)。通过TCMSP、SymMap、SwisstargetPrediction、SEA、STICH等数据库,以口服生物利用度≥30%、类药性≥0.18获取阔叶十大功劳的活性成分及其相应靶点;通过GeneCards、DisGeNET、TTD、DrugBank、OMIM等数据库获取炎症相关靶点;通过Venny 2.1.0获取疾病和药物的交集靶点,通过Cytoscape的MCODE、CytoHubba插件得到10个关键靶点,并构建药物-成分-靶点网络图;对10个Hub gene进行KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)和GO(gene ontology)富集分析以及分子对接。动物实验结果表明,阔叶十大功劳能够减轻小鼠和大鼠的炎症症状。网络药理学分析获得28个阔叶十大功劳活性化合物,753个药物作用靶点,1025个炎症靶点,阔叶十大功劳-炎症交集靶点225个,Hub gene 10个。GO及KEGG富集分析结果显示,阔叶十大功劳主要参与JAK-STAT信号传导途径、Th17细胞分化和一些癌症通路。分子对接结果显示,小檗碱、异博尔定等11个活性成分与JUN、JAK3等8个靶点对接成功。动物实验结果表明阔叶十大功劳具有抗炎作用,抗炎的主要成分为槲皮素、小檗碱等化合物,抗炎的机制可能是通过作用于IL-2、JAK1等靶点,参与JAK-STAT信号传导途径、Th17细胞分化等通路抗炎,初步揭示了阔叶十大功劳发挥抗炎作用的物质基础及作用机制。

基于生物信息学和分子对接技术探讨阔叶十大功劳调节免疫干预糖尿病视网膜病变的研究

目的:基于生物信息学和分子对接技术探讨糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR)、免疫与阔叶十大功劳之间的关系。方法:通过文献、Symmap、Swisstarget和TCMSP数据库获取十大功劳的靶点;从GEO获取GSE53257、GSE60436基因芯片数据集,并应用GEO2R工具进行数据预处理,使用R软件包stats对数据进行PCA分析评估,使用R语言CIBERSORT包进行免疫浸润和WGCNA分析;将数据集得到的差异表达基因、十大功劳靶点和WGCNA获得的免疫相关基因取交集;利用GeneMANIA数据库预测交集靶点相关的基因并构建关键基因的相互作用网络图,并借助于DAVID数据库对交集基因进行GO功能注释与KEGG通路富集分析;最后进行分子对接,明确得出十大功劳发挥作用的主要化合物。结果:获得Hub genes 8个(CDK2、CDK1、CHEK1、TP53、CDK6、CCND1、TYMS和CDC45),KEGG主要富集在黑色素瘤、胶质瘤和cAMP信号通路;通过分子对接发现其中7个Hub genes(CDK6、CHEK1、CDK2、CDK1、CCNA2、TP53、TYMS)的蛋白可以与十大功劳中的槲皮素、杜鹃花素、小檗碱、异鼠李素等11种化合物进行良好的结合。结论:本研究通过生物信息学和分子对接技术初步阐释了免疫、十大功劳与DR三者之间的关系,为十大功劳治疗DR的临床应用提供理论依据。

阔叶十大功劳对急性溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群及氧化应激的影响

目的:探讨阔叶十大功劳[Mahonia bealei(Fort.)Carr.]对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道菌群及氧化应激的影响。方法:48只SPF级C57BL/6J小鼠,随机分为:空白组,模型组,阔叶十大功劳低、中、高剂量(2.3、4.6和9.2 g/kg生药)组,美沙拉嗪(0.2 g/kg)组。采用自由饮用2.5%DSS诱导UC小鼠模型,造模当天灌胃给药,连续10 d。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察结肠组织并进行组织病理学评分;16S rRNA基因测序技术分析肠道菌群的变化;生化法检测小鼠肠黏膜中总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;Western blot法检测结肠组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1[NAD(P)H-quinone oxidoreductase 1,NQO1]、胞浆和胞核中核因子E2相关因子(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)蛋白表达。结果:与空白组相比,模型组小鼠结肠黏膜损伤显著(P<0.05),肠道菌群多样性和丰度降低,结肠抗氧化酶T-SOD、GSH及CAT活性显著降低,MDA含量显著增多(P<0.01),Keap1蛋白水平显著升高,NQO1和HO-1蛋白水平显著下降(P<0.01),胞浆Nrf2蛋白水平显著增高,胞核Nrf2蛋白水平也显著增加(P<0.01)。与模型组相比,阔叶十大功劳可修复小鼠结肠黏膜损伤,减少炎症细胞浸润(P<0.05或P<0.01),改善肠道菌群多样性及丰度,在门水平上,Firmicutes(厚壁菌门)显著上升,Bacteroidota(拟杆菌门)显著下降(P<0.05),属水平上4个菌属Muribaculaceae、Odoribacter、Rikenellaceae_RC9_gut_group(理研菌科RC9肠道群)、Lachnospirace⁃ae_UCG-001(毛螺菌科属UCG-001)可能与阔叶十大功劳对UC小鼠肠道黏膜的保护作用相关,抗氧化酶T-SOD、GSH及CAT活性显著提高(P<0.05或P<0.01),MDA含量显著减少(P<0.05或P<0.01),高剂量组胞浆Nrf2蛋白水平显著降低(P<0.01),低高剂量组细胞核Nrf2蛋白水平显著增高(P<0.05或P<0.01),低高剂量组可下调Keap1蛋白水平,上调NQO1和HO-1蛋白水平(P<0.05或P<0.01)。结论:阔叶十大功劳通过改善UC小鼠肠道菌群的多样性和结构,并通过Nrf2信号通路增强抗氧化酶活性,抑制氧化应激反应,从而修复结肠黏膜损伤,为阔叶十大功劳治疗UC提供实验依据。

5种药用植物内生真菌的分离及其抑菌活性的研究

从樟树、女贞、十大功劳、绞股蓝及荔枝草的叶片、叶柄、茎和枝条等部位分离内生真菌,并以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌为试验菌对分离的内生真菌进行了抑菌活性筛选.结果从5种药用植物中共分离出124株内生真菌,其中37株内生真菌对一种或多种供试菌有抑制作用,高抗菌活性菌株有11株.

长柱十大功劳与阔叶十大功劳生物碱药理作用比较

目的:观察并比较长柱十大功劳与阔叶十大功劳生物碱的药理作用,为长柱十大功劳的开发利用提供依据。方法:采用小鼠耳廓肿胀法,醋酸扭体法,番泻叶致小鼠腹泻法,ADP诱导小鼠急性肺栓塞模型,四氯化碳和异硫氰酸萘酯所致肝损伤模型,并对长柱十大功劳生物碱进行急性毒性试验。结果:两种十大功劳生物碱都具有抗炎、镇痛、止泻、保肝退黄的作用,长柱十大功劳止泻作用效果强于阔叶十大功劳,阔叶十大功劳抗炎作用效果强于长柱十大功劳;此外,长柱十大功劳还具有明显的抗肺栓塞作用,半数致死量(LD_(50))为49.67 g·kg^(-1),95%可信限为43.12～56.52 g·kg^(-1)。结论:长柱十大功劳生物碱与阔叶十大功劳药理作用相近,提示其药用价值有待深入研究。

阔叶十大功劳ISSR-PCR反应体系的建立与优化

采用单因子试验和正交设计方法,对影响阔叶十大功劳ISSR-PCR反应体系的引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs、模板DNA及退火温度5个因素进行优化,为探讨阔叶十大功劳种质遗传多样性奠定基础.结果表明:阔叶十大功劳ISSR-PCR的最佳反应体系为:在20μL反应体系中,0.5μmol/L引物、0.5UTaq酶、150μmol/L dNTPs和20ng模板DNA.在最佳反应条件下,从80条引物中筛选出15条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并经过9份阔叶十大功劳种质检验,证明该体系具有扩增条带清晰、稳定、重复性好等优点.综上所述,本文所建立的ISSR-PCR反应体系可用于阔叶十大功劳的种质鉴定及遗传多样性分析.

微波辅助萃取十大功劳叶中的小檗碱

利用间歇式微波辅助萃取装置 ,对提取阔叶十大功劳叶中的药用有效成分小檗碱进行了研究。选择并确定了萃取液中盐酸小檗碱的分析方法 ( Al2 O3 柱层析 -紫外分光光度法 ) ;选取了甲醇、乙醇、乙醇 -水 ( V/ V=9∶ 1 )为溶剂 ;微波辐射量为 2 ,4,6min;处理比 ( g/ m L)为 1∶ 40 ,1∶ 60 ,1∶80 ;利用正交实验设计考察了不同湿分原料的微波辅助萃取效率 。

高效液相色谱法同时测定不同产地阔叶十大功劳叶中3种生物碱类成分的含量

目的建立同时测定阔叶十大功劳叶药材中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的高效液相色谱（HPLC）法，并对不同产地阔叶十大功劳叶药材进行测定与比较。方法色谱柱采用Welch Ultimate LP—C18柱（150mm×4．6mm，5μm），流动相为0．05mol／L磷酸二氢钾（用磷酸调节pH至3．0）-乙腈（73：27），流速1．0mL／min，检测波长346nm，柱温30℃。结果盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱色谱峰达到基线分离，质量浓度分别在5．328—266．4μg／mL（r=0．9999），3．68—184．0μg／mL（r=0．9999），2．412～120．6μg／mL（r=0．9998）范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率分别99．17％（RSD=0．35％，n=6），98．97％（RSD=0．65％，n=6），99．36％（RSD=0．44％，n=6）。结论该法操作简单、准确可行、重复性好，可用于阔叶十大功劳叶药材的质量控制。

阔叶十大功劳叶与花总黄酮提取及含量测定

目的:研究阔叶十大功劳叶与花总黄酮的提取方法和含量测定。方法:比较以索氏提取法、超声波提取法和微波辅助提取法3种方法提取阔叶十大功劳叶与花中总黄酮,用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定总黄酮含量。结果:3种提取方法中,微波法提取效率最高,结果重现性好,并测得叶与花中总黄酮含量分别为2.182%和8.155%。结论:阔叶十大功劳总黄酮含量较高,总黄酮在花中的含量明显高于叶。

制备型高速逆流色谱分离中药中的生物碱

高速逆流色谱分离生物碱是目前中药有效成分分离中的热点,本文用制备型高速逆流色谱,从黄连、黄柏、十大功劳和金果榄等四种中药中分离出了几种小檗碱类生物碱.分离的基本方法都是把中药材进行粉碎,然后用工业酒精浸泡,滤液浓缩后用浓盐酸酸化过滤,滤液用氢氧化钠碱化至pH=10后用氯仿萃取,氯仿萃取液浓缩所得浸膏作为分离的样品.分离的溶剂体系主要由四氯化碳、氯仿、甲醇和稀盐酸以不同的体积比组成,分离条件是流速为2 mL/min,转速为800 r/min,进样量为200 mg.分离所得组分用标准品进行对照,确定结构.

阔叶十大功劳叶不同萃取相抗氧化活性的研究

为了确定阔叶十大功劳叶的生物活性物质,采用有机溶剂萃取法将阔叶十大功劳叶提取物分为正己烷相、二氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相5个不同极性相态,测定不同极性溶剂提取物中总黄酮及多酚含量,分析其还原能力及对DPPH自由基的清除能力,比较十大功劳提取物不同极性溶剂提取物的抗氧化作用。结果显示:十大功劳提取物的不同极性溶剂抗氧化活性作用差异显著,其中乙酸乙酯部位提取物和正丁醇部位提取物抗氧化能力较强于其它萃取相部位。

阔叶十大功劳中绿原酸的提取与含量测定

本研究采用索氏提取法、超声波法及微波法提取阔叶十大功劳中抗氧化成分绿原酸,并用331nm紫外分光光度法测定绿原酸含量,微波处理法的提取效果明显优于另外两种方法。

十大功劳对大肠杆菌耐药性的消除作用

取阔叶十大功劳叶和功劳木,分别用水提和醇提2种提取方式制得4种提取物,经高效液相色谱法分析,这些提取物中主要成分为小檗碱、药根碱、巴马汀等,对18株耐药大肠杆菌的抑菌活性很低,功劳叶水提物的最小抑菌浓度(MIC)范围为15.6～250g/L(生药),其余提取物的MIC均大于250g/L(生药)。在耐药菌的肉汤培养基中加入不同质量浓度的中药提取物进行传代培养,18株耐药菌有8株菌的MIC降低了8倍以上,耐药逆转率为44%。结果表明,十大功劳提取物能消除大肠杆菌的耐药性。

阔叶十大功劳逆转K562/ADM耐药活性研究

采用MTT法运用阔叶十大功劳逆转白血病细胞株K562/ADM对阿霉素(ADM)耐药活性进行评价,考察了阔叶十大功劳不同萃取分离部位对ADM的增敏活性.活性数据显示阔叶十大功劳的各提取部位均对K562/ADM细胞具有不同程度的增敏ADM活性.其中样品Ⅴ增敏活性最高,而样品Ⅴ中主要成分为生物碱类物质,这说明阔叶十大功劳中生物碱类成分具有逆转肿瘤细胞耐药活性.然而样品Ⅰ-Ⅴ逆转肿瘤细胞耐药活性差别不显著,这说明阔叶十大功劳中生物碱类成分含量丰富,在各个提取部位均大量存在,更适合全草入药,在逆转肿瘤细胞耐药方面具有非常好的潜在应用价值.

UV-B诱导对离体阔叶十大功劳叶次生代谢产物累积影响的研究

目的考察UV-B诱导对于离体阔叶十大功劳叶中3种生物碱为主的次生代谢产物含量的影响。方法以高效液相色谱法建立UV-B诱导前后叶片中次生代谢产物的色谱图,通过比较分析,得到化合物含量的变化情况。结果与对照组比较,UV-B诱导组次生代谢产物的含量变化显著,药根碱与巴马汀含量显著增加,均在诱导6 h后达到峰值,其中药根碱增幅410.84%,巴马汀增幅达118.76%,小檗碱诱导后含量则显著降低。结论 UV-B诱导对离体阔叶十大功劳叶中次生代谢产物含量累积有显著影响。