阔叶十大功劳作用于FABP5介导免疫细胞干预肝癌的研究

目的探讨阔叶十大功劳(KYSDGL)通过介导免疫细胞干预肝癌的作用机制。方法通过网络药理学、分子对接和生物信息学等方法探索KYSDGL的活性成分以及靶点,并对肝癌数据集GSE45267、GSE89377进行挖掘,分析出KYSDGL通过介导免疫干预肝癌的作用机制,并加以实验验证。结果获得7个KYSDGL介导免疫细胞干预肝癌的靶点;分子对接显示其中有6个靶点(PTGS2、FABP5、ADRB2、AGTR1、ESR1、RORA)能与KYSDGL中的成分结合;且与对照组相比,肝癌组基因表达均具有显著差异性,和性别、癌症分期、淋巴结转移状况的临床指标具有很强的相关性;6个关键靶点的10年生存预后分析显示仅有FABP5及ESR1有预后价值;进一步免疫浸润分析结果显示,FABP5的表达水平与免疫细胞浸润有显著相关性;最后通过THPA数据库病理切片验证FABP5蛋白在人癌症组织中高表达,在对照组中低表达,我们通过Western blot实验也验证了与HepG2肝癌细胞组相比,KYSDGL含药血清组的FABP5蛋白表达下调(P<0.05)。结论KYSDGL可通过抑制FABP5的高表达而调控肿瘤免疫,从而达到干预肝癌的目的。

阔叶十大功劳抗炎作用机制的实验研究及网络药理学分析

基于网络药理学及动物实验研究苗药阔叶十大功劳抗炎的有效成分及作用机制。用二甲苯、角叉菜胶分别制作小鼠及大鼠的炎症模型,并灌胃阔叶十大功劳(小鼠剂量为1.950 mg/kg;大鼠剂量为1.350 mg/kg)。通过TCMSP、SymMap、SwisstargetPrediction、SEA、STICH等数据库,以口服生物利用度≥30%、类药性≥0.18获取阔叶十大功劳的活性成分及其相应靶点;通过GeneCards、DisGeNET、TTD、DrugBank、OMIM等数据库获取炎症相关靶点;通过Venny 2.1.0获取疾病和药物的交集靶点,通过Cytoscape的MCODE、CytoHubba插件得到10个关键靶点,并构建药物-成分-靶点网络图;对10个Hub gene进行KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)和GO(gene ontology)富集分析以及分子对接。动物实验结果表明,阔叶十大功劳能够减轻小鼠和大鼠的炎症症状。网络药理学分析获得28个阔叶十大功劳活性化合物,753个药物作用靶点,1025个炎症靶点,阔叶十大功劳-炎症交集靶点225个,Hub gene 10个。GO及KEGG富集分析结果显示,阔叶十大功劳主要参与JAK-STAT信号传导途径、Th17细胞分化和一些癌症通路。分子对接结果显示,小檗碱、异博尔定等11个活性成分与JUN、JAK3等8个靶点对接成功。动物实验结果表明阔叶十大功劳具有抗炎作用,抗炎的主要成分为槲皮素、小檗碱等化合物,抗炎的机制可能是通过作用于IL-2、JAK1等靶点,参与JAK-STAT信号传导途径、Th17细胞分化等通路抗炎,初步揭示了阔叶十大功劳发挥抗炎作用的物质基础及作用机制。

基于生物信息学和分子对接技术探讨阔叶十大功劳调节免疫干预糖尿病视网膜病变的研究

目的:基于生物信息学和分子对接技术探讨糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR)、免疫与阔叶十大功劳之间的关系。方法:通过文献、Symmap、Swisstarget和TCMSP数据库获取十大功劳的靶点;从GEO获取GSE53257、GSE60436基因芯片数据集,并应用GEO2R工具进行数据预处理,使用R软件包stats对数据进行PCA分析评估,使用R语言CIBERSORT包进行免疫浸润和WGCNA分析;将数据集得到的差异表达基因、十大功劳靶点和WGCNA获得的免疫相关基因取交集;利用GeneMANIA数据库预测交集靶点相关的基因并构建关键基因的相互作用网络图,并借助于DAVID数据库对交集基因进行GO功能注释与KEGG通路富集分析;最后进行分子对接,明确得出十大功劳发挥作用的主要化合物。结果:获得Hub genes 8个(CDK2、CDK1、CHEK1、TP53、CDK6、CCND1、TYMS和CDC45),KEGG主要富集在黑色素瘤、胶质瘤和cAMP信号通路;通过分子对接发现其中7个Hub genes(CDK6、CHEK1、CDK2、CDK1、CCNA2、TP53、TYMS)的蛋白可以与十大功劳中的槲皮素、杜鹃花素、小檗碱、异鼠李素等11种化合物进行良好的结合。结论:本研究通过生物信息学和分子对接技术初步阐释了免疫、十大功劳与DR三者之间的关系,为十大功劳治疗DR的临床应用提供理论依据。

阔叶十大功劳对急性溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群及氧化应激的影响

目的:探讨阔叶十大功劳[Mahonia bealei(Fort.)Carr.]对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道菌群及氧化应激的影响。方法:48只SPF级C57BL/6J小鼠,随机分为:空白组,模型组,阔叶十大功劳低、中、高剂量(2.3、4.6和9.2 g/kg生药)组,美沙拉嗪(0.2 g/kg)组。采用自由饮用2.5%DSS诱导UC小鼠模型,造模当天灌胃给药,连续10 d。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察结肠组织并进行组织病理学评分;16S rRNA基因测序技术分析肠道菌群的变化;生化法检测小鼠肠黏膜中总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;Western blot法检测结肠组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1[NAD(P)H-quinone oxidoreductase 1,NQO1]、胞浆和胞核中核因子E2相关因子(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)蛋白表达。结果:与空白组相比,模型组小鼠结肠黏膜损伤显著(P<0.05),肠道菌群多样性和丰度降低,结肠抗氧化酶T-SOD、GSH及CAT活性显著降低,MDA含量显著增多(P<0.01),Keap1蛋白水平显著升高,NQO1和HO-1蛋白水平显著下降(P<0.01),胞浆Nrf2蛋白水平显著增高,胞核Nrf2蛋白水平也显著增加(P<0.01)。与模型组相比,阔叶十大功劳可修复小鼠结肠黏膜损伤,减少炎症细胞浸润(P<0.05或P<0.01),改善肠道菌群多样性及丰度,在门水平上,Firmicutes(厚壁菌门)显著上升,Bacteroidota(拟杆菌门)显著下降(P<0.05),属水平上4个菌属Muribaculaceae、Odoribacter、Rikenellaceae_RC9_gut_group(理研菌科RC9肠道群)、Lachnospirace⁃ae_UCG-001(毛螺菌科属UCG-001)可能与阔叶十大功劳对UC小鼠肠道黏膜的保护作用相关,抗氧化酶T-SOD、GSH及CAT活性显著提高(P<0.05或P<0.01),MDA含量显著减少(P<0.05或P<0.01),高剂量组胞浆Nrf2蛋白水平显著降低(P<0.01),低高剂量组细胞核Nrf2蛋白水平显著增高(P<0.05或P<0.01),低高剂量组可下调Keap1蛋白水平,上调NQO1和HO-1蛋白水平(P<0.05或P<0.01)。结论:阔叶十大功劳通过改善UC小鼠肠道菌群的多样性和结构,并通过Nrf2信号通路增强抗氧化酶活性,抑制氧化应激反应,从而修复结肠黏膜损伤,为阔叶十大功劳治疗UC提供实验依据。

阔叶十大功劳作用于AURKA调控铁死亡干预肝癌的作用

探索阔叶十大功劳Mahonia bealei调控铁死亡干预肝癌的机制.从GEO数据库下载肝癌的转录组数据集,从FerrDb数据库下载铁死亡相关基因,使用TCMSP、SymMap、SwissTargetPrediction数据库获取M.bealei的成分与靶点;使用DS BIOVIA Discovery Studio 2016 v16.1软件进行分子对接;运用Cytoscape软件及STRING平台,对药物-疾病-铁死亡交集靶点进行PPI分析;利用GEPIA、TIMER数据库进行差异表达分析;利用UALCAN数据库进行临床相关性分析;利用Kaplan-Meier Plotter数据库进行生存分析;使用THPA数据库进行病理学切片分析;使用Western blot进行体外实验验证;最后,进行转录因子的预测,共筛选出5个M.bealei调控铁死亡干预肝癌的关键基因,通过基因差异表达选取3个核心基因AKR1C3、AKR1C1、AURKA,进一步分析发现AURKA与肝癌生存分析、临床参数、病理学结果均显著相关.Western blot实验证实,与HepG2肝癌细胞组相比,M.bealei含药血清组的AURKA蛋白表达上调(P<0.05).通过以上研究认为M.bealei可通过作用于AURKA调控铁死亡而干预肝癌.

5种药用植物内生真菌的分离及其抑菌活性的研究

从樟树、女贞、十大功劳、绞股蓝及荔枝草的叶片、叶柄、茎和枝条等部位分离内生真菌,并以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌为试验菌对分离的内生真菌进行了抑菌活性筛选.结果从5种药用植物中共分离出124株内生真菌,其中37株内生真菌对一种或多种供试菌有抑制作用,高抗菌活性菌株有11株.

长柱十大功劳与阔叶十大功劳生物碱药理作用比较

目的:观察并比较长柱十大功劳与阔叶十大功劳生物碱的药理作用,为长柱十大功劳的开发利用提供依据。方法:采用小鼠耳廓肿胀法,醋酸扭体法,番泻叶致小鼠腹泻法,ADP诱导小鼠急性肺栓塞模型,四氯化碳和异硫氰酸萘酯所致肝损伤模型,并对长柱十大功劳生物碱进行急性毒性试验。结果:两种十大功劳生物碱都具有抗炎、镇痛、止泻、保肝退黄的作用,长柱十大功劳止泻作用效果强于阔叶十大功劳,阔叶十大功劳抗炎作用效果强于长柱十大功劳;此外,长柱十大功劳还具有明显的抗肺栓塞作用,半数致死量(LD_(50))为49.67 g·kg^(-1),95%可信限为43.12～56.52 g·kg^(-1)。结论:长柱十大功劳生物碱与阔叶十大功劳药理作用相近,提示其药用价值有待深入研究。

阔叶十大功劳ISSR-PCR反应体系的建立与优化

采用单因子试验和正交设计方法,对影响阔叶十大功劳ISSR-PCR反应体系的引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs、模板DNA及退火温度5个因素进行优化,为探讨阔叶十大功劳种质遗传多样性奠定基础.结果表明:阔叶十大功劳ISSR-PCR的最佳反应体系为:在20μL反应体系中,0.5μmol/L引物、0.5UTaq酶、150μmol/L dNTPs和20ng模板DNA.在最佳反应条件下,从80条引物中筛选出15条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并经过9份阔叶十大功劳种质检验,证明该体系具有扩增条带清晰、稳定、重复性好等优点.综上所述,本文所建立的ISSR-PCR反应体系可用于阔叶十大功劳的种质鉴定及遗传多样性分析.

十大功劳果实提取物抗氧化活性研究

在超声波辅助下,以质量分数为80%的乙醇水溶液对十大功劳果实进行提取,浓缩后得到提取物。在对提取物的DPPH.、ABTS+.清除能力进行研究的基础上,探讨溶剂效应对提取物DPPH.清除活性的影响,并利用荧光猝灭法研究提取物与Cu2+、Fe2+的螯合作用。结果表明,十大功劳果实提取物清除ABTS+.和DPPH.的IC50值均远远小于10 g/L,说明提取物具有良好的自由基清除活性;溶剂的极性对提取物DPPH.清除活性具有重要影响;提取物与Cu2+、Fe2+具有较好的螯合作用,猝灭常数Ksv分别为7.57×102和3.09×103L.mol-1。

功劳木有效成分逆转肿瘤多药耐药研究

采用高内涵活细胞成像系统检测功劳木10种有效成分对肿瘤细胞K562/ADM细胞内罗丹明(rhodamine123,Rh123)蓄积的影响,结果发现化合物2-9可以不同程度地提高K562/ADM细胞中Rh123的荧光强度(给药浓度为10μmol/L时,Rh123荧光强度增长率分别为15.19%、24.01%、8.70%、73.17%、21.84%、76.98%、17.26%和23.29%).结果表明化合物2-9均具有逆转肿瘤多药耐药活性,其中化合物7的抗多药耐药活性最强.

两种十大功劳叶中生物碱成分的分析与比较

目的建立长柱十大功劳叶和阔叶十大功劳叶中药根碱、巴马汀、小檗碱的含量测定方法,比较两者的生物碱成分含量差异。方法采用反相高效液相色谱外标法同时测定。色谱柱为大连依利特SinoChromODS-BP柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸(23∶77),流速为1.0mL/min,检测波长为265nm,进样量为10μL。结果上述色谱条件下,盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱可以较好地分离,线性范围分别为0.001444～0.07076μg(r=0.9999),0.0005152～0.02524μg(r=0.9996),0.0009240～0.04528μg(r=0.9998),平均回收率分别为98.74%,99.37%,99.89%,RSD分别为2.16%,1.62%,2.14%(n=9)。结论该测定方法简单,快速,专属性、重现性好,结果准确可靠。

高效液相色谱法同时测定不同产地阔叶十大功劳叶中3种生物碱类成分的含量

目的建立同时测定阔叶十大功劳叶药材中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的高效液相色谱（HPLC）法，并对不同产地阔叶十大功劳叶药材进行测定与比较。方法色谱柱采用Welch Ultimate LP—C18柱（150mm×4．6mm，5μm），流动相为0．05mol／L磷酸二氢钾（用磷酸调节pH至3．0）-乙腈（73：27），流速1．0mL／min，检测波长346nm，柱温30℃。结果盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱色谱峰达到基线分离，质量浓度分别在5．328—266．4μg／mL（r=0．9999），3．68—184．0μg／mL（r=0．9999），2．412～120．6μg／mL（r=0．9998）范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率分别99．17％（RSD=0．35％，n=6），98．97％（RSD=0．65％，n=6），99．36％（RSD=0．44％，n=6）。结论该法操作简单、准确可行、重复性好，可用于阔叶十大功劳叶药材的质量控制。

功劳木的化学成分研究

目的研究功劳木的化学成分,评价功劳木化学成分体外抗肝癌HepG2细胞活性。方法功劳木经70%乙醇提取后经硅胶干柱色谱分成8份,第2～5份经硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、大孔吸附树脂等技术分离纯化化合物,利用核磁共振技术鉴定它们的化学结构,并通过测试体外最低抑制浓度评价有关物质的抗肝肿瘤活性。结果分离、纯化并鉴定了8个化合物,分别为erythro-syringoylglycerol 8-O-β-D-glucoside(1)、3,4,5-三甲氧基苯酚1-O-β-D-葡萄糖苷(3,4,5-trimethoxyphenyl-1-O-β-D-glucoside,2)、表丁香脂素(episyringaresinol,3)、5,5'-二甲氧基落叶松脂醇4'-O-β-D-葡萄糖苷(5,5'-dimethoxylariciresinol-4'-O-β-D-glucoside,4)、β-谷甾醇(β-sitosterol,5)、小檗碱(berberine,6)、巴马汀(palmatine,7)、药根碱(jatrorrhizine,8)。结论化合物1～4皆为首次从该属植物中分离得到。化合物3、6、8显示出不同程度的抑制肝癌HepG2细胞活性。

功劳木中脑苷脂类成分的研究

目的研究功劳木中脑苷脂类成分。方法 70%乙醇提取物经硅胶干柱色谱分成8份,第2～5份经硅胶柱色谱、大孔吸附树脂、ODS等技术分离纯化得到3个脑苷脂类成分,利用波谱数据和理化性质鉴定了它们的化学结构。结果分离纯化并鉴定了3个脑苷脂类化合物,分别为1-O-β-D-葡萄糖-(2S,3S,4R,5E,9Z)-2-N-(2'-羟基二十四碳酰氨基)-1,3,4-三羟基-十八碳-5,9-二烯(1),大豆脑苷Ⅰ(2),大豆脑苷Ⅱ(3)。结论化合物1～3皆为首次从该属植物和小檗科植物中分离得到。

微波辐射促进阔叶十大功劳叶萃取过程的研究

研究了在间歇式微波辅助萃取装置中提取阔叶十大功劳叶中的药用有效成分小檗碱。确定了萃取液中盐酸小檗碱的分析方法—— Al2 O3柱层析 -紫外分光光度法 ;分别选取了甲醇、乙醇、乙醇 -水 (V/ V=9∶ 1 )为溶剂 ;微波辐射时间为 2 min、4min、6min;处理比 (g原料 / m L溶剂 )为1∶ 40、1∶ 60、1∶ 80 ;利用正交实验设计考察了不同湿分原料的微波辅助萃取效率 ,得出了最优工艺条件 ;拍摄了典型萃取条件下萃取基体的透射电镜照片 ;

微波辅助萃取十大功劳叶中的小檗碱

利用间歇式微波辅助萃取装置 ,对提取阔叶十大功劳叶中的药用有效成分小檗碱进行了研究。选择并确定了萃取液中盐酸小檗碱的分析方法 ( Al2 O3 柱层析 -紫外分光光度法 ) ;选取了甲醇、乙醇、乙醇 -水 ( V/ V=9∶ 1 )为溶剂 ;微波辐射量为 2 ,4,6min;处理比 ( g/ m L)为 1∶ 40 ,1∶ 60 ,1∶80 ;利用正交实验设计考察了不同湿分原料的微波辅助萃取效率 。

阔叶十大功劳总生物碱提取及小檗碱含量测定

目的建立阔叶十大功劳中总生物碱的提取工艺和小檗碱的含量测定方法。方法通过正交试验确立提取总生物碱的最佳工艺条件,紫外分光光度法测定总生物碱含量;采用HPLC-UVD法,C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以甲醇-水（各含0.1%甲酸）为流动相,流速1 m L/min,柱温35℃,检测波长345 nm,测定小檗碱的含量。结果最佳提取工艺为药材质量6倍量的80%乙醇、提取4次、每次2 h;小檗碱在36.00~486.00μg/m L范围内呈良好线性关系,平均回收率为98.0%,RSD为0.53%。结论总生物碱的提取工艺回收率较高、稳定且重复性好;所建立的测定小檗碱含量的HPLC法简便、快速,结果准确可靠。

功劳木的化学成分及其体外对P-糖蛋白转运的影响

目的研究功劳木的化学成分,评价其体外对P-糖蛋白转运的影响。方法功劳木用体积分数为70%乙醇提取,得到的浸膏经硅胶干柱色谱分成8份,其中第3～5份和第8份经反复硅胶柱色谱分离得到3个化合物,利用理化性质和波谱数据鉴定了它们的化学结构,并检测3个化合物对耐药细胞株K562/ADM细胞内罗丹明（rhodamine123,Rh123）蓄积的影响。结果显示3个化合物分别为：1-O-（β-D-glucopyranosyl）-（2S,3S,4R,8E）-2-[（2’R）-2’-hydroxytetra cosenoilamino]-8-octadec-ene-1,3,4-triol（1）、erthro-syringoyl glycerol 4-O-β-D-glucoside（2）、葡萄糖（3）。结论化合物1～3为首次从本属植物中分离得到,化合物1和2明显增加耐药细胞株K562/ADM细胞内罗丹明（rhodamine123,Rh123）蓄积量,表现出抑制P-糖蛋白转运功能的活性。

阔叶十大功劳叶与花总黄酮提取及含量测定

目的:研究阔叶十大功劳叶与花总黄酮的提取方法和含量测定。方法:比较以索氏提取法、超声波提取法和微波辅助提取法3种方法提取阔叶十大功劳叶与花中总黄酮,用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定总黄酮含量。结果:3种提取方法中,微波法提取效率最高,结果重现性好,并测得叶与花中总黄酮含量分别为2.182%和8.155%。结论:阔叶十大功劳总黄酮含量较高,总黄酮在花中的含量明显高于叶。

酶法辅助超声提取功劳木中小檗碱的工艺优化

为了优化酶法辅助超声提取功劳木中小檗碱的工艺,在单因素试验基础上,根据BoxBehnken中心组合试验设计原理,采用4因素3水平的响应面分析法,以小檗碱收率为响应值进行回归分析。结果表明,酶解最佳工艺条件为:酶解pH值3.5、酶用量10.6 mg/g、酶解温度51℃、酶解时间97 min。在此条件下,小檗碱收率为22.46 mg/g。优选的提取工艺稳定可行、收率高,为功劳木的工业化生产提供参考。