麻黄-甘草药对治疗水肿机制研究

目的:利用网络药理学技术预测麻黄-甘草药对治疗水肿的作用机制。方法:通过TCMSP和TDT获取麻黄-甘草药对的化学成分和作用靶点;OMIM筛选水肿相关的靶点;利用Cytoscape软件构建"化学成分-靶点-疾病"交互网络图并对网络进行分析。对筛选出的靶点进行基因功能分析和KEGG通路分析。结果:筛选出麻黄-甘草药对治疗水肿的10个蛋白靶点;发现主要通过调节血管内皮生长因子信号通路和血管内皮细胞迁移来发挥作用。PI3K-Akt信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、Ras信号通路、MAPK信号通路也在麻黄-甘草药对治疗水肿中发挥重要作用。结论:通过网络药理学预测了麻黄-甘草药对治疗水肿的作用机制,为其活性成分研究和临床应用提供理论依据。

麻黄-甘草药对抑制过敏性哮喘的效应及机制初探

目的研究麻黄-甘草药对对过敏性哮喘的影响,并初步探讨其作用机制。方法建立屋尘螨(HDM)诱导的过敏性哮喘模型,造模同时给予麻黄-甘草药对提取物(MG)。使用无创肺功能仪检测小鼠气道反应性,HE染色观察小鼠肺组织病理学变化,Masson染色观察小鼠肺组织的胶原沉积情况,进行血液嗜酸性粒细胞(EOS)计数,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β1及血清IgE的表达,免疫组化检测肺组织E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、α-SMA和TGF-β1蛋白表达情况。结果 MG可显著降低气道高反应性,抑制BALF及肺组织IL-4、IL-5和IL-13的表达,降低血液EOS及血清IgE的表达,并且减轻肺组织的炎症浸润及胶原沉积。进一步结果表明MG可抑制肺组织TGF-β1的表达,上调E-cadherin以及下调N-cadherin、Vimentin、α-SMA的表达。结论 MG能够通过抑制支气管上皮间质转化,从而缓解气道的炎症状态以及改善哮喘的气道重塑,进而发挥对过敏性哮喘的治疗作用。

配伍对麻黄甘草药对中麻黄类生物碱在大鼠体内组织分布的影响

目的研究麻黄与甘草配伍前后麻黄类生物碱在SD大鼠组织分布特点,从药物相互作用角度揭示甘草对麻黄类生物碱组织分布的影响。方法采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法在多反应监测(MRM)模式下测定麻黄与甘草配伍前后不同时间点大鼠各组织液中麻黄类生物碱的浓度,比较麻黄与甘草配伍前后麻黄类生物碱组织分布的差异。结果与麻黄组相比,麻黄与甘草配伍后,促进了去甲基麻黄碱、麻黄碱和伪麻黄碱在研究组织中的吸收和分布;加快了去甲基麻黄碱、麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱从脑组织中消除;抑制了去甲基伪麻黄碱在心和脑组织中的吸收和分布,并加快了其从心和脑组织中的消除;不同程度地加快了去甲基麻黄碱从心、肺、肾的消除,加快了麻黄碱从心组织中消除,加快了甲基麻黄碱从肺和肾中的消除。结论麻黄与甘草配伍对麻黄类生物碱在大鼠组织中的分布具有显著的影响。

麻黄-甘草药对的抗炎、利尿作用研究

目的:观察麻黄-甘草药对的抗炎、利尿作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验、角叉菜胶致大鼠足肿胀、大鼠棉球肉芽肿实验观察麻黄-甘草药对的抗炎作用;采用麻黄-甘草药对对正常大鼠排尿量及电解质排泄的影响观察其利尿作用。结果:麻黄-甘草药对22.4、11.2、5.6g/kg灌胃,均能抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀;11.2g生药/kg、22.4g生药/kg灌胃,能抑制醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增加;22.4g生药/kg能抑制角叉菜胶注射后3h,5h,7h的大鼠足肿胀和大鼠棉球肉芽肿形成、增加大鼠排尿量及尿液中K+的排泄。结论:麻黄-甘草药对有抗炎、利尿作用。

麻黄-甘草药对利尿作用的定量评价

目的:观察麻黄-甘草药对的利尿作用,定量评价麻黄和甘草的相互作用。方法:采用麻黄-甘草药对对正常大鼠排尿量的实验观察利尿作用,应用Q值法分析两者相互作用。结果:麻黄-甘草1:0 1.86 g生药/kg灌胃,能促进大鼠排尿。麻黄-甘草5个配比均能明显增加排尿量。药对2:1,4:1配伍,麻黄和甘草表现出拮抗作用;1:1,1:2,1:4配伍则为单纯相加作用。结论:在固定麻黄用量的情况下,麻黄-甘草药对随着甘草用量增加,利尿作用增强,呈现配伍优势。

不同配伍比例对麻黄-甘草药对中麻黄类生物碱成分血浆药动学的影响

目的:研究麻黄-甘草(MH-GC)药对不同配比水煎液灌胃给予大鼠后,血浆中麻黄类生物碱含量的变化。方法:大鼠按体重随机等分成4组,分别为MH,MH-GC(12∶3),MH-GC(12∶6)和MH-GC(12∶12),于给药后不同时间点采血,给药量分别为7.42,9.28,11.13,14.84 g·kg-1。利用液液萃取法处理血浆样品,以盐酸金刚烷胺为内标,采用UPLC-MS/MS测定血浆样品中盐酸去甲基麻黄碱(NME),盐酸去甲基伪麻黄碱(NMP),盐酸麻黄碱(E),盐酸伪麻黄碱(PE)和盐酸甲基麻黄碱(ME)的血药浓度,利用DAS 3.0软件计算药动学参数。结果:与MH组相比,MH-GC(12∶3)组中NME和NMP的MRT0-t得到显著缩短,PE的t1/2z和Vz/F也显著降低;MH-GC(12∶6)组中NME,E和PE的AUC0-t均得到显著提高,PE的CLz/F和Vz/F显著降低;MH-GC(12∶12)组中E和PE的MRT0-t则显著延长,ME的CLz/F显著提高。结论:麻黄与不同比例的甘草配伍后,5种麻黄类生物碱的部分药动学参数具有显著性差异。随着甘草用量的不同,所表现出的减毒或增效侧重点则不同,从药动学角度证明了古方用药针对不同病症药物用量不同的科学性与合理性。

UPLC波长切换法同时测定小青龙颗粒中9种成分的含量

目的:建立UPLC波长切换法同时测定小青龙颗粒中琥珀酸、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、芍药苷、甘草苷、甘草酸、桂皮醛、6-姜辣素和五味子醇甲的含量。方法:采用Agilent Zorbax C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 ml·min-1,柱温为35℃。检测波长214 nm(0~8 min,琥珀酸、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱),237 nm(8~15 min,芍药苷、甘草苷、甘草酸);285 nm(15~20 min,桂皮醛、6-姜辣素);250 nm(20~25 min,五味子醇甲)。结果:琥珀酸、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、芍药苷、甘草苷、甘草酸、桂皮醛、6-姜辣素和五味子醇甲的线性范围分别为1.37~54.72μg·ml-1(r=0.999 1)、2.58~103.20μg·ml-1(r=0.999 4)、1.71~68.48μg·ml-1(r=0.999 3)、5.81~232.32μg·ml-1(r=0.999 9)、3.25~129.92μg·ml-1(r=0.999 8)、2.35~93.92μg·ml-1(r=0.999 5)、1.18~47.07μg·ml-1(r=0.999 0)、1.98~79.04μg·ml-1(r=0.999 3)、2.28~91.36μg·ml-1(r=0.999 6);检测限分别为0.25,0.16,0.18,0.10,0.11,0.13,0.20,0.23,0.15μg·ml-1;定量限分别为0.40,0.20,0.21,0.14,0.15,0.18,0.35,0.38,0.19μg·ml-1;平均加样回收率分别为98.5%(RSD=0.9%)、101.1%(RSD=1.3%)、99.2%(RSD=1.7%)、101.7%(RSD=1.3%)、98.4%(RSD=0.5%)、98.2%(RSD=1.5%)、102.8%(RSD=1.4%)、97.0%(RSD=1.0%)、102.0%(RSD=0.8%)(n=9)。结论:本方法快速简便,精密度、稳定性及重复性好,实现了小青龙颗粒的多成分测定,为质量控制提供依据。

HPLC波长切换法同时测定小儿清热止咳口服液中8种成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定小儿清热止咳口服液中8种活性成分的含量。方法:采用HPLC法同时测定小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、黄芩苷、黄芩素、甘草苷、甘草酸铵、(R,S)-告依春的含量,采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(含0.1%NH4Cl溶液)(B),梯度洗脱,检测波长为210 nm(盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷)和250 nm[甘草苷、甘草酸铵、黄芩苷、黄芩素、(R,S)-告依春],流速1.0 ml·min^-1,柱温30℃,进样量10μl。结果:(R,S)-告依春、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、黄芩苷、黄芩素、甘草苷、甘草酸铵检测质量浓度的线性范围分别为1.006~20.120,16.730~334.600,19.980~399.500,18.250~365.000,76.000~1 520,26.220~524.500,8.745~174.900,6.532~130.600μg·ml^-1(r为0.999 2~0.999 8);平均加样回收率分别为98.2%,98.4,98.6%,98.2%,100.8%,98.5%,98.3%,98.1%(RSD <2.0%,n=6)。结论:该方法简单、有效、结果准确,可用于小儿清热止咳口服液中上述8种活性成分含量的同时测定。

HPLC法同时测定小儿咳喘灵颗粒中6种成分

目的:建立利用HPLC法采取波长变换同时测定小儿咳喘灵颗粒中盐酸麻黄碱、(R,S)-告依春、苦杏仁苷、绿原酸、甘草苷、甘草酸含量的方法。方法:色谱条件:Agilent Eclipse XDB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min^(-1),测定波长为207 nm(盐酸麻黄碱、苦杏仁苷)、237 nm(甘草酸、甘草苷、绿原酸)、245 nm[(R,S)-告依春)]。结果:盐酸麻黄碱进样浓度在2.423~96.920μg·ml^(-1)范围与峰面积线性关系良好,r=0.999 2,平均回收率为100.1%(RSD=0.30%,n=6);(R,S)-告依春进样浓度在1.920~76.798μg·ml^(-1)范围与峰面积线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为99.86%(RSD=1.14%,n=6);绿原酸进样浓度在2.396~92.891μg·ml^(-1)范围与峰面积线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为98.57%(RSD=0.75%,n=6);苦杏仁苷进样浓度在1.982~79.279μg·ml^(-1)范围与峰面积线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为99.67%(RSD=0.59%,n=6);甘草苷进样浓度在2.136~85.440μg·ml^(-1)范围与峰面积线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为98.57%(RSD=0.69%,n=6);甘草酸进样浓度在2.432~97.260μg·ml^(-1)范围与峰面积线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为98.57%(RSD=0.11%,n=6)。结论:该方法准确、重复性好,可用于小儿咳喘灵颗粒的质量控制。

HPLC法同时测定小儿宣肺止咳颗粒中8种成分含量

目的:建立RP-HPLC法同时测定小儿宣肺止咳颗粒中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、黄芩苷、升麻素苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷、芥子碱硫氰酸盐、甘草酸铵的含量。方法:色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(含0.04%三乙胺和0.02%二丁胺),梯度洗脱;检测波长:254 nm;流速:1.0 ml·min^-1;柱温:30℃;进样量:10μl。结果:盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、黄芩苷、升麻素苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷、芥子碱硫氰酸盐、甘草酸铵检测质量浓度的线性范围分别为6.405~57.64,7.845~70.60,36.96~332.6,78.30~704.7,3.126~28.13,2.844~25.59,3.478~31.30,15.78~142.0μg·ml^-1(r值范围0.9994~0.9999);平均加样回收率分别为98.6%,99.2%,99.0%,99.1%,98.7%,98.9%,98.5%,99.0%(RSD<2.0%,n=6);精密度、重复性、稳定性(48 h)试验的RSD<2.0%(n=6)。结论:该方法简单、有效、结果准确,可用于小儿宣肺止咳颗粒中上述8种成分含量的同时测定。

UPLC-Q-Orbitrap高分辨质谱定量分析风寒感冒颗粒中的11个成分

目的:建立UPLC-Q-Orbitrap高分辨质谱同时测定风寒感冒颗粒中盐酸麻黄碱、苦杏仁苷、葛根素、升麻素苷、甘草苷、橙皮苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、桂皮醛、桔梗皂苷D、欧前胡素、甘草酸铵含量的方法,为风寒感冒颗粒的质量评价提供参考。方法:采用Thermo Fisher Scientific Hypersil GOLD aQ C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm),以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速300 mL·min^-1;电喷雾正负离子源同时检测,Full MS/dd-MS2扫描模式,通过比较样品与对照品的色谱保留时间、高分辨一级质谱、色谱峰面积,同时进行11个成分的定量测定。结果:11个成分的线性范围为0.5~200 ng·mL^-1,相关系数(r)均不低于0.998,回收率为90%~110%,RSD为1.1%~2.0%;7批样品中盐酸麻黄碱、苦杏仁苷、葛根素、升麻素苷、甘草苷、橙皮苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、桂皮醛、桔梗皂苷D、欧前胡素、甘草酸铵含量范围分别为26.25~301.25、611.25~1550、157.5~1 850、0~220.0、8.75~140、105.0~451.25、15.0~118.75、0~210、10.0~40.0、12.5~41.25、31.25~302.5μg·g^-1,含量差别明显。结论:该法快速简便,高通量,选择性好,灵敏度高,能为风寒感冒颗粒的质量控制提供依据。

经典名方阳和汤指纹图谱及功效关联物质预测分析

目的 基于指纹图谱及网络药理学,建立阳和汤指纹图谱检测方法,并对其功效关联物质进行预测分析,为阳和汤质量控制提供参考依据。方法 采用HPLC建立阳和汤指纹图谱,对共有峰进行归属和指认,并运用网络药理学构建阳和汤“成分-靶点-通路”网络关系图,进一步佐证阳和汤功效成分选择的合理性。结果 阳和汤的HPLC指纹图谱共标定15个共有峰,通过对照品指认出2号峰5-羟甲基糠醛、5号峰芥子碱硫氰酸盐、8号峰甘草苷、9号峰毛蕊花糖苷、11号峰肉桂酸、12号峰桂皮醛、13号峰甘草酸、15号峰盐酸麻黄碱8个共有色谱峰,相似度均>0.83,主要药效物质群可以从药材-饮片-基准样品逐级较为完整的传递,且归属关系清晰明确;采用网络药理学对筛选出的8个活性成分进行“成分-靶点-通路”网络构建与分析,富集的通路中包括癌症信号通路、脂质和动脉粥样硬化信号通路、鞘脂信号通路、甲状腺激素信号通路等。根据成分、靶点以及通路之间的连接度,初步预测甘草酸、甘草苷、桂皮醛、肉桂酸、毛蕊花糖苷、芥子碱硫氰酸盐、盐酸麻黄碱7个活性成分可能通过调节这些信号通路达到温阳补血、散寒通滞的作用。结论 通过HPLC指纹图谱结合网络药理学分析预测阳和汤治疗疾病的潜在功效关联物质,建立的方法操作便捷,稳定性好,可用于阳和汤的质量控制,也为深入研究阳和汤的质量标准和作用机制提供参考。

小儿风叶咳喘平合剂3个成分在大鼠体内的药代动力学研究

目的:对小儿风叶咳喘平合剂中3个主要药效成分在大鼠体内的代谢产物以及药代动力学进行研究。方法:基于超高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(UHPLC-ESI TOF MS)方法,采用ACQUITY UPLC?HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm),以0.1%甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),质谱采用电喷雾离子源(ESI),以正负离子模式采集多级质谱碎片信息,对大鼠灌胃小儿风叶咳喘平合剂后的血清、胆汁、尿液和粪便进行分析,结合离子碎片进行代谢产物鉴定分析;同时采用超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)的技术进行药代动力学研究。以格列齐特为内标物,采用ACQUITY UPLCⓇ BEH C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm, 1.7μm),以0.1%甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱。血浆样品采用甲醇沉淀蛋白,采用ESI及多反应监测(MRM),选择监测离子(麻黄碱m/z 166.2→148.1、甘草次酸m/z 471.2→453.2、对香豆酸m/z 162.9→119.1、内标m/z 322→170)。小儿风叶咳喘平合剂分别按2、5、10 mL·kg^(-1)灌胃,测定其中3个成分的质量浓度,并用DAS 3.1软件计算药代动力学参数。结果:共鉴定出3个原型及10个代谢产物[Ⅰ相(去甲基化、氧化)代谢、Ⅱ相(甲基化、硫酸酯化、葡萄糖醛酸苷化结合)代谢];3个成分在血浆中无干扰,专属性符合要求;规定范围内线性关系良好(r均>0.995 0);提取回收率和基质效应在接收范围之内;常温、进样器、冻融稳定性均符合要求;3个成分均符合二室模型。结论:采用UHPLC-ESI-TOF的方法鉴定了小儿风叶咳喘平合剂中3个主要药效成分的代谢产物,同时采用UHPLC-MS/MS的技术对3个成分在大鼠体内的血药浓度进行检测,并计算药代动力学参数,为进一步了解小儿风叶咳喘平合剂体内过程,探索功效物质基础提供理论依据。

半夏及其炮制品化学成分及功效的差异研究

目的研究半夏及其不同炮制品化学成分及功效的差异。方法采用HPLC法测定半夏及其炮制品清半夏、姜半夏、法半夏水提取物中8种有效成分肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱、甘草苷、甘草酸铵、6-姜辣素含量;通过小鼠气管段酚红法和浓氨水刺激小鼠引咳法对半夏传统功效祛痰、止咳进行药效学研究。结果半夏炮制品中肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱含量较半夏生品明显下降,法半夏中未检出肌苷。3种炮制品相比,清半夏中肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸含量最高,姜半夏最低,与祛痰作用强弱一致,该4种成分是祛痰作用的活性成分,清半夏炮制时加入白矾,也增强其化痰功效;法半夏止咳作用最强,其次为半夏、清半夏,姜半夏作用最弱,法半夏经甘草、石灰水制后,辅料甘草(引入甘草苷、甘草酸铵)的加入增强了法半夏止咳作用。姜半夏经生姜、白矾制后,生姜(引入6-姜辣素)增强姜半夏止呕作用,减弱化痰、止咳作用。结论半夏炮制后化学成分及功效均发生一定变化,不同炮制方法对其化学成分和功效的影响不同。