Molecular characterization and efficacy evaluation of a transgenic corn event for insect resistance and glyphosate tolerance

A transgenic maize event ZD12-6 expressing a Bacillus thuringiensis （Bt） fusion protein CrylAb/Cry2Aj and a modified 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase （EPSPS） protein G10 was characterized and evaluated. Southern blot analysis indicated that ZD12-6 is a single copy integration event. The insert site was determined to be at chromosome 1 by border sequence analysis. Expression analyses of Bt fusion protein CrylAb/Cry2Aj and the EPSPS protein G10 suggested that they are both expressed stably in different generations. Insect bioassays demonstrated that the transgenic plants are highly resistant to Asian corn borer （Ostnnia furnacalis）, cotton boll worm （Helicoverpa armigera）, and armyworm （Mythimna separata）. This study suggested that ZD12-6 has the potential to be developed into a commercial transgenic line.

可去除选择标记的转Bt基因抗虫玉米研究

将组成型表达的玉米泛素启动子与苏云金杆菌杀虫蛋白基因Bt连接,插入根瘤农杆菌双T-DNA质粒,构建一个T-DNA结构域含有抗潮霉素选择标记基因hyg,另一个T-DNA结构域含有抗虫基因的双T-DNA单子叶植物表达载体,用以转化农杆菌菌株,再通过共培养转化玉米胚性愈伤组织。通过潮霉素培养基抗性筛选,用特异PCR扩增和Southern杂交检测,从分化再生的T0代植株中,鉴定出4个转化Bt基因的阳性植株。目前,正结合进行田间分离纯合和DNA分子鉴定,培育去除选择标记基因的转基因抗虫玉米自交系。

玉米Bt转基因植株抗虫性量化分析

对 8 7- 1,80 85 ,综 3,N80 8等 4个回交一代Bt转基因材料进行田间抗虫性接卵鉴定的结果表明 ,成株期转基因材料群体茎秆的平均抗虫性较对照提高 45 %以上 ,差异达显著或极显著水平 ,叶片的抗虫性提高 30 %以上 ,不同遗传背景的转基因材料 ,抗性表现不一 .回交一代群体内 ,不同单株的抗虫性差异悬殊 。

Bt抗虫水稻转育后代两种筛选方法的比较

【目的】通过比较分子标记辅助选择和除草剂抗性筛选两种检测方法的优缺点,为快速、准确、经济有效地选择抗螟虫水稻转育后代提供依据。【方法】用分子标记检测和除草剂抗性筛选两种方法,对不同组合的抗螟虫转育后代进行筛选,同时采用ELISA检测方法对筛选的抗性株系测定杀虫蛋白含量,比较两种筛选方法的准确性。【结果】在以T1C-19为供体亲本的4个组合169个单株中,两种筛选方法的符合率达到98.2%;而以T2A-1为供体亲本的3个组合141个单株中,两种筛选方法的符合率达到98.6%。在随机选择的经两种筛选方法鉴定均为阳性的144个单株中,均含有对应Bt抗虫基因的杀虫蛋白表达量,与亲本T1C-19、T2A-21相比,Bt抗虫水稻转育后代中个别单株的Bt蛋白含量出现大幅度下降或上升的现象。【结论】分子标记检测和除草剂抗性筛选对抗螟虫水稻转育后代的选择均有很高的准确性:分子标记检测准确可靠,且不受环境影响,但费用相对高;除草剂抗性筛选法耗费低、简便易行,但易受雨天影响。在筛选的过程中可根据现有的条件做出适宜选择。

利用分子标记辅助选择培育转Bt基因抗虫水稻

为培育转Bt基因抗虫水稻品种材料,以传统杂交的方法将3个Bt明恢63中的Bt基因cry1C*、cry2A*和cry1Ac/Ab,转育到水稻品种秀水123、湘晴、旱恢3号和沪旱1B中;以回交二代自交三代(BC2F3)水稻叶片为材料,利用分子标记辅助选择、田间除草剂筛选和试纸条检测方法,以获得新型转Bt基因株系。并在全生育期实行除不喷施农药外的正常田间管理的转基因植株的田间抗虫鉴定方法筛选出抗虫性良好、农艺性状优良的株系,为后续抗虫育种提供材料。BC2F3代PCR检测及试纸条检测的结果显示分别获得cry1C*和cry2A*基因的沪旱1B、秀水123和湘晴的纯合株系。同时,在田间自然诱发虫害条件下,转基因株系对稻纵卷叶螟虫表现出强抗性。

Bt-799玉米对Wistar大鼠食用安全性评价研究

目的:用Bt-799玉米饲喂Wistar大鼠14w,观察其对大鼠的亚慢性毒性作用,对Bt-799玉米的食用安全性做出初步评价。方法:100只刚断乳Wistar大鼠按性别和体重分为5组:空白对照组(BC)、Bt-799玉米低(TL)、中(TM)、高(TH)剂量组和亲本非转基因玉米"郑58"组(N)。空白对照组给予标准AIN-93G配方饲料,后四组饲料相应玉米添加量分别为9.41%、28.23%、84.68%、84.68%,各营养成分依据AIN-93G配方补齐。各组动物分别饲喂相应饲料14w,每天观察一般情况,每周记录体重、进食量、食物利用率,实验结束时检测血常规、血生化,计算脏器系数并进行组织病理学检查。结果:体重、进食量、血常规、血生化、脏体比等指标均有项目检测出统计学差异,但由于未出现剂量-反应关系、相关病理学检测未发现有意义的病理改变等原因,认为这些差异不具有生物学意义,与转基因操作无关。结论:Bt-799玉米对Wistar大鼠生长发育无明显不良影响,Bt-799玉米与亲本"郑58"玉米对Wistar大鼠具有同等的食用安全性。

高产优质转Bt基因抗虫棉品种国审“石抗126”

石抗126是石家庄市农业科学研究院育成的转B t基因抗虫棉新品种,具有高产、优质、多抗、适应性广等特点,适宜在黄河流域棉区春棉种植。

高衣分转Bt+GNA双价基因抗虫棉新种质的选育与利用

本研究对转Bt和GNA双价基因后代植株,经南繁加代、抗虫检测、自交、单株和株系选择、纤维品质测定和产量比较试验,选育出双价转基因抗虫棉种质系BGsm16。该种质系高抗棉铃虫等鳞翅目害虫,对蚜虫有一定的抑制作用,抗虫性稳定且不随世代的增加而减弱,衣分高(48.0%左右),配合力好,结铃性强,通风透光,皮棉产量比受体材料苏棉16号增产11.1%,品质两者相当。与其配置的杂交棉组合衣分高,丰产性好,品质高于对照南农8号,有着很强的杂种优势。转Bt和GNA双价基因抗虫棉种质系BGsm16的成功选育,加强转基因棉花的抗虫能力,拓宽了抗虫谱,并有助于延缓害虫对抗虫棉产生抗(耐)性;同时改变了传统对常规抗虫棉衣分低的认识,丰富了抗虫棉种质资源,对选育高衣分杂交抗虫棉有良好的应用前景。

转Bt基因玉米的抗虫鉴定及杂种优势

[目的]研究转Bt基因玉米Zea may材料表达、产量潜力及杂种优势表现,为转基因材料遗传改良提供参考。[方法]以Reid群骨干系PH6WC及育成的自交系J1490、J1495、4DH10和外引系PH1CPS作母本,以Non-Reid为基础的转Bt基因材料6DH85、J1401、6DH222、8DH273和8DH279以及自选系J9D207、J1628、J1668为父本,按NCⅡ设计组配40(5×8)个杂交组合,对转Bt基因材料抗虫表现和产量潜力进行研究。[结果]通过回交转育系谱法处理后代获得转基因材料中的部分Bt基因丢失或者沉默,没有在子代中成功表达出相应蛋白。转Bt基因的杂交组合在一定程度上可以避免因虫害造成的产量损失,与对照品种相比,组合4DH10×8DH279表现最好,增产31.10%;组合J1495×J1401虽然含有Bt基因,且与其不含Bt基因的同父本组合相比增产效果明显,最高可增产65.77%,但与对照品种相比,仅增产10.04%。[结论]玉米转基因育种与常规育种相结合,对其跟踪测配,才有望培育出高产、抗虫优良品种。

可去除选择标记的转CpTI基因抗虫玉米研究

将组成型表达的玉米泛素启动子与豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI连接,插入根癌农杆菌双T-DNA质粒,构建一个T-DNA结构域含有抗潮霉素选择标记基因hyg;另一个T-DNA结构域含有抗虫基因的双T-DNA单子叶植物表达载体,用以转化农杆菌菌株,再通过共培养转化玉米胚性愈伤组织。通过潮霉素培养基抗性筛选,用特异PCR扩增和Southern杂交检测,从分化再生的T0代植株中,鉴定出7个转化CpTI基因的阳性植株。目前,正结合进行田间分离纯合和DNA分子鉴定,培育去除选择标记基因的转基因抗虫玉米自交系。

利用PMI选择标记进行杨树转基因体系的研究

[目的]利用不同于抗生素的PMI为选择标记基因的遗传转化体系,对杨树进行双抗虫基因(Bt和Cp TI)的转基因研究。建立杨树以PMI为安全标记基因的转基因体系,为安全、高效的林木转基因育种研究提供实验依据。[方法]选择已有的转Cp TI抗虫基因(利用Kmr选择标记获得)的美洲黑杨杂种优良无性系南林895杨(Populus×euramericana‘Nanlin895’)为受体材料,对杨树叶片、叶片分化芽、茎段生根的甘露糖敏感性等筛选优化,采用农杆菌介导的方法进行双抗虫基因的研究。[结果]较为适合的杨树叶片筛选培养基为:甘露糖8 g·L^(-1)和蔗糖22 g·L^(-1);叶片分化芽筛选培养基为:甘露糖10 g·L^(-1)和蔗糖20 g·L^(-1);茎段生根筛选培养基:甘露糖8 g·L^(-1)和蔗糖22 g·L^(-1)。在此基础上,获得了转Bt和Cp TI双抗虫基因的植株8株。[结论]初步建立了以PMI为安全标记基因的杨树转基因体系:确定了PMI筛选的最适选择压,成功构建了含PMI选择标记基因的植物抗虫表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化最终获得了转双抗虫基因植株。

利用分子标记辅助选择技术培育抗虫水稻品种的研究

Bt基因是从苏云金芽孢杆菌中克隆出的针对鳞翅目害虫的抗虫基因,经过基因工程方法人工改造已经获得Cry1Ab/Ac、Cry1C等抗虫基因。以云南主栽水稻品种楚粳28为受体,以携带Bt抗虫基因的"华恢1号"、"RJ-5"和"T1C-19"分别作为供体,利用分子标记辅助选择(MAS)技术进行回交育种,选育成携带Bt抗虫基因水稻新品系。结合农艺性状表现,获得了云抗虫稻1号、云抗虫稻2号、云抗虫稻3号Bt蛋白高表达的水稻抗虫品系。这些抗虫品系为云南省抗虫水稻的遗传改良和生产应用提供了基因资源和应用基础。