两种泥鳅不同核质关系下EST和MDH同工酶基因表达的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶不连续系统电泳方法分析了泥鳅和大鳞副泥鳅不同交配组合、不同核质关系下，胚胎发育阶段（０～１４５ ｈ） 酯酶（ＥＳＴ） 和苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ） 同工酶的分化表达谱式。ＥＳＴ 同工酶随细胞质、细胞核不同及胚胎发育各个时期具有不同的个体发育谱式。以泥鳅卵子为细胞质环境的Ⅰ、Ⅱ两组，杂交组（ Ⅱ） 的ＥＳＴ同工酶基因在受精后３ ｍｉｎ 至原肠中期，雄核基因参与表达与调控。以大鳞副泥鳅为细胞质环境的Ⅲ、Ⅳ两组，各酶均以细胞质调控为主。ＭＤＨ 同工酶在各组合及各个发育阶段均未表现出实质性差异，发现ｍＭＤＨ 为特异性酶谱。并具体分析和讨论了不同核质关系下同工酶基因表达和调控的时空顺序。

MDH和GDH活性与水稻杂种优势预测

本文从杂种优势预测所需的三个基本条件入手,研究了 MDH 和 GDH 活性作为水稻杂种优势预测生理参数的可能性。结果表明:MDH 活性在整个生育期中的变化呈现一定的规律性,并且杂种酶活性是由其双亲遗传性所决定的,同时,MDH 活性与多个生长性状及产量性状有密切的相关性。因此,利用 MDH 活性早期预测杂种后期生长和产量优势表现是一个有意义的生理参数。而 GDH 活性变化复杂,不适于作为优势预测的生理参数。

不同类型意大利蜜蜂MDHⅡ同工酶的研究

运用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦技术(IEF-PAGE),对有代表性的王浆蜂蜜双高产的“浙农大1号”意蜂品种(浙意,Ea)和中国本地意蜂(本意,Eb)、美国意蜂(美意,Em)、澳大利亚意蜂(澳意,Eo)、意大利意蜂(原意,Ee)等5个意大利蜂(ApismelliferaLigustica)品种试飞前的幼龄工蜂进行了苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶的基因型、基因型频率、基因频率、杂合度和纯合度的研究。由a、b、c3个等位基因编码的MDH图谱第二区带应有的a/a、a/b、a/c、b/b、b/c和c/c6种基因型,在Ea、Eb、Ee3种意蜂中全部出现;在Eo中出现a/b,a/c,b/c,c/c4种,在Em中出现a/c,b/c,c/c3种。联列表独立性检验结果,5个意蜂品种间的基因型频率、基因频率、杂合度、纯合度存在显著差异。

大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质

以大肠杆菌基因组DNA为模板,扩增得到苹果酸脱氢酶（mdh）编码基因mdh,构建了重组菌pET-28a-mdh/BL21并成功表达了mdh,大小约36 000。选用Ni柱亲和层析法纯化具有活性的苹果酸脱氢酶（mdh）,纯化后比酶活达到112.5 U/mg,纯化倍数达2.62倍,回收率为59%。并对该酶的酶学性质进行了初步研究,其中反应最适pH值为6.0,在pH值2.0~6.0范围内稳定;反应最适温度为37℃,在42℃以下酶的稳定性较好。K＋对酶有明显的激活作用,Cu2＋对酶有抑制作用,Hg2＋和Zn2＋对酶有很强的抑制作用。醇类对酶的活力影响不大,丙三醇可显著提高酶的热稳定性。酶动力学参数以草酰乙酸为底物的Km为0.235 mmol/L,Vmax为0.47μmol/（L.min）。

谷子MDH基因非生物逆境响应特性研究

为揭示谷子MDH基因对逆境胁迫的响应,本研究通过序列比对得到2个谷子苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因SiMDH1、SiMDH2,并对SiMDH1和SiMDH2的编码蛋白特征、基因结构、功能、进化等性状进行了系统的分析和预测,用荧光实时定量PCR(qPCR)检测了SiMDH1和SiMDH2在苗期不同逆境及关键生育期干旱胁迫和不同光照强度下的表达。蛋白特征参数和序列分析表明,SiMDH1和SiMDH2蛋白特征参数相似度很高,序列非常保守,都含有MDH基因的特征功能域苹果酸酶NAD结合域和苹果酸酶C端功能域。亚细胞定位预测显示,SiMDH1和SiMDH2主要定位于叶绿体、细胞质和线粒体。启动子区域顺式元件分析发现,在SiMDH1和SiMDH2启动子区域含有大量光应答、激素类和其他类应答元件。苗期逆境qPCR表达谱分析发现,SiMDH1和SiMDH2受脱落酸(ABA)、聚乙二醇(PEG)、高盐和低温不同程度诱导,揭示SiMDH1和SiMDH2参与了谷子苗期非生物逆境胁迫应答。进一步分析发现,SiMDH1和SiMDH2参与了谷子在拔节、抽穗、灌浆期的干旱应答,而光照强度会显著影响SiMDH1和SiMDH2基因在不同生育期的表达。本研究为进一步分析MDH逆境应答机制以及利用基因工程方法改善作物抗逆性提供了试验和理论支持。

LDH与MDH在大鼠角膜碱烧伤中的表达及在能量代谢中的意义

目的 :研究乳酸脱氢酶同工酶 (LDH)、苹果酸脱氢酶同工酶 (MDH)在大鼠角膜碱烧伤后的表达特点及它们之间的相关性 ,以探讨其对碱烧伤后能量代谢变化的影响。方法 :用醋酸薄膜电泳法测定LDH、MDH同工酶的含量 ,以探讨碱烧伤后能量代谢的变化特点。结果 :对LDH、MDH同工酶的百分含量进行扫描 ,结果发现同工酶百分含量明显改变。碱烧伤初期LDH1、LDH2 、LDH3和LDH4 下降 ,LDH5上升 ;当第 7～ 10d时LDH5逐渐恢复正常水平。MDH1、MDH2 与正常组比较无显著性差异 ,MDH3与正常组比较有显著性差异。结论 :碱烧伤后 ,由于免疫炎症反应的影响 ,使参与角膜能量代谢反应的酶含量发生改变 ,从而使能量代谢的状态也随之发生改变。MDH1、MDH2 和LDH5活性增强 ,导致无氧糖酵解增强 ,代偿能量的不足 ,弥补角膜碱烧伤后整个病理过程对能量的需求。

香蕉苹果酸脱氢酶基因克隆及其逆境胁迫表达

从香蕉果实抑制差减文库中获得一条香蕉苹果酸脱氢酶基因片段,采用RACE技术获得全长,命名为MaMDH;MaMDH基因全长1 249bp,编码332个氨基酸。生物信息学分析预测其编码蛋白分子量约35 448Da,等电点为6.53。与已知植物苹果酸脱氢酶基因相比,氨基酸同源性均达92%。保守结构域分析发现,MaMDH基因具有NAD结合位点、苹果酸结合位点和二聚体结合位点。系统进化树比对分析表明,MaMDH与玉米和小麦的亲缘关系较近。MaMDH基因在乙烯利处理香蕉苗中上调表达;在盐、Al 3+胁迫和香蕉尖孢镰刀菌4号生理小种处理幼苗中先上调表达,后下调表达;在冷害胁迫幼苗中先下调表达,后上调表达;而在干旱胁迫、伤害胁迫幼苗中表达没有明显变化。研究表明,香蕉中的苹果酸脱氢酶基因具有响应生物胁迫和非生物胁迫能力,可能在香蕉适应衰老、盐、铝、低温胁迫和枯萎病菌侵染等逆境中发挥重要作用。

微透析法获取鹅掌柴嫩茎质外体汁液的研究

该文研究的重点是获取质外体汁液。假设微透析技术可以在植物上得到质外体汁液,并以盆栽鹅掌柴为材料,在活体嫩茎插入微透析探针后的不同时间段内分别收集透析液,测定其中的离子浓度和苹果酸脱氢酶活性加以验证。结果表明:在探针插入120 min后,收集的透析液中Na+、K+和Ca2+浓度逐渐趋于平缓,并且苹果酸脱氢酶的活性消失,从而证明120 min后得到的微透析液,没有受到破损细胞液的污染,是纯净的鹅掌柴嫩茎质外体汁液,从而为活体、方便、快捷地获取植物质外体汁液提供新的方法。

赤眼鳟形态特征及其两种同工酶的组织特异性分析

【目的】从形态特征和生化遗传层面上丰富赤眼鳟种质资源研究数据,同时为筛选出鉴定赤眼鳟种群的生化遗传标记打下基础。【方法】采用形态学测量观察赤眼鳟的形态特征,并以聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其不同组织(心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏)中的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH),分析两种同工酶表达的组织特异性。【结果】赤眼鳟的眼上缘可见一红斑,鳃耙短而疏,主要形态特征为背鳍D.iii-7,胸鳍P.i-14,臀鳍A.iii-7~8,腹鳍V.i-8,其齿式2·4·5/4·4·2或2·4·4/4·4·2。从赤眼鳟的心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏等5种组织中共检测到7条LDH酶带和6条MDH酶带,不同组织中的酶带数目和活性各不相同,呈明显的组织特异性,且同一组织不同个体间也存在明显差异。【结论】同工酶表达的组织特异性除了受遗传基因调控外,还与各组织的生化代谢活动相关,其中心脏LDH可作为鉴定赤眼鳟种质的生化遗传标记。

牛带绦虫亚洲亚种苹果酸脱氢酶基因的生物信息学分析

利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY)中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析工具,结合其他生物信息学分析软件包进行分析。牛带绦虫亚洲亚种苹果酸脱氢酶(MDH)基因是全长基因,长度为1212bp,编码区为30～1028bp,编码332个氨基酸,无跨膜区,具有多个磷酸化位点,蛋白理化性质稳定;预测3个主要的抗原表位(aa95～aa100、aa322～aa327和aa117～aa122)在MDH空间结构上相距较远的分子表面,aa117～aa122属于带绦虫共有的线性抗原表位。预测胞桨型苹果酸脱氢酶是一个潜在的诊断抗原。

西方蜜蜂六个亚种苹果酸脱氢酶Ⅱ基因的遗传差异

研究了西方蜜蜂Apismellifera 6亚种———浙农大 1号意蜂 (ZND A .m .ligustica)、东北黑蜂 (A .m .ssp .)、卡尼鄂拉蜂 (A .m .carnica)、喀尔巴阡蜂 (A .m .carpatica)、高加索蜂 (A .m .caucasica)和乌克兰蜂 (A .m .acervorum)苹果酸脱氢酶Ⅱ的基因型频率、基因频率和杂合纯合度。浙农大 1号意蜂、喀尔巴阡蜂和高加索蜂的纯合度较高 ,但浙农大 1号意蜂等位基因c频率最高 ,喀尔巴阡蜂等位基因b频率最高 ,高加索蜂等位基因a频率最高 ;东北黑蜂、卡尼鄂拉蜂和乌克兰蜂是高度杂合的亚种 ,但东北黑蜂等位基因a、b、c的频率差异较小 ,卡尼鄂拉蜂和乌克兰蜂主要存在a、c两个等位基因 ,b出现频率很小 ;6亚种的基因型频率、基因频率和杂合纯合度都有极显著差异。这些差异将从遗传和生化角度为西方蜜蜂 6个亚种的鉴别提供依据。

美洲鲥形态特征及其两种同工酶的组织特异性分析

【目的】从形态特征和生化遗传层面丰富美洲鲥种质资源研究内容,同时为筛选出鉴定美洲鲥种质的生化遗传标记打下基础。【方法】通过形态测量获取美洲鲥的可数性状和可量性状,并采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳对美洲鲥6种组织(心脏、眼睛、肌肉、肝脏、肾脏和鳃)的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)进行检测分析。【结果】美洲鲥体侧扁,呈纺锤形,背、腹缘呈浅弧形,背部灰黑色,略带蓝绿色金属光泽,体侧和腹部均为银白色;其鳍式为背鳍D.iii-13~15,胸鳍P.i-14~17,腹鳍V.i-7~9,臀鳍A.i^ii-16~20,尾鳍C.21~25。美洲鲥鳃耙近7字形,左侧第一鳃弓外侧鳃耙数24~37+47~64。LDH和MDH在美洲鲥心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏、肾脏和鳃组织中的酶带数目及其活性各不相同,呈明显的组织特异性,且美洲鲥个体间也存在差异。【结论】美洲鲥同工酶表达的组织特异性受遗传基因调控,同时与各器官组织的生化代谢活动相关。实际生产中,建议选取鳃LDH作为鉴定美洲鲥种质的生化遗传标记。

一种新的苹果酸脱氢酶同工酶染色法

以N -甲基吩嗪甲基硫酸盐 (PMS)为介体 ,使苹果酸脱氢酶 (MDH)同工酶催化反应产生的NADH将铁氰化钾还原为亚铁氰化钾 ,再利用亚铁氰化钾与三氯化铁反应生成普鲁士蓝的性质 。

脂肪源对奥尼罗非鱼体脂沉积及代谢的影响

在饲料蛋白质和能量水平均能满足生长需要的基础上,分别以猪油、豆油、鱼油和茶油作为脂肪源,配制4种饲料(油脂的添加水平为4.5%),投喂初始体质量为(4.60±0.5)g的奥尼罗非鱼幼鱼,于1.5m×1m×1m的水族箱中饲养10周。每组3个平行,每箱15尾鱼,试验水温25～28℃。研究饲料脂肪源对奥尼罗非鱼体脂沉积、脂类代谢相关酶活性及基因表达的影响。结果显示,与鱼油相比,茶油、豆油和猪油可明显提高鱼体内脂肪的含量(P<0.05),其中茶油组显著高于其他组(P<0.05);饲料脂肪源对肌肉中脂肪含量无显著影响,但与鱼油相比,其他脂肪源明显提高其肝体指数(P<0.05),而腹脂率则相反;鱼油可明显提高肝脏中苹果酸脱氢酶和脂蛋白脂酶的活性及mRNA表达(P<0.05);茶油明显降低脂肪中脂蛋白酶的活性及mRNA表达(P<0.05),豆油和猪油可明显提高脂肪中苹果酸脱氢酶的活力及mRNA表达(P<0.05)。饲料脂肪源对奥尼罗非鱼体脂的沉积的影响主要体现在肝脏和脂肪,而不同组织内脂蛋白酶活性及mRNA表达的变化是影响体脂沉积的主要因素。

苹果酸脱氢酶的克隆、表达与生物活性的研究

根据大肠杆菌DNA中苹果酸脱氢酶的序列合成上下游引物 ,以大肠杆菌E .coliDH5α基因组为模板通过PCR扩增得到苹果酸脱氢酶的基因 ,将该基因与表达载体pET2 8a连接构建重组子 ,将该重组子转化入大肠杆菌E .coliBL2 1构建工程菌 ,通过IPTG诱导表达苹果酸脱氢酶 ,并初步测定了该菌株拆分DL 苹果酸的能力。

辣椒细胞质雄性不育系的3种同工酶分析

以辣椒细胞质雄性不育系21A及其同核异质保持系21B为试验材料,比较分析两系雄配子发育过程中酯酶(EST)、谷氨酸脱氢酶(GDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶的表达特征.结果表明:幼叶和花蕾的EST同工酶酶谱在谱带数目和酶带强弱上存在时空表达差异,并且随着雄配子发育的进行,保持系21B从中花蕾至特大花蕾比不育系21A多1条清晰的谱带(EST3e),其差异表达发生在细胞学上观察到的败育时期之前;在GDH同工酶中,保持系21B从大花蕾至特大花蕾比不育系多6条谱带(GDH1和GDH1/2),酶谱差异表达时期与细胞学上观察到的败育时期一致;而在MDH同工酶中,不育系21A和保持系21B的幼叶和各级花蕾的酶谱在谱带数目和谱带强弱上均没有明显差异.

3种菊酯类农药对南美白对虾同工酶表型的影响

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对注射不同浓度菊酯类农药的南美白对虾Penaeusvannamei3种组织的酯酶同工酶(EST)和苹果酸脱氢酶同工酶(MDH)进行了分析比较。结果表明:经农药胁迫后,虾体内各组织同工酶酶带出现明显的变化,在不同浓度下存在明显的差异,并具有明显的组织特异性。由于不同种农药的作用结合位点不同,使得酶带变化规律也不相同,当虾体被注射农药后,EST酶带变化较复杂,而MDH酶带则较稳定。当虾体受到农药胁迫时,可引起虾体无氧代谢加强,有氧代谢和酯类降解代谢减弱,正常的物质代谢平衡被破坏,因而使供给机体的能量减少,机体的免疫力和抵抗外界环境的能力均明显降低;另外,还有可能诱发虾病的暴发或导致虾的大批量死亡。

鸭心苹果酸脱氢酶的分离纯化及酶学性质

取新鲜鸭心,通过匀浆、硫酸铵沉淀、有机溶剂沉淀、DEAE-Sepharose层析以及Superdex-200层析等方法纯化,获得鸭心中所含的两种电泳纯的苹果酸脱氢酶同工酶（c-MDH和m-MDH）,并对粗酶液中含量较高的c-MDH进行酶学性质研究。结果表明：c-MDH和m-MDH纯化倍数分别为69.07倍和130.40倍,酶活力回收率分别为25.54%和10.98%,亚基分子质量分别为39.58ku和37.62ku。c-MDH酶学性质研究表明：该酶最适反应温度为55℃,在30℃以下时比较稳定;最适反应pH为7.2,在pH6-9范围内稳定性较好;其对草酰乙酸的K m值为140.93 mol/L;草酸、SDS、Cu2＋、Ag＋对该酶的抑制作用非常强烈,而Mg2＋、K＋、Ba2＋对该酶表现出明显的激活作用。

盘基网柄菌(Dictyosteliumdiscoideum)KAX-3和AK127细胞形态发生和同工酶的比较研究

比较了盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)野生型细胞KAx-3和突变型细胞AK127在多细胞发育过程中的形态发生.两者有明显的区别;突变细胞的发育只能停留在细胞疏松聚集阶段,而野生型细胞能顺利完成整个发育过程.利用SDS-PAGE电泳比较分析了两者在重要发育阶段的三种同工酶:酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)和谷氨酸脱氢酶(GDH).结果发现:AK127细胞发育阶段含有两种酯酶成分α和β,而KAX-3细胞中只有一种酯酶α;而且AK127细胞中苹果酸脱氢酶(MDH)含量在发育后14 h和16 h均高于KAX-3细胞;谷氨酸脱氢酶(GDH)同工酶在发育后14 h时相对含量高于KAX-3细胞,而在发育后16 h含量却低于KAX-3细胞.这些数据显示了两种类型细胞的同工酶有明显的差异;表明突变细胞基因的表达发生了一定的改变,由此说明了gp150分子在盘基网柄菌细胞发育中有重要作用.

鸭心苹果酸脱氢酶功能基团的研究

分别用对氯汞苯甲酸、苯甲基磺酰氟、N-溴代琥珀酰亚胺、琥珀酸酐、乙酰丙酮、溴代乙酸、N-乙酰咪唑、二巯基苏糖醇、氯胺-T等化学修饰剂对鸭心苹果酸脱氢酶进行修饰。结果表明:半胱氨酸巯基、色氨酸侧链吲哚基和丝氨酸羟基是鸭心细胞质苹果酸脱氢酶和线粒体苹果酸脱氢酶发挥活性的必需基团;而甲硫氨酸的硫醚基、组氨酸的咪唑基、精氨酸胍基、二硫键、酪氨酸的酚羟基、赖氨酸的ε-氨基与鸭心苹果酸脱氢酶活性不直接相关,不是酶活性中心的必需基团。