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西农萨能羊乙酰/丙二酸单酰基转移酶基因重组腺病毒载体的构建
被引量:
2
1
作者
朱江江
罗军
+5 位作者
王紫骞
许会芬
孙雨婷
石恒波
郝娟
赵丽媛
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期489-495,共7页
本研究旨在通过构建西农萨能羊脂肪酸合酶(FASN)基因乙酰/丙二酸单酰基转移酶(MAT)区域的重组腺病毒载体,为研究其在奶山羊乳腺上皮细胞中过表达以及功能和作用机制做准备。根据GenBank收录的西农萨能羊MAT序列设计引物,PCR扩增并克隆...
本研究旨在通过构建西农萨能羊脂肪酸合酶(FASN)基因乙酰/丙二酸单酰基转移酶(MAT)区域的重组腺病毒载体,为研究其在奶山羊乳腺上皮细胞中过表达以及功能和作用机制做准备。根据GenBank收录的西农萨能羊MAT序列设计引物,PCR扩增并克隆测序。将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack/CMV上并线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasyⅠ的E.coli Bj5183感受态细胞进行同源重组,得到重组腺病毒质粒pAd-MAT-HIS,并用PacⅠ酶切鉴定,将经过PacⅠ线性化的pAd-MAT-HIS转染HEK 293细胞进行病毒包装和扩增,用LaSRT法测定病毒滴度。将本次克隆的MAT序列与GenBank收录的山羊序列对比发现,在601bp处碱基由G转变为A,导致氨基酸序列由丙氨酸(Ala)201转变为苏氨酸(Thr)201。酶切鉴定、绿色荧光蛋白观察、PCR及Western blot检测均证明,重组腺病毒质粒构建成功,病毒滴度为2×109 PFU.mL-1。本研究成功构建了重组腺病毒pAdEasy-MAT-HIS。
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关键词
奶山羊
乙酰/丙二酸单酰基转移酶
重组腺病毒
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职称材料
题名
西农萨能羊乙酰/丙二酸单酰基转移酶基因重组腺病毒载体的构建
被引量:
2
1
作者
朱江江
罗军
王紫骞
许会芬
孙雨婷
石恒波
郝娟
赵丽媛
机构
西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期489-495,共7页
基金
国家自然科学基因项目(31072013)
转基因生物新品种培育项目(2009ZX08009-162B)
公益性行业(农业)科研专项(201103038)
文摘
本研究旨在通过构建西农萨能羊脂肪酸合酶(FASN)基因乙酰/丙二酸单酰基转移酶(MAT)区域的重组腺病毒载体,为研究其在奶山羊乳腺上皮细胞中过表达以及功能和作用机制做准备。根据GenBank收录的西农萨能羊MAT序列设计引物,PCR扩增并克隆测序。将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack/CMV上并线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasyⅠ的E.coli Bj5183感受态细胞进行同源重组,得到重组腺病毒质粒pAd-MAT-HIS,并用PacⅠ酶切鉴定,将经过PacⅠ线性化的pAd-MAT-HIS转染HEK 293细胞进行病毒包装和扩增,用LaSRT法测定病毒滴度。将本次克隆的MAT序列与GenBank收录的山羊序列对比发现,在601bp处碱基由G转变为A,导致氨基酸序列由丙氨酸(Ala)201转变为苏氨酸(Thr)201。酶切鉴定、绿色荧光蛋白观察、PCR及Western blot检测均证明,重组腺病毒质粒构建成功,病毒滴度为2×109 PFU.mL-1。本研究成功构建了重组腺病毒pAdEasy-MAT-HIS。
关键词
奶山羊
乙酰/丙二酸单酰基转移酶
重组腺病毒
Keywords
dairy goat
malonyl/
acetyl
transferase
(
mat
)
recombinant adenovirus
分类号
S827 [农业科学—畜牧学]
S813.1 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
西农萨能羊乙酰/丙二酸单酰基转移酶基因重组腺病毒载体的构建
朱江江
罗军
王紫骞
许会芬
孙雨婷
石恒波
郝娟
赵丽媛
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
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