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乌丹丸对寒凝血瘀子宫内膜异位大鼠PI3K/Akt/mTOR自噬信号轴及相关分子表达的影响 被引量:5
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作者 张家蔚 薛晓鸥 +5 位作者 严培嘉 祝洁 李军 贺稚平 代勇 孙海芸 《环球中医药》 CAS 2023年第2期183-190,共8页
目的探讨乌丹丸对寒凝血瘀型子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)大鼠自噬信号轴磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB又称Akt)/雷帕霉素靶分子(mammalian target of rapamycin,mTOR)... 目的探讨乌丹丸对寒凝血瘀型子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)大鼠自噬信号轴磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB又称Akt)/雷帕霉素靶分子(mammalian target of rapamycin,mTOR)及相关分子表达的影响。方法随机将49只雌性SD大鼠分为假手术组、模型组、乌丹丸高、中、低剂量组、散结镇痛胶囊组、地诺孕素组,每组7只,采用冰水浴联合自体子宫内膜移植法建立寒凝血瘀EMs大鼠模型。假手术组及模型组每天给予10 mL/kg生理盐水灌胃,乌丹丸高、中、低剂量组分别给予2.4 g/kg、1.2 g/kg、0.6 g/kg灌胃,散结镇痛胶囊组每天给予0.48 g/kg灌胃,地诺孕素组每天给予0.2 mg/kg灌胃,各组持续用药28日。应用蛋白免疫印迹法和免疫组化法检测异位内膜组织自噬信号轴PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白以及相关自噬分子LC3、Beclin-1蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠异位内膜组织PI3K/Akt/mTOR蛋白表达上调,Beclin-1、LC3蛋白表达下调(P<0.01)。中药干预后,乌丹丸高、中剂量组、散结镇痛胶囊组和地诺孕素组异位内膜上PI3K/Akt/mTOR蛋白表达降低,而Beclin-1、LC3蛋白表达升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论PI3K/Akt/mTOR信号通路参与子宫内膜异位症发生,乌丹丸可能通过下调PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达,激活自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达,促进细胞自噬,治疗子宫内膜异位症。 展开更多
关键词 乌丹丸 子宫内膜异位症 磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶分子(PI3K/Akt/mTOR)信号通路 自噬 寒凝血瘀
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雷帕霉素抑制胆囊癌GBC-SD细胞的生长和转移 被引量:2
2
作者 刘兆龙 阎波 +5 位作者 罗芸葆 王永兵 韩策然 宋安 俞士勇 侯坤 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期600-603,共4页
目的:研究雷帕霉素(rapamycin)对胆囊癌GBC-SD细胞生长和转移的影响,探讨雷帕霉素治疗胆囊癌的临床应用前景。方法:采用MTT法检测不同浓度(12.5、25、50 nmol/L)的雷帕霉素对胆囊癌细胞增殖的影响,以流式细胞术检测不同浓度的雷帕霉素... 目的:研究雷帕霉素(rapamycin)对胆囊癌GBC-SD细胞生长和转移的影响,探讨雷帕霉素治疗胆囊癌的临床应用前景。方法:采用MTT法检测不同浓度(12.5、25、50 nmol/L)的雷帕霉素对胆囊癌细胞增殖的影响,以流式细胞术检测不同浓度的雷帕霉素对细胞凋亡和细胞周期的变化,Transwell小室检测雷帕霉素对细胞迁移能力的影响,利用Western blotting检测胆囊癌细胞中雷帕霉素哺乳动物靶标(mammalian target of rapamycin,mTOR)及其磷酸化p-mTOR水平。结果:雷帕霉素可显著抑制胆囊癌GBC-SD细胞中mTOR的磷酸化,但对mTOR表达无影响。雷帕霉素显著抑制胆囊癌细胞的生长,并呈剂量依赖性抑制(P<0.01)。雷帕霉素可引起胆囊癌细胞周期G1/S阻滞和细胞凋亡;可显著抑制胆囊癌细胞的转移(P<0.01)。结论:雷帕霉素能显著抑制胆囊癌细胞生长及转移,其机制可能与抑制p-mTOR通路、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 雷帕霉素 雷帕霉素哺乳动物靶标(mTOR) 胆囊肿瘤
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mTOR的结构与功能 被引量:13
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作者 朱伦 陈增良 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2006年第1期31-34,共4页
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)参与细胞内一系列生理病理过程,其存在形式主要有两种:mTOR-Raptor复合物和mTOR-R ictor复合物。mTOR-Raptor复合物的发现早于mTOR-R ictor复合物,作用主要是通过调节蛋白质的合成影响细胞生长和增殖,其活... 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)参与细胞内一系列生理病理过程,其存在形式主要有两种:mTOR-Raptor复合物和mTOR-R ictor复合物。mTOR-Raptor复合物的发现早于mTOR-R ictor复合物,作用主要是通过调节蛋白质的合成影响细胞生长和增殖,其活性能够被雷帕霉素抑制。mTOR-R ictor复合物的活性不能被雷帕霉素抑制,主要参与细胞骨架蛋白的构造,具体功能仍在进一步研究之中。对两种复合物的研究能够帮助寻找新的治疗肿瘤和代谢性疾病的药物。 展开更多
关键词 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 磷酸化 雷帕霉素
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跑台运动对大鼠骨骼肌mTOR mRNA和蛋白表达的影响 被引量:2
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作者 贺道远 曾凡星 翟昕元 《天津体育学院学报》 CAS CSSCI 北大核心 2008年第5期386-389,共4页
目的:mTOR信号调控骨骼肌蛋白翻译过程,本研究旨在探讨耐力运动对骨骼肌mTOR蛋白表达的影响。方法:SD大鼠分为运动组和对照组。运动组大鼠进行跑台坡度5°,上坡跑,速度20m/min,60min/次的跑台运动后12h,采用RT-PCR方法测定腓肠肌mTO... 目的:mTOR信号调控骨骼肌蛋白翻译过程,本研究旨在探讨耐力运动对骨骼肌mTOR蛋白表达的影响。方法:SD大鼠分为运动组和对照组。运动组大鼠进行跑台坡度5°,上坡跑,速度20m/min,60min/次的跑台运动后12h,采用RT-PCR方法测定腓肠肌mTORmRNA,western blot测定mTOR蛋白的表达。结果:1次急性运动后大鼠骨骼肌mTOR mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.05),4周持续耐力运动后大鼠骨骼肌mTORmRNA和蛋白表达显著上升(P<0.05)。结论:耐力运动后骨骼肌mTOR表达上升,提示mTOR可能参与肌肉生长对运动适应的调控。 展开更多
关键词 耐力运动 翻译调控 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)
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LY294002对人纤维肉瘤HT1080细胞生长的影响及机制研究 被引量:1
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作者 周虹 黄向阳 +3 位作者 杨婷 汪涛 徐丹 文富强 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期20-23,共4页
目的研究PI3K特异性抑制剂LY294002对人纤维肉瘤HT1080细胞生长的影响及机制。方法将对数生长期的HT1080细胞分组培养,对照组加入不含LY294002的培养液,实验组加入LY294002,浓度分别为5、10、25、50、100μmol/L,培养12 h和24 h后,用Sun... 目的研究PI3K特异性抑制剂LY294002对人纤维肉瘤HT1080细胞生长的影响及机制。方法将对数生长期的HT1080细胞分组培养,对照组加入不含LY294002的培养液,实验组加入LY294002,浓度分别为5、10、25、50、100μmol/L,培养12 h和24 h后,用SunBioTMAm-Blue法测定细胞增殖抑制率。100μmol/LLY294002作用HT1080细胞24 h后,观察细胞形态的改变,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并收集蛋白标本,Western Blotting检测p-Akt及p-mTOR蛋白的表达。结果与对照组比较,随着LY294002剂量、作用时间的增加,对HT1080细胞增殖抑制率增大(P<0.05)。LY294002(100μmol/L)作用24 h后HT1080细胞胞体皱缩,细胞数较对照组减少,细胞早期凋亡率较对照组增加(P<0.05),p-Akt(0.23±0.01)及p-mTOR(0.32±0.06)蛋白的表达低于对照组p-Akt(0.63±0.02)及p-mTOR(0.71±0.02)蛋白的表达(P<0.01)。结论LY294002通过抑制PI3K-mTOR信号通路来抑制HT1080细胞的生长,PI3K-mTOR信号通路参与纤维肉瘤细胞的生长调节,该通路可能作为治疗纤维肉瘤的新靶点。 展开更多
关键词 LY294002 纤维肉瘤 HT1080 PI3K-mTOR
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Sestrin2抗氧化应激作用在缺血再灌注中的研究进展 被引量:8
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作者 郭明 夏中元 《中国医药导报》 CAS 2017年第17期28-31,共4页
Sestrin2是一种高保守、应激诱导抑制雷帕霉素靶蛋白的重要蛋白分子。作为P53调节哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路抗氧化应激作用的一种重要蛋白分子,Sestrin2可以激活磷酸腺苷依赖蛋白激酶蛋白并磷酸化结节性硬化复合物,进而抑制哺乳... Sestrin2是一种高保守、应激诱导抑制雷帕霉素靶蛋白的重要蛋白分子。作为P53调节哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路抗氧化应激作用的一种重要蛋白分子,Sestrin2可以激活磷酸腺苷依赖蛋白激酶蛋白并磷酸化结节性硬化复合物,进而抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白,可减轻组织因缺血再灌注导致的损伤。近几年,国内外对Sestrin2蛋白分子的研究已有很大的进展,本文就近几年Sestrin2抗氧化应激作用研究进展以及其可能的临床应用进行综述。 展开更多
关键词 Sestrin2 磷酸腺苷活化蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 氧化应激
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哺乳动物雷帕霉素靶蛋白介导细胞自噬在肿瘤中的研究进展 被引量:4
7
作者 张浩然 乔旭旭 毕明宏 《中国医药导报》 CAS 2018年第25期32-35,共4页
自噬与肿瘤细胞的恶性转化和分化有关。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路和细胞自噬关系密切,其可通过调控细胞自噬而在肿瘤的发生和发展中发挥重要的作用。目前mTOR抑制剂(靶向抑制信号通路)的开发已成为抗肿瘤研究的重要领域,这将会... 自噬与肿瘤细胞的恶性转化和分化有关。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路和细胞自噬关系密切,其可通过调控细胞自噬而在肿瘤的发生和发展中发挥重要的作用。目前mTOR抑制剂(靶向抑制信号通路)的开发已成为抗肿瘤研究的重要领域,这将会是潜在的肿瘤治疗方法。本文就自噬通路中mTOR信号通路与肿瘤关系以及mTOR抑制剂的研究进展进行综述,希望能为肿瘤的研究及靶向药物的研制提供信息。 展开更多
关键词 自噬 肿瘤 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 治疗 研究进展
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p-mTOR/p70S6K信号通路在急性出血坏死型胰腺炎炎症反应中的调控作用 被引量:5
8
作者 黄洋峰 蒋薇 《山东医药》 CAS 2018年第13期17-20,共4页
目的探讨磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR)/磷酸化核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路在急性出血坏死型胰腺炎(ANP)炎症反应中的调控作用。方法 96只全雄SPF大鼠,随机分为ANP模型组、雷帕霉素组和空白对照组。其中ANP模型组经胰胆管逆行方... 目的探讨磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR)/磷酸化核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路在急性出血坏死型胰腺炎(ANP)炎症反应中的调控作用。方法 96只全雄SPF大鼠,随机分为ANP模型组、雷帕霉素组和空白对照组。其中ANP模型组经胰胆管逆行方向注射1 m L/kg的5%牛磺胆酸钠;雷帕霉素组在ANP模型组基础上,腹腔注射0.5 mg/kg的雷帕霉素。空白对照组不给予任何药物。各组分别于造模后3、6、12、24 h,随机取8只大鼠分别收集血清,检测血清淀粉酶(AMY)、TNF-α、IL-6、IL-10水平;采集胰腺组织,采用Western blotting法检测p-m TOR和p70S6K蛋白的表达,HE染色观察组织病理学变化,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果各时间点,雷帕霉素组大鼠血清中AMY、TNF-α和IL-6水平低于ANP模型组(P均<0.01),IL-10高于ANP模型组(P均<0.01);雷帕霉素组及ANP模型组各指标均高于空白对照组(P均<0.05)。雷帕霉素组胰腺组织中p-m TOR与p70S6K蛋白的表达量低于ANP模型组(P均<0.01),但仍高于空白对照组(P均<0.05)。雷帕霉素组的胰腺细胞凋亡指数低于ANP模型组,高于空白对照组(P均<0.01)。组织病理学结果显示,雷帕霉素组大鼠胰腺组织病变程度较ANP模型组轻。结论 p-m TOR/p70S6K通路活性降低可改善ANP大鼠炎症反应及减轻胰腺组织病变。 展开更多
关键词 急性出血坏死型胰腺炎 磷酸化雷帕霉素靶蛋白 磷酸化核糖体蛋白S6激酶 雷帕霉素 炎性因子 大鼠
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代谢相关通路在人肺癌细胞系A549原位移植瘤模型中的表达 被引量:2
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作者 卢蕾 魏思宇 +3 位作者 徐彩 蔺晓菁 何芸芸 练雪梅 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期888-892,共5页
目的:近年来,代谢与肿瘤发病的病因学研究已经成为热点,同时肺癌仍居恶性肿瘤发病率和死亡率榜首,本研究拟构建一个稳定易操作的肺癌原位移植瘤模型,并初步探讨代谢相关通路在该原位移植瘤模型中的表达。方法:选取雄性6~8周龄BABL/c裸... 目的:近年来,代谢与肿瘤发病的病因学研究已经成为热点,同时肺癌仍居恶性肿瘤发病率和死亡率榜首,本研究拟构建一个稳定易操作的肺癌原位移植瘤模型,并初步探讨代谢相关通路在该原位移植瘤模型中的表达。方法:选取雄性6~8周龄BABL/c裸鼠10只,优化麻醉用药及手术操作步骤,经气管移植5×106个细胞的A549肺癌细胞成瘤,观察移植瘤形成率、形成部位、大体形态、增殖分化程度。另取4只相同条件裸鼠进行手术空白对照。同时检测代谢相关通路蛋白STAT3、AKT和m TOR的表达情况等。结果:手术最佳麻醉条件为75 mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射;改进操作后经气管移植的小鼠肺癌形成率为80.0%;肿瘤形成以右肺上叶居多,呈明显腺癌结构,分化程度较低,移植瘤组织增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达高于肺组织,呈高表达状态。肿瘤负荷肺组织代谢相关通路蛋白信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB即AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)的磷酸化水平即p STAT3/STAT3、p AKT/AKT、p-m TOR/m TOR比值均高于正常肺组织,差异具有统计学意义(t=-4.381,-4.462,-4.951;P=0.041,0.011,0.038)。结论:通过改良经气管移植手术方式,可以构建一种操作简单、低成本、高效稳定的A549细胞肺癌移植瘤模型;代谢相关通路在肺癌的发生发展中也发挥了一定作用。 展开更多
关键词 肺癌 A549 原位移植 信号传导与转录激活因子3 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
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慢性间歇性低氧状态mTOR信号通路变化对大鼠胰岛β细胞数量的影响 被引量:2
10
作者 焦成 殷敏 +3 位作者 张敏娟 严降雨 李静 程雷 《中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志》 2015年第2期84-88,103,共6页
目的通过慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)大鼠模型,来探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路变化对大鼠胰岛β细胞数量的影响。方法 18只成年雄性SD大鼠随机均分为常氧组(A组)、... 目的通过慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)大鼠模型,来探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路变化对大鼠胰岛β细胞数量的影响。方法 18只成年雄性SD大鼠随机均分为常氧组(A组)、CIH组(B组)、药物CIH组(C组),BC组予CIH处理,C组给予腹腔注射雷帕霉素0.2mg/kg/day。5周后检测胰岛m TOR及通路相关蛋白指标e IF4E、p-S6的表达、每个胰岛胰岛素阳性区域的面积及胰岛β细胞数量,以及血清胰岛素含量。结果与A组相比,B组除e IF4E外各指标均升高,C组p-S6、每个胰岛内β细胞的个数及胰岛素阳性区域的面积减少。相对于B组,C组各指标均降低。结论 CIH状态下,m TOR信号通路激活诱导胰岛β细胞数量增多,雷帕霉素能抑制CIH引起的m TOR信号通路激活效应,降低m TOR通路相关蛋白指标表达水平和胰岛β细胞数量。 展开更多
关键词 阻塞性睡眠呼吸暂停 胰岛素分泌细胞 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
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哮喘大鼠气道中雷帕霉素靶蛋白的表达对气道重塑的影响 被引量:1
11
作者 罗云海 欧立文 李晓玲 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第2期190-192,共3页
目的:探讨哮喘大鼠气道中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达对气道重塑的影响。方法:将20只大鼠随机分为正常组(10只)和哮喘组(10只)。哮喘组分别于1d和8d用卵蛋白(OVA)10mg、氢氧化铝20mg生理盐水2mL制成悬液腹腔注射致敏。15d开始用1%OVA雾... 目的:探讨哮喘大鼠气道中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达对气道重塑的影响。方法:将20只大鼠随机分为正常组(10只)和哮喘组(10只)。哮喘组分别于1d和8d用卵蛋白(OVA)10mg、氢氧化铝20mg生理盐水2mL制成悬液腹腔注射致敏。15d开始用1%OVA雾化吸入激发,每周3次,共8周。末次激发24h后行支气管肺泡灌洗,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)离心,上清液用酶联免疫(ELISA)法测mTOR浓度,重悬液用RT-PCR测mTORmRNA。用图像分析仪测定气道内周径(Pi),外周径(Pe),并计算管壁面积(WA),气道平滑肌面积(SMC-A),气道平滑肌细胞数(N),且WA、SMC-A、N均用Pi进行标准化;正常组大鼠用生理盐水替代卵蛋白,余同哮喘组。结果:哮喘组mTOR浓度、mTORmRNA、WA/Pi、SMC-A/Pi和N/Pi均高于正常组,差异均有统计学意义;mTOR浓度和mTORmRNA与WA/Pi、SMC-A/Pi和N/Pi均呈正相关性。结论:哮喘大鼠气道中mTOR浓度和mTORmRNA高表达可能参与气道重塑。 展开更多
关键词 大鼠 哮喘 雷帕霉素靶蛋白 气道重塑
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mTOR信号在KA诱导幼鼠癎性发作后的表达变化研究 被引量:1
12
作者 张海菊 姚宝珍 凌伟 《癫痫与神经电生理学杂志》 2014年第6期321-324,F0003,共5页
目的:研究哺乳动物雷帕霉索靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号在幼鼠癎性发作后的表达变化。方法:海人藻酸(KA)诱导幼鼠癎性发作,根据疝性发作后不同的时间点(1h、3h、16h、24h、3d、5d、1w、2w、6w)进行取材... 目的:研究哺乳动物雷帕霉索靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号在幼鼠癎性发作后的表达变化。方法:海人藻酸(KA)诱导幼鼠癎性发作,根据疝性发作后不同的时间点(1h、3h、16h、24h、3d、5d、1w、2w、6w)进行取材,从大脑中分离KA注射侧海马组织,提取全蛋白进行westernblot检测观察癎性发作后mTOR信号通路活化的标志物核糖体蛋白56(p-S6)蛋白的表达变化。免疫组织化学检测海马区P-S6免疫阳性细胞的表达。结果:KA海马内注射1h、3h、16h、24h,3d,5d,1w,2w,6w大鼠海马组织进行westernblot检测,发现在急性期P-S6的表达量呈现持续升高的表达变化。KA致癎1w后,海马区p-S6阳性细胞表达相对于手术对照组明显增高(76±12VS25±5)。在大鼠大脑皮层神经元亦可见到致癎后大量表达的p-S6阳性神经元(88±13 VS 15±3)。结论:mTOR信号活化标志物p-S6蛋白在KA诱导幼鼠癎性发作后表达明显增加,抑制mTOR信号的异常活化或许成为预防癫癎形成的新靶点。 展开更多
关键词 癫癎 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) p-S6蛋白 幼鼠
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PI3K/Akt/mTOR/p70^(S6K)信号通路在肝纤维化发生发展中的作用 被引量:14
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作者 吴长会 沈敏 +1 位作者 李龙 韦嘉 《临床肝胆病杂志》 CAS 2015年第11期1928-1932,共5页
PI3K/Akt/m TOR/p70S6K是细胞生命活动的重要信号通路,在促进细胞生长、增殖、侵袭、抗凋亡及促进血管生成中具有重要作用。简述了PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路作用于肝星状细胞(HSC)而对肝纤维化发生发展产生的作用,分析表明阻断该... PI3K/Akt/m TOR/p70S6K是细胞生命活动的重要信号通路,在促进细胞生长、增殖、侵袭、抗凋亡及促进血管生成中具有重要作用。简述了PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路作用于肝星状细胞(HSC)而对肝纤维化发生发展产生的作用,分析表明阻断该信号通路中任一靶点均能抑制HSC活化、增殖,促进HSC凋亡,抑制HSC分泌细胞外基质和延缓肝纤维化进程,阻断该通路有望成为肝纤维化的治疗策略。 展开更多
关键词 肝硬化 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶类 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 核糖体蛋白质S6激酶类 70-k DA 综述
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1-甲基-4-苯基吡啶离子对人神经母细胞瘤细胞株哺乳动物雷帕霉素靶位信号通路的影响 被引量:1
14
作者 金虹艳 赵长振 +2 位作者 陈泽军 徐耑 孔岩 《临床神经病学杂志》 CAS 北大核心 2012年第3期208-210,共3页
目的研究1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)对人骨髓神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞哺乳动物雷帕霉素靶位(mTOR)信号通路相关蛋白表达的影响。方法体外培养的SH-SY5Y细胞分为正常对照组、MPP+0.25 mmol/L组、0.5 mmol/L组及1 mmol/L组,各MPP... 目的研究1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)对人骨髓神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞哺乳动物雷帕霉素靶位(mTOR)信号通路相关蛋白表达的影响。方法体外培养的SH-SY5Y细胞分为正常对照组、MPP+0.25 mmol/L组、0.5 mmol/L组及1 mmol/L组,各MPP+组细胞与含相应浓度的MPP+培养24 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞相对存活率;应用免疫印迹法检测各组细胞中mTOR蛋白、核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)、mTOR调控相关蛋白(Raptor)、雷帕霉素不敏感的mTOR伴侣蛋白(Rictor)以及与自噬相关的微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ)、Beclin1蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,各MPP+组细胞相对存活率显著降低(P<0.05~0.001);mTOR、p70S6K、Raptor、Rictor表达明显降低(P<0.05~0.001);LC3Ⅱ和Beclin1表达显著升高(P<0.05~0.001),均呈现出明显的量效关系。结论 MPP+通过抑制细胞中mTOR信号通路,诱导SH-SY5Y细胞自噬性死亡,并且与MPP+的浓度相关;这可能是MPP+导致PD动物模型发病的机制。 展开更多
关键词 1-甲基-4-苯基吡啶离子 哺乳动物雷帕霉素靶位 人神经母细胞瘤细胞株 自噬 帕金森病
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慢病毒介导的shRNA靶向干扰mTOR基因表达的稳定小鼠成纤维细胞株的建立
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作者 孙潇 陈雪娟 +1 位作者 赵晨 赵堪兴 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期688-692,共5页
背景年龄相关性黄斑变性(AMD)是一种严重影响视力的眼病。前期的研究发现蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)通路的激活与AMD的发病机制密切相关,寻找特异性抑制mTOR通路的方法成为治疗AMD的突破点。目的建立稳定抑制mTOR基因表... 背景年龄相关性黄斑变性(AMD)是一种严重影响视力的眼病。前期的研究发现蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)通路的激活与AMD的发病机制密切相关,寻找特异性抑制mTOR通路的方法成为治疗AMD的突破点。目的建立稳定抑制mTOR基因表达的小鼠成纤维细胞株,为探讨Akt/mTOR信号通路在AMD发生和进展中的作用提供细胞模型,观察TOR基因沉默对相关蛋白的影响。方法根据鼠源mTORmRNA序列设计并构建3对小发夹RNA(shRNA)干扰序列,分别与质粒GIPZ-GFP+Puro载体连接,构建重组质粒;将重组质粒与慢病毒包装质粒共同转染小鼠成纤维细胞株NIH/3T3细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到稳定细胞株,分别应用实时定量PCR和Western blot法检测NIH/3T3细胞中mTOR在基因及蛋白水平的表达变化,筛选出干扰效果最佳的shRNA序列。结果慢病毒感染NIH/3T3细胞3d后,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白(GFP)的表达,细胞的感染效率均达90%。实时定量PCR和Westernblot检测显示,NIH/3T3细胞中mTOR mRNA和蛋白表达电泳条带清晰、单一;低感染复数(MOI)下,shl组、sh2组和sh3组的NIH/3T3细胞敲低效率分别为31.3%、31.8%和45.3%,而在高MOI下,shl、sh2和sh3的敲低效率分别为47.1%、56.5%和71.6%。Westernblot检测发现,在低或高MOI下shl、sh2和sh3NIH/3T3细胞中mTOR蛋白的表达灰度条带均有不同程度的减弱,显示sh3为最有效的干扰靶点。结论成功构建了mTOR慢病毒表达载体并建立了稳定抑制mTOR基因表达的NIH/3T3细胞株。 展开更多
关键词 哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白 RNA干扰 基因沉默 小发卡RNA 慢病毒 年龄相关性黄斑变性
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阿伐他汀通过磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白途径调节HL-60白血病细胞凋亡的作用 被引量:7
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作者 刘苗 石清照 姜毅 《中华实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期198-202,共5页
目的观察阿伐他汀对白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响,探讨磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号途径在此过程中的作用。方法取对数生长期细胞,分为阴性对照组和实验组(阿伐他汀... 目的观察阿伐他汀对白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响,探讨磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号途径在此过程中的作用。方法取对数生长期细胞,分为阴性对照组和实验组(阿伐他汀干预水平分别为1、5、10μmol/L),培养12、24、48h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测白血病细胞的增殖能力;培养48h后,流式细胞术检测白血病细胞凋亡变化,反转录-聚合酶链反应(RT—PCR)和Western blot方法检测PI3K、AKT和mTOR基因表达的变化。结果阿伐他汀对白血病细胞HL-60有明显抑制增殖和促凋亡作用。10μmoL/L阿伐他汀对HL—60细胞干预48h后对细胞增殖的抑制作用最强,抑制率达到(39.77±3.01)%,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(t=4.016,P〈0.01),同时对细胞凋亡的诱导作用最强,凋亡率达到(43.29±3.91)%,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(t=3.625,P〈0.05)。此外,PI3K、AKT和mTOR在白血病细胞HL-60均有基础表达,10μmol/L阿伐他汀对HL-600细胞干预48h后,PI3K、AKT和mTOR基因mRNA表达水平下调最为明显,分别下降了(37.05±4.11)%、(53.79±3.27)%、(40.63±2.42)%,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(t=4.805、3.799、4.312,P均〈0.05),同时对PI3K、AKT和mTOR蛋白表达水平下调最为明显,分别下降了(41.09±3.17)%、(45.67±2.92)%和(63.41±3.59)%,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(t=3.576、4.727、4.902,P均〈0.05)。结论阿伐他汀可能通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制白血病细胞增殖并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 阿伐他汀 白血病 细胞凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素 靶蛋白通路
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蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路关键蛋白在糖尿病大鼠皮肤组织和创面组织中的表达研究 被引量:2
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作者 黄宏 邱伟 +8 位作者 朱明 张娅 崔文慧 邢伟 李向云 安天琛 陈民佳 郭韡 徐祥 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期588-593,共6页
目的探讨糖尿病大鼠皮肤组织和创面组织中蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路关键蛋白的表达变化,并探讨相关机制。方法选取7~8周龄SD大鼠78只,按照随机数字表法分为糖尿病组和非糖尿病组,每组39只。糖尿病组... 目的探讨糖尿病大鼠皮肤组织和创面组织中蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路关键蛋白的表达变化,并探讨相关机制。方法选取7~8周龄SD大鼠78只,按照随机数字表法分为糖尿病组和非糖尿病组,每组39只。糖尿病组大鼠一次性快速腹腔注射20mg/mL链脲佐菌素液(65mg/kg,采用柠檬酸缓冲液配制),建立糖尿病模型;非糖尿病组大鼠同法注射等量的柠檬酸缓冲液。于注射后1~8周2组每周各取3只大鼠,于背部切取约1.0cm×1.0cm的全层皮肤,行HE染色观测表皮厚度。注射后1周,2组各取15只大鼠同前取皮造成全层皮肤缺损,于伤后即刻及1、3、5、7d每组各取3只大鼠处死,伤后即刻每只大鼠沿创缘切取1块皮肤组织、伤后1~7d每只大鼠切取创面组织,取一部分组织采用蛋白质印迹法检测皮肤组织及创面组织中的Akt、磷酸化Akt、mTOR、磷酸化mTOR的蛋白表达水平;取剩余组织行免疫荧光染色,观察皮肤组织及创面组织中的磷酸化Akt与波形蛋白表达。对数据行析因设计方差分析、多重t检验。结果(1)注射后1、2周,2组大鼠表皮厚度相似(t值分别为0.25、1.33,P值均大于0.05);与非糖尿病组比较,注射后3周起糖尿病组大鼠表皮厚度明显变薄(t值为4.44~9.71,P〈0.05或P〈0.01)。(2)与伤后即刻皮肤组织比较,非糖尿病组大鼠伤后1~7d创面组织Akt、磷酸化Akt、roTOR(伤后3d除外)及磷酸化mTOR蛋白表达水平明显升高,t值为3.75~21.44,P〈0.05或P〈0.01。与伤后即刻皮肤组织比较,糖尿病组大鼠伤后1~7d创面组织中Akt、roTOR蛋白表达水平(伤后ldmTOR除外)无明显变化(t值为0.03~2.32,P值均大于0.05);伤后1~7d创面组织中磷酸化Akt(伤后1d除外)、磷酸化roTOR蛋白表达水平均明显升高(t值为3.79~8.11,P〈0.05或P〈0.01)。伤后即刻,2组大鼠皮肤组织中Akt蛋白表达水平相近(t=0.66,P〉0.05),但糖尿病组大鼠皮肤组织中磷酸化Akt蛋白表达水平(0.310±0.035)明显低于非糖尿病组(0.790±O.032,t=6.20,P〈0.05)。与非糖尿病组大鼠比较,糖尿病组大鼠伤后即刻皮肤组织中roTOR和磷酸化roTOR蛋白表达水平及伤后1~7d创面组织中Akt、磷酸化Akt、roTOR和磷酸化mTOR蛋白表达水平均明显降低(t值为3.52~13.44,P〈0.05或P〈0.01)。(3)与伤后即刻皮肤组织比较,2组大鼠伤后l~7d创面组织中磷酸化Akt、波形蛋白表达呈逐渐增强趋势,其中糖尿病组大鼠皮肤组织和创面组织中各指标的表达均明显弱于非糖尿病组。结论创伤能刺激Akt/mTOR信号通路活化,上调关键蛋白表达;糖尿病皮肤组织和创面组织中该信号通路的活性低下可能是导致创面难愈的关键机制。 展开更多
关键词 糖尿病 伤口愈合 皮肤 蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路
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B细胞激活因子通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路参与狼疮肾炎患者发病机制的研究 被引量:4
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作者 王学彬 葛风梅 +2 位作者 王芳芳 闫秀清 李昭 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期15-20,共6页
目的探讨B细胞激活因子(BAFF)通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(P13K/Akt/mTOR)信号通路参与LN发病的作用机制。方法LN组为28例确诊LN患者,对照组为20例因肾脏良性肿瘤行一侧肾切除的患者,收集2组患者... 目的探讨B细胞激活因子(BAFF)通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(P13K/Akt/mTOR)信号通路参与LN发病的作用机制。方法LN组为28例确诊LN患者,对照组为20例因肾脏良性肿瘤行一侧肾切除的患者,收集2组患者的临床资料[包括ESR、CRP、补体c3、尿蛋白定量(24h)、血肌酐、尿素氮]及LN组患者的抗dsDNA抗体定量指标。ELISA法检测2组血浆BAFF水平,分析LN组血浆BAFF表达水平与疾病活动的相关性;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测。肾脏组织BAFF、磷酸化(p)。P13K、p-Akt、p-roTOR、Bcl-2mRNA和蛋白表达水平。采用Mann—Whitney秩和检验及Spearman相关分析进行统计学分析。结果①LN组患者血浆BAFF表达水平[(580±45)ng/L]显著高于对照组[(208±30)ng/L](Z=5.856,P〈O.01);且与SLEDAI评分呈正相关(r=0.723,P〈0.01)。②LN患者血浆BAFF水平与尿蛋白定量(24h)、抗dsDNA抗体定量均呈正相关(r=0.381、0.461,P〈0.05);LN患者肾组织BAFF水平与尿蛋白定量(24h)、抗dsDNA抗体定量均呈正相关(r=0.469、0.489,P〈0.05)。③LN组肾脏组织中BAFF、P.P13K、P.Akt、P.mTOR、Bcl-2mRNA的表达水平均高于对照组[5.8±1.8与2.1±0.7,Z=-4.915,P〈0.01;6.7±0.9与1.7±0.5,z=-5.857,P〈0.01;5.6+0.9与1.8±0.5,Z=-5.751,P〈O.01;5.6±1.4与1.6±0.4,Z=-5.291,P〈0.01;2.11±0.36与1.33±0.22,Z=-4.844,P〈0.01]。④LN组肾脏组织中BAFF、p.P13K,p-Akt、p.mTOR、Bcl-2蛋白表达水平均高于对照组[0.72±0.19与0.31±0.05,Z=-4.747,P〈0.01;0.73±0.11与O.33±0.09,Z=-5.834,P〈O.01;0.77±0.06与O.22±0.07,Z=-5.855,P〈0.01;1.18±0.27与0.47±0.13,Z=-5.416,P〈0.01;2.08±0.37与1.32±0.18,Z=-4.998,P〈O.011o结论LN患者血浆及肾组织中BAFF表达显著增高,伴有P13K/Akt/mTOR信号通路的激活,提示BAFF可能通过P13K/Akt/mTOR信号通路参与LN患者的发病。 展开更多
关键词 狼疮肾炎 B细胞激活因子 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
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氨基酸代谢与2型糖尿病 被引量:4
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作者 陈涛 田浩明 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期773-776,共4页
氨基酸作为底物参与糖异生,促进内源性葡萄糖生成,某些氨基酸可促进胰岛素分泌。近来发现,一些氨基酸还可激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白-S6激酶1(roTOR—S6K1)途径,一方面调控并维护胰岛β细胞功能;另一方面抑制胰岛素靶细胞信号... 氨基酸作为底物参与糖异生,促进内源性葡萄糖生成,某些氨基酸可促进胰岛素分泌。近来发现,一些氨基酸还可激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白-S6激酶1(roTOR—S6K1)途径,一方面调控并维护胰岛β细胞功能;另一方面抑制胰岛素靶细胞信号转导,促进胰岛素抵抗。 展开更多
关键词 氨基酸 糖尿病 2型 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白-S6激酶1
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慢性铅暴露对小鼠脑海马组织雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响
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作者 彭博 游园园 +1 位作者 高双 孙黎光 《解剖科学进展》 CAS 2013年第5期413-415,419,共4页
目的研究慢性铅暴露对小鼠脑海马组织雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响,探讨roTOR在慢性铅暴露所致小鼠海马神经元学习记忆功能障碍中的作用。方法5.6周龄小鼠交配后,铅暴露组仔鼠通过胎盘、乳汁和... 目的研究慢性铅暴露对小鼠脑海马组织雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响,探讨roTOR在慢性铅暴露所致小鼠海马神经元学习记忆功能障碍中的作用。方法5.6周龄小鼠交配后,铅暴露组仔鼠通过胎盘、乳汁和饮水饲醋酸铅2.4,4.8和9.6mmol·L^-1,连续42d。对照组鼠饮用自来水。第42天检测血及脑铅浓度,weslem印迹法检测脑海马总量roTOR(t—mTOR)及磷酸化roTOR(p—mTOR)的表达。结果各慢性染铅组小鼠血铅和脑铅含量均明显高于对照组(P〈0.01),升高的程度与饮用水的铅浓度呈正相关。慢性染铅组小鼠大脑海马组织P—mTOR表达水平呈下降趋势,各染铅组p—mTOR表达与对照组比较,差异有统计学意义,并具有浓度效应关系(P〈0.05)。p-mTOR表达与血、脑铅浓度呈负相关(r=-0.82,P〈0.01),铅对小鼠大脑皮层神经元t—mTOR的磷酸化没有影响。结论p-mTOR蛋白的表达量随着铅暴露的浓度升高而降低,与铅致小鼠学习记忆功能减退有关。 展开更多
关键词 雷帕霉素靶蛋白 海马 小鼠
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