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乳腺生物反应器特异高效表达载体的构建
1
作者
张斯敏
高越
+2 位作者
方彧聃
张金脉
张敬之
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期49-55,共7页
乳腺生物反应器具有广阔的开发前景,而提高目的基因的表达量是该领域一个重要的研究课题。因此,选用强的非特异性启动子pCAG,而不是乳腺特异性启动子来实现高效表达;通过Cre/loxP系统和山羊β-乳球蛋白启动区(pBLG)表达Cre重组酶来实现...
乳腺生物反应器具有广阔的开发前景,而提高目的基因的表达量是该领域一个重要的研究课题。因此,选用强的非特异性启动子pCAG,而不是乳腺特异性启动子来实现高效表达;通过Cre/loxP系统和山羊β-乳球蛋白启动区(pBLG)表达Cre重组酶来实现载体的自删除以达到乳腺特异表达的目的。方法:构建含PolyA终止信号的Cre乳腺特异表达元件PolyA-pBLG-cre,插至强启动子pCAG驱动的报告基因lacZ表达载体中,构建成乳腺特异表达载体pCBCZ(pCAG-loxPPolyA-pBLG-cre-loxP-lacZ)。转染细胞实验结果:PCR鉴定确认pCBCZ载体在小鼠乳腺上皮细胞(HC11)中发生Cre-loxP同源重组。X-Gal染色表明载体能驱动lacZ在HC11细胞中高效表达β-半乳糖苷酶,而在NIH 3T3细胞中仅少量表达。结论:构建的pCBCZ载体能高效驱动外源基因在乳腺细胞中表达,且具有较好的乳腺特异性,为研发乳腺生物反应器表达载体提供新的方法。
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关键词
乳腺生物反应器
cre
loxp
系统
特异表达
报告基因
lacz
原文传递
题名
乳腺生物反应器特异高效表达载体的构建
1
作者
张斯敏
高越
方彧聃
张金脉
张敬之
机构
上海交通大学附属儿童医院
上海市儿童医院
上海交通大学医学遗传研究所
卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室及上海市胚胎与生殖工程重点实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期49-55,共7页
基金
国家“973”计划(2010CB945202)
国家自然科学基金(81271690)资助项目
文摘
乳腺生物反应器具有广阔的开发前景,而提高目的基因的表达量是该领域一个重要的研究课题。因此,选用强的非特异性启动子pCAG,而不是乳腺特异性启动子来实现高效表达;通过Cre/loxP系统和山羊β-乳球蛋白启动区(pBLG)表达Cre重组酶来实现载体的自删除以达到乳腺特异表达的目的。方法:构建含PolyA终止信号的Cre乳腺特异表达元件PolyA-pBLG-cre,插至强启动子pCAG驱动的报告基因lacZ表达载体中,构建成乳腺特异表达载体pCBCZ(pCAG-loxPPolyA-pBLG-cre-loxP-lacZ)。转染细胞实验结果:PCR鉴定确认pCBCZ载体在小鼠乳腺上皮细胞(HC11)中发生Cre-loxP同源重组。X-Gal染色表明载体能驱动lacZ在HC11细胞中高效表达β-半乳糖苷酶,而在NIH 3T3细胞中仅少量表达。结论:构建的pCBCZ载体能高效驱动外源基因在乳腺细胞中表达,且具有较好的乳腺特异性,为研发乳腺生物反应器表达载体提供新的方法。
关键词
乳腺生物反应器
cre
loxp
系统
特异表达
报告基因
lacz
Keywords
mammary gland bioreactor cre /loxp system tissue specific expression lacz reporter
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
乳腺生物反应器特异高效表达载体的构建
张斯敏
高越
方彧聃
张金脉
张敬之
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
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