组织原位杂交和Taq Man实时荧光定量PCR检测enJSRV及其受体HYAL2在妊娠蒙古绵羊绒毛膜中的表达

为了探究内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)及其受体HYAL2在妊娠蒙古绵羊胚胎发育过程中的可能作用,本试验应用组织原位杂交技术和Taq Man实时荧光定量PCR对其在不同妊娠时期(30、50、70、90、110、130d)蒙古绵羊绒毛膜的分布定位和表达规律进行了研究。原位杂交结果显示,enJSRV及其受体HYAL2 mRNAs在妊娠30、50、130d蒙古绵羊绒毛膜组织的滋养层巨型双核细胞(BNC)、多核合胞体小半鞘翅(SP)和滋养外胚层(Tr)细胞中均有阳性信号表达;荧光定量PCR结果显示,在妊娠各时期绒毛膜组织中均有enJSRV及受体HYAL2的mRNA表达,通过统计学分析enJSRV mRNA的表达量于妊娠50d时最低,70d和110d相对较高,且差异都极显著(P<0.01),到130d时又降低到起始水平;受体HYAL2的表达于130d时表达量最低,90d相对较高,且差异极显著(P<0.01)。而enJSRV与其受体HYAL2 mRNA表达量之间无线性相关性。研究结果提示,enJSRV在绵羊胚胎发育过程中可能参与调节绒毛膜滋养层细胞的生长并影响胎盘的发育。

猪瘟病毒在猪体组织中的分布

建立一种猪瘟病毒TaqMan qPCR检测方法,为研究急性死亡期猪瘟病毒在组织中的分布提供一种可靠的方法。采用病理变化和实验室诊断方法对河南新乡某种猪场送检的病死猪进行诊断。根据猪瘟病毒特异性靶基因E0,设计并合成1对引物和水解探针,建立了TaqMan qPCR方法。以不同浓度的重组质粒pMD19-T-E0为模板,生成标准曲线,并对其重复性和特异性进行了验证,并用建立的方法对该病死猪的内脏组织进行检测,分析猪瘟病毒在体内组织中的差异性。利用建立的猪瘟病毒TaqMan qPCR检测方法,从PPV、PCV和PEDV等基因组的cDNA/DNA中不能扩增出目的条带;对3个不同的浓度梯度的重组质粒进行检测,其批间、批内的变异系数均小于2%,表明该方法的特异性和重复性较好。对猪瘟内脏组织病料进行检测发现,其猪瘟病毒主要集中在淋巴结、脾脏、肠道组织、血液及心脏等组织中,不同组织器官中的病毒载量也存在着一定的差异。该研究对疑似感染猪瘟病毒急性死亡的病猪进行了鉴别诊断,同时用建立的TaqMan qPCR方法检测了猪瘟病毒在组织中分布的差异性,为猪瘟的科学防控及发病机制的研究奠定了基础。