MBF2转录调控小菜蛾谷胱甘肽S-转移酶代谢氯虫苯甲酰胺的功能

【目的】探究转录调控因子MBF2(multiprotein bridging factor 2)调控小菜蛾(Plutella xylostella)体内谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)的功能,及其在小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺中的作用,为阐明小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的解毒代谢机制提供理论依据。【方法】采用浸叶法测定敏感(SS)、广东连州(LZ)、云南通海(TH)3个小菜蛾种群对氯虫苯甲酰胺的抗性水平,酶动力学法测定3个种群的GST活性;使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析MBF2在不同抗性种群小菜蛾中的表达差异;采用氯虫苯甲酰胺LC50诱导12 h,分析其对小菜蛾MBF2的诱导表达作用;应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究MBF2对GST基因的调控作用,并测定沉默MBF2后小菜蛾的GST活性;结合沉默后小菜蛾对药剂的敏感性变化,验证MBF2在小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺中的作用。【结果】两个抗性种群(TH和LZ)相较SS种群分别达到了中抗及高抗的水平,TH和LZ抗性倍数分别为54.27和289.58;TH和LZ小菜蛾种群体内GST活性均显著高于SS种群;与SS种群相比,MBF2在抗性种群小菜蛾体内显著上调表达,在中抗和高抗种群中的表达量分别为敏感种群4.6和9.4倍。小菜蛾短期暴露于LC50浓度氯虫苯甲酰胺中,敏感、中抗及高抗种群均在8 h内MBF2表达量显著上调,最高表达量升至对照的10倍。沉默MBF224 h,小菜蛾9个GST基因表达量显著降低,其中GSTZ1及GSTU1的下调量均达90%以上;处理组(ds MBF2)GST活性相较于阴性对照(ds GFP)降低57.76%;75 mg·L^(-1)氯虫苯甲酰胺处理后,处理组较对照组死亡率提升23.34%。【结论】MBF2可能通过调控GST的转录表达,提高小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的代谢能力,从而参与小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的解毒作用。研究结果可为小菜蛾抗药性机理的深入解析及新型药剂的研发提供依据。

青杄转录共激活因子PwMBF1c的功能研究与验证

克隆通过青杄干旱转录组筛选到的差异候选基因PwMBF1c,对其生物学功能进行分析和验证,以期能够解析青杄的耐旱机理,并为培育优良抗逆林木品种提供基因资源。利用RT-qPCR技术分析PwMBF1c对干旱、高温、低温及激素处理的响应。瞬时转化烟草叶片和洋葱表皮细胞检测PwMBF1c的亚细胞定位。利用酵母单杂验证PwMBF1c的转录活性。在拟南芥和马铃薯体系中验证了PwMBF1c抗旱应答的功能。PwMBF1c主要在成熟叶中表达,其转录水平受干旱、高温、水杨酸(SA)诱导上调;PwMBF1c的C端具有转录激活活性,而N端和全长不具有转录活性;PwMBF1c定位于细胞膜、细胞质和细胞核;过表达PwMBF1c显著提高了拟南芥和马铃薯的耐旱性。干旱胁迫下,与对照组Col-0和VC相比,过表达拟南芥株系PwMBF1c-L1和PwMBF1c-L2存活率更高,叶绿素含量较高,MDA含量较低;在PEG处理后,与野生型马铃薯Y5相比,过表达PwMBF1c显著提高了苗高。PwMBF1c的表达水平受干旱等多种逆境和激素的诱导,PwMBF1c主要定位于细胞膜、细胞质和细胞核,且该蛋白的C端具有转录激活活性。PwMBF1c能够显著提高转基因拟南芥和马铃薯的耐旱性。

MBF/纳米SiO_(2)复配污泥调理剂对污泥脱水性能影响的研究

从废酵母中提取微生物絮凝剂(MBF),研究MBF与纳米SiO_(2)复配后对污泥脱水性能的改善,并通过调理污泥的Zeta电位分析不同调理剂的反应机理。结果表明,废酵母提取MBF的最佳条件为pH值为10,80℃条件下加热1 h,提取物中TOC、蛋白质、多糖质量浓度分别为214.78,117.75,36.00mg/L;投加MBF(质量分数为4%)+纳米SiO_(2)(质量浓度为0.8 g/L)的复配污泥调理剂,调理后,污泥的SRF由3.56×10^(12)m/kg降至2.16×10^(12)m/kg,下降率39.33%;CST从50.4s降至37.2 s,下降率26.19%。研究表明,复配调理剂在酸性环境、常温、低速搅拌条件下脱水效果较好。

金纳米粒子/氧化石墨烯复合膜电化学免疫传感器的构建及其对鲜肉中马波沙星的检测

该文构建了一种金纳米粒子/氧化石墨烯复合膜修饰玻碳电极的电化学免疫传感器,用于鲜肉中马波沙星残留的检测。用电沉积法在电极表面合成金纳米粒子/氧化石墨烯复合膜,然后通过电化学法还原复合膜中的氧化石墨烯,固载抗体。采用循环伏安法对电极的修饰过程进行表征。用差分脉冲伏安法优化传感器的电化学检测条件。在最优条件下,对马波沙星进行定量检测。响应峰值电流变化量与马波沙星在0.5~400 ng/mL浓度范围内呈线性关系,检测限为0.05 ng/mL。传感器对猪肉、鸡肉和牛肉样品的检测限分别为0.09、0.10、0.09μg/kg,添加回收率为82.81%~101.99%,检测结果与超高效液相色谱-串联质谱法基本一致。结果表明,所建立的电化学免疫传感器可用于实际样品中马波沙星残留的检测。

麻保沙星(marbofloxacin)在鸡体内的生物利用度及药物动力学

选用 36只 5 1～ 6 0日龄健康岭南黄鸡 ,随机均分为 3组 ,对静注、肌注及内服麻保沙星 (2 .5 mg/ kg)的生物利用度和药物动力学进行了研究。用三氯甲烷提取血浆中的药物 ,反相高效液相色谱法测定血浆中麻保沙星的浓度 ,MCPKP计算机程序处理所得到的血药浓度 -时间数据。静注给药的药时数据适合三室开放模型 ,主要药动学参数分别为 :t1 /2π(0 .19± 0 .0 3) h;t1 /2α(2 .0 7± 0 .2 7) h;t1 /2β(6 .5 2± 0 .6 9) h;V1 (0 .48± 0 .0 3) L / kg;Vd(area) (2 .0 6± 0 .39)L/ kg;Vd(ss) (1.0 5± 0 .0 6 ) L/ kg;Cl B(0 .19± 0 .0 2 ) L/ (kg· h) ;AUC(13.95± 1.0 7) mg· kg- 1 · h。肌注给药的药时数据适合一级吸收二室开放模型 ,主要药动学参数分别为 :t1 /2 Ka(0 .5 4± 0 .0 5 ) h;t1 /2α(2 .33± 0 .2 0 ) h;t1 /2β(6 .2 7± 0 .46 )h;tmax(1.5 7± 0 .0 9) h;Cmax(1.88± 0 .0 5 ) m g/ L ;AUC(13.18± 0 .6 7) mg· kg- 1 · h;F(94.45± 4.80 ) %。内服给药的药时数据适合一级吸收二室开放模型 ,主要药动学参数分别为 :t1 /2 Ka(0 .42± 0 .0 6 ) h;t1 /2α(2 .31± 0 .2 5 ) h;t1 /2β(6 .48±0 .6 6 ) h;tmax(1.35± 0 .12 ) h;Cmax(1.83± 0 .18) mg/ L;AUC(13.5 5± 0 .6 7) mg·

条锈菌诱导的小麦MBF1转录辅激活因子基因的克隆及其特征分析

应用电子克隆和RT-PCR方法,从小麦叶片中分离出一个条锈菌诱导的编码MBF1基因的cDNA序列,暂被命名为TaMBF1a。TaMBF1a包含一个完整的429 bp的开放阅读框,编码142个氨基酸,具有MBF1保守结构域;小麦TaMBF1a氨基酸序列与水稻OsMBF1相似性达92%,与拟南芥AtMBF1a相似性达80%。TaMBF1a编码的蛋白可能是核蛋白,且该基因在小麦根、茎、叶组织中表达量基本一致。在小麦与条锈菌的亲和、非亲和互作中,TaMBF1a基因均受条锈菌诱导高水平表达,且非亲和组合表达量高于亲和组合。外源植物激素水杨酸、乙烯、脱落酸也可诱导该基因快速上调表达,表明TaMBF1a可能通过水杨酸、乙烯等信号途径参与小麦对条锈菌的防御反应。

麻保沙星(marbofloxacin)在猪体内的药物动力学

选用 18头健康的杜洛克×大白×长白三元杂交断奶仔猪 (公母兼有 ,体质量在 2 0～ 2 3kg)杂交猪 ,随机分为 3组 ,每组 6头 ,按每千克体质量 2 .5 mg的剂量进行了静注、肌注及内服麻保沙星 (m arbofloxacin)的药动学研究。三氯甲烷萃取血浆中的药物 ,用反相高效液相色谱法测定血浆中药物的浓度 ,MCPKP药代动力学程序处理血药浓度 -时间数据。静注给药的药时数据符合三室开放模型 ,主要药动学参数为 :t1 /2π(0 .13± 0 .0 1) h;t1 /2α(5 .4 1± 0 .4 3) h;t1 /2β(16 .2 2± 1.6 0 ) h;AUC(2 4 .89± 1.5 1) mg· L- 1· h;V1 (0 .77± 0 .0 6 ) L· kg- 1 ;Vd( area) (2 .6 1± 0 .37) L· kg- 1 ;Vd( ss)(1.6 9± 0 .19) L· kg- 1 ;Cl B(0 .10± 0 .0 1) L· kg- 1·h。肌注给药的血浆药时数据符合一级吸收二室开放模型 ,主要药动学参数为 :t1 /2 Ka(0 .2 7± 0 .16 ) h;t1 /2α(2 .87± 0 .90 ) h;t1 /2β(17.39± 1.6 2 ) h;tmax(0 .91± 0 .32 ) h;Cmax(1.96± 0 .2 4 ) mg· L- 1 ;AU C(2 6 .85± 3.5 1) mg· L- 1 · h;F(10 7.86± 14 .10 ) %。内服给药的血浆药时数据符合一级吸收二室开放模型 ,主要药动学参数为 :t1 /2 Ka(1.16± 0 .19) h;t1 /2α(4.94± 0 .5 3) h;t1 /2β(2 2 .98± 2 .

百合转录辅激活因子LlMBF1c基因的克隆与表达分析

为了深入研究百合响应高温胁迫的分子机制,本研究以麝香百合杂种系品种白天堂为试验材料,从中分离得到1个MBF1c基因,其开放阅读框为438 bp,编码145个氨基酸,蛋白质分子量为15 900,理论等电点为10. 22。多序列同源比对和进化树分析表明百合MBF1c具有典型的MBF1和HTH结构域,归属c亚型MBF1,因此将克隆到的基因命名为LlMBF1c。亚细胞定位结果表明,LlMBF1c可能介导了热激信号由细胞质向细胞核的转导。实时荧光定量PCR分析结果表明,LlMBF1c在叶中的表达量最高,根中次之,鳞茎中最低; LlMBF1c的表达受热激诱导。表明,LlMBF1c基因可能与百合的热激反应密切相关。

基于MBF的RFID冗余数据清洗

RFID无线射频识别技术在铁路物流中的应用明显提高了管理效率。为了防止漏读数据,实际应用中通常一个区域会部署多个阅读器,这就导致数据的冗余。由于RFID数据是以流的形式快速、自动地产生,是一种动态数据集,很难一次以有限的内存清除冗余数据。本文提出基于矩阵型Bloom滤波器MBF(Matrix Bloom Fil-ter)的清洗方法TIMBF(Time Interval MBF)。因为基于MBF,它可以用来表示动态集合,并且不会产生消极错误,能以较小的内存获得很高的正确率。TIMBF保存了标签数据的读取时间,为了进一步减少内存空间的使用,提出了空间优化措施。实验结果证实,本文算法能以较小的内存有效地清除冗余数据。

大麦MBF1基因的电子克隆与生物信息学分析

通过同源比对,对大麦MBF1s基因进行了电子克隆,并通过生物信息学的方法对其及编码蛋白质进行了预测和分析。结果表明,克隆到大麦MBF1家族3个成员Hv MBF1a、Hv MBF1b和Hv MBF1c,三者所编码蛋白质均包含典型的MBF1和HLH结构域,无可识别的信号肽和跨膜区,均为亲水性蛋白,含有数个可能的磷酸化位点。电子表达谱结果表明,3个成员在大麦的大部分组织器官中都有表达,而Hv MBF1a和Hv MBF1b对所分析的胁迫处理响应不明显,Hv MBF1c的表达受各种处理的剧烈诱导,Hv MBF1c可以作为大麦和其他作物抗逆性分子育种的重要候选基因。

真皮层指纹传感器MBF310在仓储门禁系统中的应用

针对现有贵重物品存储仓库的门禁系统的缺点,提出了一种基于活体真皮层指纹传感器MBF310和嵌入式ARM处理器LPC2124的新型门禁系统设计方案,运用MBF310较好地解决了传统系统对人造手指模型无法防御和指纹识别率易受指面污物影响的弊端,大大提高了防御安全性和指纹识别率。测试分析表明:方案的手指模型识别率平均可达90%以上,指纹采集成功率平均可达98%,方案科学可行,实用意义较大。

紫花苜蓿MsMBF1c基因在拟南芥中表达提高转基因植株的耐热性

高温能危害植物的生长发育,是限制紫花苜蓿在南方地区推广的主要非生物胁迫因素之一。从“中苜1号”紫花苜蓿品种克隆获得紫花苜蓿多桥蛋白1c(Medicago sativa Multi protein Bridging Factors 1c,MsMBF1c)全长编码序列,发现紫花苜蓿MsMBF1c蛋白与拟南芥AtMBF1c蛋白同源相似性高达72%。分析MsMBF1c在根、茎、叶、花和果实等不同组织中,以及在高温、干旱以及高温和干旱组合胁迫条件下的表达模式,发现该基因在不同组织中的表达强度依次为花>根>叶>茎>果实;MsMBF1c显著受高温、干旱以及高温和干旱组合诱导,分别被上调4.21、2.15和4.59倍。构建pBI121-35S:MsMBF1c过量表达载体并转入模式植物拟南芥(wild type,WT),在T 3代获得卡那抗性不分离的过量表达株系(over expression,OE);利用OE与Atmbf1c突变体(mutant,MUT)杂交的方法获得互补株系(complementary,COM),并通过PCR与qRT-PCR的方法进行分子和表达验证。平行比较OE、COM、MUT以及WT等不同拟南芥株系在高温胁迫后的种子发芽率和幼苗存活率,在正常情况下,OE、COM、MUT以及WT拟南芥株系种子的发芽率没有显著差异(97.6%~100.0%),高温胁迫后,WT发芽率下降到71.7%,MUT发芽率下降到66.0%,显著低于WT(P<0.05);而COM与3个独立的OE株系的发芽率达79.3%~87.0%,显著高于WT(P<0.05)。在幼苗耐热试验中,OE、COM、MUT以及WT株系的存活率在正常条件下差异不显著,高温胁迫后,WT幼苗存活率下降到16.7%,MUT下降到10.0%,显著低于WT(P<0.05);而COM与3个独立的OE株系存活率下降到40.0%~76.7%,显著高于WT(P<0.05)。利用real-time PCR方法,分析HSFA1a、HSFA2、HSFA3、HSFB 1、WRKY 25、WRKY 18、DREB2a等耐热调节关键基因在OE、MUT和WT拟南芥株系的相对表达情况,在正常条件下,HSFA2、WRKY 18与DREB2a在MUT株系中的表达显著低于WT(0.33~0.47)。而在OE株系中,除HSFA1a外,HSFA2、HSFA3、HSFB 1、WRKY 25、WRKY 18、DREB2a的表达相对WT株系都有不同程度上调,幅度为1.74~3.80。高温胁迫后,与WT相比,HSFA2、HSFA3、HSFB 1、WRKY 18与DREB2a在MUT株系中的表达中被显著下调,在OE株系中,只有WRKY 18显著高于WT外,其余基因的表达在OE与WT株系中差异不显著。综合分析,MsMBF1c是一个功能比较保守的耐热调节基因,过量表达MsMBF1c能够互补拟南芥mbf1c突变体耐热缺失表型,并能够增强拟南芥在种子萌发与幼苗生长阶段的耐热性。MsMBF1c可能与AtMBF1c一样,与其他耐热调节关键基因互作调节植物耐热性。

紫花苜蓿高温诱导启动子pMsMBF1c的克隆与功能分析

植物耐热性受复杂而精细的调控。热诱导启动子能经济、高效的激活或关闭耐热调节途径关键基因的表达,在植物功能基因组研究与现代分子育种技术中起十分重要的作用。以紫花苜蓿耐热候选基因MsMBF1c的编码序列为基础,采用酶切连接的方法分离获得了其上游1748bp序列,生物信息学分析发现该区域具有HSE与GATA结合位点等2个与植物耐热调节相关的保守模体,此外还有5个ABA应答元件(ABRE、MYB2、MIC2、CBF与DPBF)和2个MYB蛋白结合位点,说明MsMBF1c除了参与植物耐热性调节外,还可能参与其他抗逆性调节。构建pBI121-MsMBF1c::GUS双元载体转化野生型拟南芥,荧光定量分析热诱导后的转基因植物中GUS与AtMBF1c基因的表达发现其分别上调了5.4与4.8倍,并且高温诱导下转基因植株的组织化学染色分析同样证明MsMBF1c启动子显著受高温诱导。分离获得紫花苜蓿MsMBF1c启动子序列并转化拟南芥,并且从生物信息学、组织化学染色与基因表达等方面验证该序列能显著被高温诱导,为探讨紫花苜蓿耐热调控机制及通过分子生物技术改善紫花苜蓿耐热性提供理论支撑,最终为培育适应南方高温气候条件的紫花苜蓿新品种提供技术储备。

猪MBF1基因的克隆与序列分析

克隆了MBF1基因875 bp的c DNA序列和1 919 bp的基因全序列(登录号:EF 625885)。序列分析表明,猪MBF1基因序列与人、小鼠的相似性分别为89%和88%,氨基酸序列与人和小鼠的相似性分别为99%和97%,猪MBF1基因包含5个外显子和4个内含子,内含子的剪接方式都符合"GT-AG"法则;组织表达谱分析表明MBF1基因在心、肝、脾、肾、子宫中表达量较高,在胃和小肠中低表达。

番茄LeMBF1基因的克隆及其在温敏型长花柱突变体T431中的表达

从番茄长花柱突变体T431的低温差减文库中筛选出了1个编码转录辅激活因子基因的EST,获得全长后命名为LeMBF1。LeMBF1基因包含一个420bp的开放阅读框,编码140个氨基酸,其氨基酸序列与马铃薯的StMBF1相似性最高为97%。半定量RT-PCR结果表明：LeMBF1在常温下于T431的根、茎尖生长点、叶中均有表达,但茎尖生长点中表达量极低;将花芽分化期的T431经低温处理3,6,9d后,LeMBF1在根中的表达量不变;在低温处理初期叶中表达量略有增加,随后降低;低温处理3d在茎尖生长点表达量明显增加,其后逐渐降低,推测LeMBF1可能参与花器官的形态建成,抑制T431的花柱伸长。

基于MBF200的嵌入式系统指纹预处理算法研究

随着指纹识别技术的不断发展以及嵌入式系统应用的日益广泛,人们对于如何将指纹识别技术用于嵌入式系统的研究也越来越多。文中针对MBF200采集到的指纹图像的特点,讨论了一种用于嵌入式系统的指纹图像预处理算法。介绍了嵌入式指纹识别系统的硬件平台,再依据由该系统采集到的指纹图像的特点,提出通过纹线跟踪来增强指纹图像,并对现有的细化后纹线跟踪去伪特征算法作了改进,调整了去伪顺序。实验表明,该算法具有快速处理的良好效果,满足嵌入式系统的要求。

新转录辅激活子多蛋白桥梁因子MBF1的研究进展

简述了MBF1的结构和功能,并从分子水平上介绍了MBF1关于基因表达调控的研究进展。

基于MBF200指纹图像预处理方法的研究

针对MBF200指纹图像的特点,提出一套指纹图像预处理方法。该方法对MBF200指纹图像的去噪、分割、中心点定位、Gabor滤波增强、二值化及细化等预处理步骤进行研究及实现。为了验证该方法的有效性,使用自行设计的MBF200指纹采集器对所获得的指纹图像进行试验。结果表明,所提出的指纹预处理方法对MBF200指纹图像的处理是行之有效的,有助于基于细节特征的指纹提取。

复合菌群的构建及所产MBF处理印染废水的研究

从筛选到的絮凝剂产生菌中构建出比单一菌群产生更高絮凝活性絮凝剂的复合菌群——HXMJ2+LA19+CYHXJ1,将其所产微生物絮凝剂应用于处理靛蓝印染废水的处理,研究了系统pH、微生物絮凝剂用量和CaCl2溶液用量对处理效果的影响,得出微生物絮凝剂去除CODCr和脱色的最佳工艺条件,并对MBF的絮凝机理进行了初步探讨。

猪MBF1基因的多态性及与生产性状的关联分析

分离克隆了猪MBF1基因第4外显子的序列,测序发现在18 bp处存在T/C突变,引起Taq I酶切多态。利用PCR-RFLP方法对国内外4个猪种MBF1基因第4外显子的多态性进行分析发现,在国外猪种中等位基因T的的频率占优势;在中国猪种中C等位基因的频率占优势;在437头大梅F2代资源家系中进行性状关联分析发现该多态与瘦肉率、板油重、肩部背膘厚、眼肌高、眼肌宽、眼肌面积显著相关(P<0.05)。