广西拳卷地钱及其他地钱类药材HPLC指纹图谱研究

目的:采用高效液相色谱法(HPLC),创建广西产拳卷地钱药材HPLC指纹图谱,与不同产地,品种地钱药材的指纹图谱进行对比分析,通过相似性分析、聚类分析、主成分分析,对其质量进行鉴别、分类和评价。方法:乙腈-0.1%磷酸为流动相,流速1 mL/min,波长270 nm,柱温30℃为条件,建立广西产拳卷地钱及其它共30个地钱类药材指纹图谱。结果:30批广西产地钱类药材供试品的相似度>0.8。聚类分析和主成分分析结果均将药材分为四大类。广西产地钱类药材中的A2、A4、A6、A7、A8、A10、A11、B2、B3、B6、B7、B8、B9、B10、B11、C1、C3、C5、C6、C8产地相比于其他三类产地的相似性更高。主成分分析提取了4个主要成分,特征值λ1的贡献率为58.993%,λ2的贡献率为21.957%,λ3的贡献率为8.654%,λ4的贡献率为5.010%,前4个特征值的累积贡献率达94.606%,其中第一主成分具有最大的特征值。结论:建立了广西产拳卷地钱及其它地钱类药材指纹图谱,并进行了几种地钱指纹图谱的对比,对广西产地钱药材生药学的系统研究进行了补充,为其质量标准的制定提供了实验依据,为广西产拳卷地钱的开发和利用奠定基础。

2种苔藓的叶绿素荧光特性及耐受性对Pb^(2+)浓度的响应

在不同Pb2+质量浓度(0、25、50、100、200 mg/L)的人工条件下,利用叶绿素荧光动力学技术研究比较了狭叶扭口藓(Barbula subcontorta Broth.)和地钱(Marchantia polymorpha L.)的叶绿素荧光特性。结果表明:(1)总体上,随着Pb2+浓度的增加,狭叶扭口藓和地钱的最大光化学量子产量(Fv/Fm)、最大荧光产量(Fm)、本底荧光产量(Ft)、光下初始荧光产量(Fo’)、光下最大荧光产量(Fm’)、光化学猝灭系数(qP)、光化学量子效率(ΦPSⅡ)呈下降趋势;初始荧光产量(Fo)呈升高趋势;非光化学猝灭系数(NPQ)和最大表观光合电子传递速率(ETRmax)呈先升高后降低趋势。(2)地钱对环境中Pb2+的耐受能力强于狭叶扭口藓,表观现象和叶绿素荧光参数的变化说明,狭叶扭口藓仅能耐受50 mg/L的Pb2+污染,而地钱可以耐受100 mg/L的Pb2+污染。用叶绿素荧光参数可以说明狭叶扭口藓和地钱对环境中的Pb2+的耐受机制,也可以作为鉴定和判断苔藓植物抗污染的快速方法。地钱可用来修复土壤中的Pb2+污染,而狭叶扭口藓可以用作土壤中Pb2+污染的指示和监测植物。

地钱总黄酮提取的研究

用正交试验法对地钱(MarchantiapolymorphaL.)中的黄酮类化合物提取工艺进行了优选研究,采用正交表L16(45),以提取时间、提取温度、提取次数、提取剂中乙醇含量以及料液比为因素,以总黄酮显色液的吸光度为指标进行试验。得到了最佳提取参数及结果:温度为70℃,时间0.5h,提取次数3次,提取溶剂为80%的乙醇,料液比为1∶15,提取率1.90%,纯度95.83%。

壳聚糖对地钱细胞生长和酚类次生代谢的影响

目的探讨壳聚糖诱导子对地钱细胞生长和酚类次生代谢的影响。方法对壳聚糖-地钱细胞诱导体系的细胞生物量、叶绿素、活性氧(H2O2和O2-)、细胞膜通透性和膜脂过氧化产物(MDA)以及酚类次生代谢物苯丙氨酸解氨酶(PAL)和多酚等生化指标进行测定。结果细胞生长下降(P<0.05),叶绿素含量明显低于对照组(P<0.01),胞外pH趋向碱性化(P<0.01),活性氧含量急剧增加和膜脂过氧化增强(P<0.01),次生代谢PAL活性和多酚含量均显著增加(P<0.01)。结论壳聚糖通过降低地钱细胞还原能力而增强其氧化能力,从而有利于酚类次生代谢的生物合成。

地钱愈伤组织的诱导及其细胞培养条件的建立

目的探计对地钱愈伤组织的诱导和悬浮细胞培养的条件。方法用MSK-2和MS培养基对地钱配予体进行愈伤组织诱导，运用模糊评判对MSK-2培养基生长激素组合进行综合性状评价。结果MSK-2和MS（2mg/L 6-BA）均能诱导出地钱愈伤组织，其中MSK-2的诱导效果较好。光照（3000—8000lux）能有效地促进地钱愈伤组织生长。激素配比组合是0．5mg/L2，4-D＋2mg/L NAA＋2mg／L6-BA适合于地钱细胞生长以及次生代谢生产。结论地钱愈伤组织的诱导成功和悬浮细胞培养条件的建立，为探索药用苔藓植物次生代谢产物生产提供新的途径以及对苔藓植物细胞规模化培养提供新的理论指导。

地钱对木油厂汞矿区重金属污染的指示潜力

对贵州木油厂汞矿区地钱及其基质中的Cu、Zn、Ca、Mg、Cd、Pb、Hg和As 8种元素进行测定分析,以揭示地钱指示基质中重金属污染的潜力。结果表明:(1)基质中Cu、Cd、Hg和As元素的含量分别是相应标准值的1.34、1.79、331.80、1.12倍,该汞矿区受到复合污染,且Hg污染最严重。(2)地钱对Pb的富集系数是所测重金属元素中最高的,可用于治理该汞矿区Pb污染。(3)地钱对Cu的富集是同一水平,说明可以指示其基质含Cu量;对Cd的富集系数多为同一水平,说明趋向于指示其基质含Cd量。(4)地钱对Hg和As的富集系数多为贫化,说明地钱对这2种元素有抵抗作用。(5)相关分析显示,Cu与Mg、Mg与Cd之间显著负相关(显著性概率水平为0.05),它们之间有拮抗作用;Zn与As之间显著正相关(显著性概率水平为0.05),它们之间有协同作用。

地钱在离体条件下的无性繁殖及脱分化与再分化的研究

地钱(Marchantia polymorpha L.)的胞芽和配子体先在 MS 培养基上补加1mg/l 2,4-D和3%蔗糖,经过启动部分脱分化后,再移入1/2KNOP 培养基补加4—8mg/l 2,4-D,0.25～0.5mg/l BA 与 MS 的铁盐,20g 蔗糖,此后愈伤组织肉眼可见,但仍伴有假根。最后移入 White 培养基添加丙酮酸、延胡索酸与柠檬酸三者混合物(5mmol/l)及1mg/l 2,4-D与4%葡萄糖后,始呈现彻底的脱分化状态,愈伤组织才能正常生长。整个脱分化时间长达10个月。而再分化成配子体却比高等植物容易,甚至移入不含激素的 MS 基本培养基即可形成正常的配子体。

地钱属植物研究进展

地钱Marchantia polymorpha L.为地钱科(Marchantineae)地钱属(Marchantia)植物,地钱是苔藓植物中最常见的中草药之一。文章结合近年来国内外地钱属植物研究动态,将从地钱属植物及拳卷地钱的生药学研究、化学成分研究等方面阐述其研究进展概况。

地钱化学成分研究

目的 研究地钱（Marchantia polymorpha L．）的化学成分。方法通过多种色谱手段，对地钱的脂溶性成分进行分离。根据化合物的波谱数据进行结构鉴定。结果 从地钱中分离得到9个化合物，7个何伯烷型三萜：22-hydroxyhopane（Ⅰ），17（21）-hopene（Ⅱ），6α，22-dihydroxyhopane（Ⅲ），20α，22-dihydroxyhopane（Ⅳ），21，22-dihydroxyhopane（Ⅴ），6d，11d，22-trihydroxyhopane（Ⅵ），22，28-didroxyhopane（Ⅶ）；β-谷甾醇（Ⅷ），胡萝卜苷（Ⅸ）。结论 化合物Ⅰ～Ⅸ均为首次从本植物中分离得到。

地钱部分MYB家族基因在不同发育时期、部位以及激素处理下表达量差异分析

为了研究植物适应陆地生活的机制,以较原始的陆生植物地钱(Marchantia polymorpha L.)作为研究对象,分析其部分MYB(v-Myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog)家族基因在不同发育时期,不同部位以及不同激素处理下的表达量变化。构建系统进化树确认地钱与拟南芥(Arabidopsis thaliana)中MYB转录因子亚家族S14、S28和AtCDC5同源的基因,使用qRT-PCR对不同生长时期、组织以及激素处理下目的基因表达量进行分析。qRT-PCR分析结果表明,MpR2R3-MYB20在胞芽中表达量最高,胞芽杯中最低,且在0.1μmol/L IAA诱导下表达量显著上调;MpR2R3-MYB8在分生区高表达,激素处理下表达量变化较小;MpR2R3-MYB3和MpCDC5在3周分生区高表达,IAA处理后下调;MpR2R3-MYB18主要在胞芽和胞芽杯中表达,且受ABA诱导大幅上调;MpR2R3-MYB16在全株中都有较高表达,在0.1μmol/L IAA处理下显著上调,在其他激素处理下显著下调。这些结果说明上述基因在地钱不同器官或组织中具有调节生长、发育和抗逆的重要功能。

新疆2种苔类植物挥发油鉴定

采用水蒸气蒸馏法对新疆地钱和钝叶光萼苔等2种苔类植物挥发油进行提取,并用气相色谱—质谱联用技术进行分离鉴定;采用峰面积归一化法确定各成分的质量分数。结果表明:地钱挥发油中共分离出24种成分,确认了其中的22种成分;钝叶光萼苔挥发油中共分离出25种成分,确认了其中的19种成分,两者主要成分为烯萜类和醇类化合物。