脾酪氨酸激酶联合母体胚胎亮氨酸拉链激酶检测在乳腺癌中的临床价值

目的研究乳腺癌肿瘤组织脾酪氨酸激酶(SYK)联合母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)检测在乳腺癌病情及预后评估中的临床价值。方法选择2019年1月至2021年12月常德市第一人民诊治的95例乳腺癌患者(乳腺癌组)和51例乳腺良性疾病患者(对照组)为研究对象。实时荧光定量PCR检测SYK、MELK表达并比较在不同临床病理特征中的差异。ROC曲线分析肿瘤组织SYK、MELK表达在乳腺癌预后不良预测中的敏感度、特异度及AUC。多因素Logistics回归分析乳腺癌预后不良的独立危险因素。Kaplan-Meier生存模型及Log rank比较不同肿瘤组织SYK、MELK表达中生存期的差异。结果乳腺癌组SYK表达显著低于对照组(0.54±0.08 vs 0.71±0.12),MELK表达显著高于对照组(0.87±0.11 vs 0.45±0.07),差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者肿瘤组织中SYK、MELK表达与年龄、肿瘤部位无关(P>0.05),与组织学分级、T分期、转移淋巴结数、远传转移及TNM分期有关(P<0.05)。SYK联合MELK在乳腺癌患者预后不良预测中的敏感度、特异度及AUC均高于SYK、MELK、组织学分级、T分期、转移淋巴结数、远处转移、TNM分期(P<0.05)。SYK≤0.54、MELK≥0.87、组织学分级3级、T分期T3~T4、转移淋巴结数N2~N3、远处转移M1、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期为乳腺癌预后不良的独立危险因素(P<0.05)。肿瘤组织SYK≤0.54且MELK≥0.87乳腺癌患者中位生存期显著低于SYK﹥0.54或MELK﹤0.87患者[中位生存期(32.37±4.01)个月vs(38.65±5.19)个月,Log rank=15.127,P<0.01]。结论乳腺癌患者SYK表达显著降低而MELK表达显著增高,与临床病理特征及生存期存在关联,在乳腺癌病情及预后中具有较高临床价值。SYK及MELK联合检测可显著提高预测乳腺癌预后不良的临床价值。

肿瘤组织miR-23a联合MELK检测在骨肉瘤病情及预后评估中的临床价值

目的分析肿瘤组织微小核糖核酸-23a(miR-23a)联合母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)水平对骨肉瘤病情及预后评估的临床价值。方法选择2019年1月—2022年1月武汉科技大学附属普仁医院骨科诊治的骨肉瘤患者93例为研究组,骨良性疾病患者53例为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测组织miR-23a、MELK表达水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析肿瘤组织miR-23a、MELK水平预测骨肉瘤患者预后不良的价值;多因素Cox回归分析骨肉瘤患者预后不良的危险因素;Kaplan-Meier模型分析miR-23a、MELK表达对骨肉瘤患者生存期的影响。结果研究组肿瘤组织miR-23a、MELK表达水平显著高于对照组(t/P=12.127/<0.001、11.291/<0.001);肿瘤最大径≥5 cm、有远处转移、Enneking分期Ⅲ期的骨肉瘤患者miR-23a、MELK表达高于肿瘤最大径<5 cm、无远处转移、Enneking分期Ⅰ~Ⅱ期患者(miR-23a:t/P=8.357/<0.001、9.112/<0.001、6.531/<0.001;MELK:t/P=11.265/<0.001、9.787/<0.001、10.462/<0.001);miR-23a、MELK水平及二者联合预测骨肉瘤患者预后不良的AUC分别为0.781、0.773、0.901,二者联合的AUC大于单独预测的AUC(Z/P=6.431/<0.001、0.705/<0.001);Cox回归分析显示,miR-23a高表达、MELK高表达、肿瘤最大径≥5 cm、有远处转移、Enneking分期Ⅲ期为骨肉瘤患者预后不良的独立危险因素[OR(95%CI)=4.100(1.426~6.774)、4.023(1.279~6.767)、2.250(1.041~3.459)、2.396(1.117~3.675)、2.489(1.028~3.951)];miR-23a≥1.14且MELK≥0.73的骨肉瘤患者中位生存期显著低于miR-23a<1.14或MELK<0.73的患者(中位生存期24.38月±4.52月vs.32.74月±5.16月,Log Rankχ^(2)=9.821,P<0.001)。结论骨肉瘤患者miR-23a和MELK表达与临床病理特征密切相关,可为骨肉瘤病情及预后评估提供基因水平的客观证据,二者联合检测可提高预测骨肉瘤预后不良的敏感度及特异度。

母系胚胎亮氨酸拉链激酶基因在肝癌中的表达及siRNA干扰后对肝癌细胞Hep3B生长、凋亡的影响

目的探讨母系胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)基因在肝癌中的表达及siRNA干扰后对肝癌细胞Hep3B生长、凋亡的影响。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和实时定量PCR技术检测MELK基因在肝癌和癌旁组织中的表达差异;评价MELK与肝癌早期指标甲胎蛋白(AFP),δ1样同系物(DLK1)在48例肝癌样本中表达的关系;采用化学合成siRNA沉默内源性MELK基因表达,分析肝癌细胞Hep3B的生长活性、凋亡。结果在半定量PCR检测的72例肝癌患者中,55例癌组织中MELK基因mRNA的表达水平高于相应癌旁组织;实时定量PCR结果显示MELK基因在肝癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(P<0.001)。MELK、AFP、DLK1在肝癌样本中的阳性率分别为66.7%、50%、54.2%,MELK在肝癌中的阳性比例高于AFP、DLK1;干扰MELK基因在肝癌细胞Hep3B中的表达可抑制细胞生长。结论 MELK激酶作为胚胎干细胞标志性基因在肝癌发生时高表达,是治疗肝癌的潜在靶基因。

MELK的功能及其在肿瘤研究中的进展

母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)是蔗糖非发酵1/AMP活化蛋白激酶(Snf1/AMPK)家族中一个独特成员,是一种周期依赖性激酶。与家族其他成员不同,MELK并不参与代谢应激状态下细胞的生存调控,而更多参与细胞周期、细胞增殖、肿瘤生成和细胞凋亡等过程。MELK在人体多种肿瘤中表达升高,与肿瘤的预后密切相关。MELK在肿瘤干细胞中被异常激活,使肿瘤细胞获得生长、侵袭、迁移等能力,因此,MELK可以作为肿瘤治疗的重要靶点。我们就MELK基因的生物学功能、作用机制及其在肿瘤研究中的进展做简要综述。

三阴性乳腺癌发生及预后相关基因的筛选及功能分析

目的筛选与三阴性乳腺癌(TNBC)发生及预后相关的潜在基因,并分析基因生物学功能。方法在癌症基因数据库中选取具有完整转录组测序数据和临床数据的乳腺癌患者共869例。利用加权基因共表达网络分析筛选与TNBC相关的模块基因,并对其进行基因功能和通路富集分析,构建蛋白质-蛋白质互作网络。筛选并鉴定核心基因,分析其与TNBC患者预后的关系。结果共确定11个模块,其中Blue模块与TNBC具有较高相关性。从Blue模块中获得7个核心基因,其中母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)基因是影响TNBC患者预后的潜在基因。MELK基因主要参与细胞增殖、细胞分裂和细胞周期等生物学过程。MELK基因高表达患者的总体生存率和无复发生存率均低于MELK基因低表达患者(P<0.05)。结论MELK基因在TNBC的发生发展中扮演着重要的角色,且与TNBC患者的预后密切相关。

结肠癌中LZTS1和CDK1表达与术后辅助化疗敏感性的关系

目的:探讨结肠癌组织中亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(LZTS1)和细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)表达与术后辅助化疗敏感性之间的关系。方法:采用免疫组织化学法检测结肠癌组织和癌旁组织中LZTS1和CDK1表达,分析其表达与患者临床病理特征的关系。统计术后辅助化疗后复发转移或死亡患者及未转移患者人数无病生存期(DFS),分析LZTS1和CDK1表达与术后辅助化疗敏感性的关系。Kaplan-Meier法分析LZTS1和CDK1表达对结肠癌患者术后辅助化疗后DFS影响,Cox比例风险回归模型分析影响结肠癌患者术后辅助治疗敏感性的因素。结果:与癌旁组织相比,结肠癌组织中LZTS1阳性表达率显著降低(P<0.05),CDK1阳性表达率显著提高(P<0.05)。LZTS1和CDK1表达与结肠癌患者年龄、性别以及肿瘤直径大小无关(P>0.05),与肿瘤分化程度和淋巴结转移相关(P<0.05)。LZTS1阳性表达患者对术后辅助化疗敏感性高,而CDK1阴性表达患者对术后辅助化疗敏感性高。LZTS1阳性表达患者DFS较阴性表达患者升高(P<0.05),中位生存时间延长。CDK1阳性表达患者DFS较阴性表达患者降低(P<0.05),中位生存时间缩短。Cox多因素分析结果显示,淋巴结转移、LZTS1和CDK1是结肠癌患者术后辅助化疗敏感性的预测指标。结论:结肠癌组织中LZTS1阳性表达降低,CDK1阳性表达升高,LZTS1阳性表达和CDK1阴性表达患者更能从辅助化疗中获益,均可作为术后化疗敏感性的参考指标。

MELK在胰腺癌中的表达、功能及临床意义

目的:探究母胚亮氨酸拉链激酶(MELK)在胰腺癌组织中的表达、功能及临床意义。方法:通过生物信息学方法分析MELK在胰腺癌中的表达情况并预测MELK在影响胰腺癌发生发展中可能的分子机制。回顾性分析45例在兰州大学第一医院接受手术治疗的胰腺癌患者的临床资料,采用免疫组化法检测胰腺癌组织和癌旁正常组织中的MELK表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系;通过门诊就诊记录及电话随访收集患者的术后复发时间,探究MELK表达与术后复发时间的关系。结果:MELK的mRNA在胰腺癌组织中呈高表达并与患者总生存率和术后复发时间相关;多因素Cox分析结果表明MELK基因可作为胰腺癌患者的独立预后因素。功能分析表明MELK参与多个癌症相关功能通路,与胰腺癌致病分子正相关。免疫组化结果表明,MELK在胰腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。MELK在胰腺癌组织中的表达与肿瘤大小相关。结论:胰腺癌组织中MELK基因呈高表达且和预后相关,MELK在胰腺癌的进展中发挥作用,有望成为胰腺癌诊治的潜在生物标记物和治疗靶点。

MELK在舌鳞癌中的表达及对舌鳞癌细胞系CAL-27的迁移与侵袭能力的影响

目的母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)在多种肿瘤中高表达且与肿瘤的发生与发展密切相关,该研究旨在探讨MELK基因在舌鳞癌中的表达及其对肿瘤生物学行为的影响。方法获取人的舌鳞癌和癌旁组织标本,实时荧光定量PCR和Western blot检测舌鳞癌及癌旁组织中MELK表达。通过siRNA(si001组,si002组)转染技术构建低表达MELK的舌癌细胞系(CAL-27)模型。CCK-8实验检测转染后细胞增殖能力的改变;Transwell小室法检测细胞侵袭能力改变;Transwell小室法检测细胞迁移能力改变。结果 qRT-PCR和Western blot检测发现舌鳞癌组织中MELK基因的表达明显高于癌旁组织(均P<0.05);成功建立了MELK沉默舌鳞癌细胞系模型,沉默组较控制组和正常组MELK表达明显降低(均P<0.05);CCK-8实验测得沉默组细胞活力明显低于正常组和控制组(均P<0.05);Tran-swell实验检测沉默后CAL-27细胞迁移能力,si001组和si002组与正常组和控制组比较,CAL-27细胞迁移能力降低,差异有统计学意义(均P<0.01);Transwell小室法检测细胞侵袭能力,si001组、si002组与正常组和控制组比较,CAL-27细胞侵袭能力降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论 MELK基因在舌鳞癌组织中高表达;siRNA-MELK转染能够有效地构建舌鳞癌细胞系MELK低表达模型;下调MELK的表达水平可抑制CAL-27细胞的生长增殖,降低迁移与侵袭能力。

母系胚胎亮氨酸拉链蛋白激酶在食管鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的探讨食管鳞状细胞癌中母系胚胎亮氨酸拉链蛋白激酶(MELK)的表达情况及其意义。方法选取2009年8月至2013年7月北京大学肿瘤医院收治的139例食管鳞状细胞癌患者手术切除标本,通过免疫组织化学法检测食管鳞状细胞癌组织中MELK的表达情况,分析其与患者临床病理特征的关系。采用蛋白质印迹法检测MELK在6种食管鳞状细胞癌细胞株(ECA109、KYSE150、KYSE30、KYSE70、KYSE180和KYSE510)中的表达情况,选择MELK高表达的细胞株,通过慢病毒感染选择性敲低MELK的表达,采用Transwell法检测MELK对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响,采用CCK-8法验证MELK对细胞增殖活性的影响。结果 MELK在100例(71.9%)食管鳞状细胞癌组织中高表达,T3~T4期患者MELK阳性表达率高于T1~T2期患者(χ2=4.702,P=0.030),在肿瘤分化程度差和淋巴结转移的患者中,MELK阳性表达率高,但差异无统计学意义(χ2=2.761,P=0.097;χ2=0.994,P=0.319)。ECA109和KYSE150细胞MELK较高表达。Transwell法检测结果显示,与阴性对照组比较,ECA109和KYSE150细胞MELK敲低组迁移细胞数降低[(77±10)个比(126±8)个,t=6.56,P<0.05;(37±4)个比(105±3)个,t=24.27,P<0.05],侵袭细胞数降低[(47±7)个比(154±9)个,t=17.08,P<0.05;(37±2)个比(184±4)个,t=54.09,P<0.05]。CCK-8检测结果显示,敲低MELK表达的ECA109和KYSE150细胞增殖活性均受抑制(均P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌患者MELK高表达与T分期相关,MELK高表达可促进食管鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭。

母胚亮氨酸拉链激酶(MELK)在肺腺癌中的表达及其与预后的相关性研究

目的母胚亮氨酸拉链激酶(MELK)在肺腺癌组织中的表达情况,初步探究MELK与肺腺癌的临床预后关系。探讨MELK作为肺腺癌潜在的生物标志物的可能性。方法通过生物信息学的方法分析MELK在肺腺癌组织及癌旁正常组织中的mRNA水平,并分析其表达与肺腺癌患者的生存率间的关系。回顾性分析70例接受手术治疗的肺腺癌患者的临床病理资料。采用免疫组化法检测肺腺癌组织和癌旁正常组织中的MELK蛋白表达水平,分析其与肺腺癌患者临床病理特征的关系。结果生物信息学分析结果显示,MELK的mRNA在肺腺癌组织中显著高表达,并与患者总生存率(P=0.009)与无病生存率(P=0.039)显著相关。免疫组化结果表明,MELK在肺腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。MELK在肺腺癌组织中的高表达与肿瘤大小(P=0.015)和肿瘤分期(P=0.006)相关,而与年龄、性别、吸烟、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况的相关性无统计学意义(均P>0.05)。结论肺腺癌组织中MELK呈显著高表达并提示不良预后,且其表达水平与肺腺癌患者肿瘤大小和肿瘤分期有关。MELK有望作为肺腺癌潜在的预后预测因子与治疗靶点。

靶向MELK抑制食管鳞癌增殖与侵袭能力机制探讨

目的探讨母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)在食管鳞癌组织中的表达及其对食管鳞癌细胞增殖与侵袭能力的机制。方法免疫组化及蛋白质印迹法检测食管鳞癌癌组织与癌旁组织中MELK的表达;对食管鳞癌细胞株ECA109和KYSE510采用划痕实验和CCK8增殖实验,研究敲低MELK基因后食管鳞癌细胞株的侵袭能力、增殖能力及加入MELK靶向抑制剂OTS167后食管鳞癌细胞株的增殖能力。结果免疫组化和蛋白质印迹检测结果显示,MELK在食管鳞癌组织中高表达,而在癌旁组织或正常食管鳞状上皮组织不表达;划痕实验结果显示,在食管鳞癌细胞株ECA109和KYSE510中敲低MELK基因12 h后,食管鳞癌细胞ECA109和KYSE510实验组肿瘤细胞划痕愈合率均下降,但差异无统计学意义。敲低MELK基因36 h后,食管鳞癌细胞ECA109实验组肿瘤细胞划痕愈合率为(6.42±1.21)%,比对照组的(10.05±2.35)%明显下降,差异有统计学意义,t=4.540,P=0.038;食管鳞癌细胞KYSE510实验组肿瘤细胞划痕愈合率为(6.59±0.67)%,比对照组的(9.00±1.64)%明显下降,差异有统计学意义,t=4.720,P=0.006。CCK8细胞增殖实验结果显示,敲低MELK后,第4天食管鳞癌细胞ECA109实验组肿瘤细胞增殖能力D(450 nm)值为2.07±0.02,比对照组的2.57±0.03明显降低,差异有统计学意义,t=31.120,P=0.001;KYSE510实验组肿瘤细胞增殖能力D(450 nm)值为2.13±0.11,比对照组的2.38±0.02明显降低,差异有统计学意义,t=3.577,P=0.020。在食管鳞癌细胞株ECA109和KYSE510中加入MELK靶向抑制OTSSP167250μmol/L第5天后,食管鳞癌细胞ECA109实验组肿瘤细胞增殖能力D(450 nm)值为0.68±0.01,比对照组的2.67±0.14明显降低,差异有统计学意义,t=36.120,P=0.001;食管鳞癌细胞KYSE510实验组肿瘤细胞增殖能力D(450 nm)值为0.33±0.01,比对照组的2.78±0.09明显降低,差异有统计学意义,t=45.780,P=0.001。结论MELK在食管鳞癌中高表达,且起到促进肿瘤细胞的侵袭及增殖能力,而MELK也可以作为食管鳞癌的靶向治疗靶点之一。

母体胚胎亮氨酸拉链激酶在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)在肾透明细胞癌中的表达以及与肾透明细胞癌患者临床病理特征的关系,并评估其对肾透明细胞癌细胞增殖的影响。方法从基因表达交互分析(GEPIA)在线数据库获得MELK在肾透明细胞癌中的表达情况以及与患者总生存期的关系。应用新乡市中心医院77例肾透明细胞癌患者的标本,通过免疫组化进一步证实,并分析MELK的表达情况与患者临床病理特征的关系。通过克隆形成实验和CCK-8实验探究MELK对肾透明细胞癌细胞增殖的影响。结果通过GEPIA数据库分析,MELK在肾透明细胞癌中呈明显高表达,高表达患者的总生存期明显降低。结合临床病理特征分析发现,MELK表达与肾透明细胞癌肿瘤直径具有相关性(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤分化程度均无相关性。克隆形成实验和CCK-8实验表明MELK表达均促进了肾透明细胞癌细胞增殖(均P<0.05)。结论MELK能促进肾透明细胞癌细胞的增殖,可为其治疗提供一种新的治疗策略。