Matrigel胶对大鼠海马神经干细胞增殖及分化的影响

目的:观察Matrigel胶对大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。方法:自出生24 h内SD大鼠海马组织提取NSCs,取培养第3代细胞,通过Nestin蛋白免疫细胞化学染色进行鉴定。取第3代细胞分为4组,A组接种于多聚赖氨酸包被24孔板,加入正常培养基;B组接种于多聚赖氨酸包被24孔板,加入含胎牛血清的DMEM/F12培养基;C组接种于Matrigel胶内,加入正常培养基;D组接种于Matrigel胶内,加入含胎牛血清的DMEM/F12培养基。培养1周后,通过免疫荧光染色方法检测NSCs中巢蛋白(Nestin)、β-tubulinⅢ、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果:第3代培养细胞Nestin蛋白阳性,证实为NSCs。A组NSCs分化缓慢,B、C、D组NSCs分化迅速,C、D两组中NSCs形成立体的网状结构。4组NSCs中Nestin、β-tubulinⅢ、GFAP蛋白免疫荧光染色阳性率差异有统计学意义(F培养基分别为3 918.000、437.023和3 395.000,F包被分别为291.234、4 833.000和50.081,P均<0.001),表明B、C、D组NSCs分化显著,且C、D两组中NSCs向神经元分化趋势明显,C组NSCs向神经元分化趋势最强。结论:Matrigel胶具有诱导NSCs向神经元分化的作用。

Matrigel胶的肺腺癌细胞株A549体外三维培养的实验研究

目的研究肺腺癌细胞株A549三维体系培养及其细胞行为的改变。方法对三维培养基质Matrigel水凝胶进行材料表征,研究其纳米纤维网络的形成。观察细胞在三维环境中的克隆形成,形貌及存活力,并检测了细胞形成克隆后的药敏性,同时比较二维及三维培养的细胞对胞外基质蛋白粘附率的差异。结果Matrigel胶形成了类似于体内胞外基质的纳米纤维网络结构。在Matrigel胶中,A549细胞生长呈现出球形的多细胞克隆,生长状态均较好,与材料具有较好的生物相容性。随着克隆的增长,细胞对外界刺激的抵抗性及抗药性增加,药敏性降低。二维和三维培养下的A549细胞对不同的胞外基质蛋白的粘附率存在显著差异。结论细胞在Matrigel胶三维培养中,细胞的生长,形貌,存活力,药敏性及粘附性等细胞行为与二维培养的细胞具有显著性的差异,可为抗药性研究及细胞信号通路的研究等提供研究基础。

转BMP-7软骨细胞在Matrigel胶支架中修复兔膝关节软骨缺损的实验研究

[目的]研究骨形态发生蛋白(bone morphogenic protein,BMP-7)在构建Matrigel胶支架软骨膜块修复关节软骨缺损中的作用。[方法]将软骨细胞种植于Matrigel胶支架上,体外培养,在培养系统中加入BMP-7,观察软骨细胞在支架中的繁殖以及载体降解情况;将培养出的软骨膜块植入于动物关节软骨缺损模型中进行定期观测(4周)。[结果]Matrigel胶支架可满足组织工程软骨修复需要,BMP-7在用于构建膜块修复关节软骨缺损模型中可促进软骨细胞增殖,并在植入4周动物试验中发现与对照组比较在关节软骨缺损修复质量上有显著性差异(P<0.01)。[结论]BMP-7在Matrigel胶软骨膜块中可明显促进组织工程软骨膜块构建以及关节软骨缺损的修复。

干细胞样U87胶质瘤细胞向内皮细胞转分化及VEGFR2人源化单克隆抗体的干预作用

目的建立干细胞样U87胶质瘤细胞向内皮细胞的转分化模型,初步评价抗VEGFR2人源化单克隆抗体对转分化的影响。方法体外诱导培养获得干细胞样U87胶质瘤细胞;流式细胞仪检测CD133+细胞含量;定量PCR检测CD133、Nestin以及VEGFR2表达;观察干细胞样U87细胞的致瘤能力、肿瘤生长速度和CD31表达情况;观察干细胞样U87细胞在Matrigel上血管状结构形成和CD31、CD34、vW F表达情况;建立干细胞样U87细胞向内皮细胞的转分化模型,评价抗VEGFR2人源单抗对转分化的抑制作用。结果获得干细胞球样的U87细胞,其肿瘤生长更快,且血管增多,接种在Matrigel上形成血管状结构,CD31、CD34、vW F表达增加;抗VEGFR2人源单抗使血管状结构和CD31、CD34、vW F表达均减少。结论成功建立干细胞样U8细胞向内皮细胞转分化模型,VEGFR2人源化单抗对转分化有抑制作用。

Matrigel凝胶和壳聚糖/磷酸甘油凝胶两种支架体外构建组织工程软骨的比较

目的探讨适合构建组织工程软骨的细胞支架材料。方法将体外分离培养的兔关节软骨细胞种植于Matrigel凝胶和壳聚糖/磷酸甘油(C/GP)凝胶两种支架上体外培养3周,对组织工程软骨进行大体标本、HE染色,ELISA检测培养上清液中透明质酸和Ⅱ型胶原的含量。结果软骨细胞在两种支架内均生长良好,Matrigel凝胶中软骨细胞培养3周后仍能维持软骨细胞的表型,其分泌透明质酸和Ⅱ型胶原的能力较C/GP凝胶中软骨细胞强,并可更好的促进受损的软骨细胞增殖。结论 Matrigel凝胶和C/GP凝胶均可作为软骨细胞载体修复关节软骨缺损。Matrigel凝胶支架更适合软骨细胞的贴附生长,有利于维持软骨细胞的表型,是较好的软骨组织工程细胞支架。

中强度静磁场对白血病细胞增殖、荷瘤鼠生存期和血管生成的影响

磁场作为一种非侵入性方法，近几十年来受到了广泛的关注。关于磁场对肿瘤的影响，已经进行了很多的研究。本次实验研究了中强度静磁场（强度0．2T-0．4T）对白血病细胞L1210增殖和荷L1210白血病小鼠生存期的影响。此外，采用胛r方法研究了中强度静磁场（强度0．2T-0．4T）对内皮细胞HUVEC增殖的影响，并采用鸡胚绒毛尿囊膜和基质胶小室两种体内模型研究了中强度静磁场对血管生成的影响。实验结果表明中强度静磁场可以抑制白血病细胞和血管内皮细胞的增殖，延长荷L1210小鼠的生存期，阻止鸡胚绒毛尿囊膜和基质胶小室两种体内模型中新血管的形成。实验结果提示中强度静磁场对人类白血病以及血管生成相关疾病的治疗可能有应用价值。

水凝胶三维培养对神经干细胞增殖特性及分化潜能的研究实验

目的观察对比神经干细胞(NSC)在Matrigel水凝胶培养和悬浮培养的神经干细胞的生长形态、增殖、分化潜能、细胞产量及存活率等情况。方法分离提取孕12~13 d胎鼠大脑组织中的神经干细胞,用悬浮培养、三维Matrigel水凝胶支架培养2种培养方案传代神经干细胞,分别进行形态学观察分析,免疫组织化学荧光术鉴定巢蛋白(Nestin)和Sox-2的表达,及流式细胞术鉴定免疫表型;用10%的胎牛血清诱导分化培养基诱导神经干细胞分化后,行免疫荧光染色鉴定神经干细胞的终末分化细胞:神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞,对应特异性标记物分别为NeuN、CNPase、GFAP。结果免疫荧光鉴定P1代NSC,Nestin和Sox-2双阳性表达;P2代流式细胞鉴定Nestin∶90%,证明从胎鼠大脑能够获取纯度较高的神经干细胞;台盼蓝染色计数表明Matrigel基质胶三维培养方案细胞产量明显升高,是悬浮培养方案的5~10倍,收取的神经干细胞的存活率较悬浮培养稍增高,但无统计学差异意义(P=0.0812)。本试验两种方法培养的NSC均具多向分化性能,均能分化成神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞,分化后各终末细胞所占比例基本一致(P值分别为:0.1302;0.1108;0.1605)。结论相比于悬浮培养,三维Matrigel水凝胶支架方案培养出的NSC,具有活性高,增殖能力强,消化后死亡率低,细胞产量大,能达到悬浮培养的5倍以上,能稳定传代及便于细胞形态学观察等优点,并在连续传至多代后仍能保持NSC的基本特性和多向分化潜能。