MAX二聚化蛋白1基因rs12475412和rs7349311多态性与中国汉族人群缺血性脑卒中及其中医证候的相关性

目的探索MAX二聚化蛋白1(MXD1)基因rs12475412、rs7349311多态性与中国汉族人群缺血性脑卒中(IS)及其中医证候的相关性。方法选取2016年1月至2019年12月于广西中医药大学第一附属医院脑病科就诊的774例IS患者作为观察组,选取同期本院社区体检中心健康体检者或外科等科室病情较轻的外伤患者793例作为对照组。使用MassARRAY单核苷酸多态性技术进行基因分型检测,应用PLINK软件进行遗传关联分析统计。结果观察组与对照组rs12475412、rs7349311位点的基因型频率分布差异均无统计学意义(均P>0.05)。校正年龄后,MXD1基因rs12475412、rs7349311多态性与中国汉族女性IS患者血瘀证发生风险显著相关(rs12475412加性模型、显性模型、隐性模型的比值比分别为1.033、1.031、1.034,rs7349311显性模型、隐性模型的比值比分别为1.034、1.033,均P<0.05),并与气虚证发生风险显著相关(rs12475412加性模型、显性模型、隐性模型的比值比分别为1.036、1.036、1.036,rs7349311加性模型、显性模型、隐性模型的比值比分别为1.043、1.043、1.044,均P<0.05)。但MXD1基因rs12475412、rs7349311多态性与中国汉族男性IS各中医证候均无明显相关性(均P>0.05)。在校正年龄后,MXD1基因rs12475412、rs7349311多态性与中国汉族女性IS血瘀证和气虚证患者空腹血糖、D-二聚体、凝血酶时间水平显著相关(均P<0.05)。结论MXD1基因多态性可能通过参与调控血糖代谢、凝血功能而影响中国汉族女性IS血瘀证和气虚证的发生发展。

Max二聚化蛋白1(Mad1)真核表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的:构建Max二聚化蛋白1(Max dimerization protein 1,Mad1)的真核表达载体,研究Mad1对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法:利用DNA重组技术将Mad1基因克隆至pEGFP-N1载体,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-Mad1。经酶切和测序鉴定后,采用脂质体转染技术将重组质粒瞬时转染人胃癌AGS细胞,RT-PCR及Western blot检测Mad1基因和蛋白的表达。荧光显微镜观察Mad1在AGS细胞内的定位情况。CCK-8和Transwell实验研究Mad1对胃癌AGS细胞增殖和迁移能力的影响。结果:成功构建携带Mad1基因的真核表达载体pEGFP-N1-Mad1。将重组质粒瞬时转染AGS细胞后,RT-PCR和Western blot检测到Mad1基因和蛋白的表达。Mad1基因表达产物定位于AGS细胞核中。CCK-8和Transwell实验结果显示,转染Mad1的AGS细胞与转染空载体的AGS细胞及正常AGS细胞相比,细胞增殖活力和迁移能力明显降低。结论:成功构建了真核表达载体p EGFP-N1-Mad1,研究表明Mad1可以抑制胃癌AGS细胞的增殖和迁移。

MXD1在胰腺癌中的表达分析及其对细胞增殖、迁移和Warburg效应的影响

目的:探讨MAX二聚化蛋白1(MAX dimerization protein 1,MXD1)基因在胰腺癌组织和细胞中的表达情况,及其对胰腺癌细胞增殖、迁移和Warburg效应的影响。方法:分别利用基因表达谱数据动态分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库分析MXD1基因在胰腺癌及其癌旁组织中的表达差异。应用免疫组织化学染色法检测MXD1在311例胰腺癌组织中的表达水平,并通过Kaplan-Meier法分析MXD1表达水平与患者预后的相关性。采用实时荧光定量PCR法检测人胰腺癌细胞系中MXD1 mRNA的表达水平。采用脂质体法将2条针对MXD1基因不同靶点的siRNA(siMXD1-1和siMXD1-2)分别转入人胰腺癌细胞系BxPC-3和Patu8988,用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测siRNA对MXD1表达的干扰效果。采用CCK-8法和Transwell小室实验分别检测干扰MXD1表达对BxPC-3和Patu8988细胞增殖、迁移能力的影响。同时,根据基因集富集分析(Gene Set Enrichment analysis,GESA)推断MXD1可能影响胰腺癌细胞的Warburg效应。用糖酵解压力测试实验检测干扰MXD1表达对胰腺癌细胞的细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)的影响。结果:MXD1在胰腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。MXD1高表达患者的总生存(overall survival,OS)率较MXD1低表达者低(P<0.01)。MXD1 mRNA在BxPC-3和Patu8988细胞中表达水平相对较高(P<0.05);干扰MXD1表达后,BxPC-3和Patu8988细胞中MXD1mRNA和蛋白的表达水平明显下调(P<0.05),其细胞增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.01)也明显降低。糖酵解压力测试结果显示,干扰MXD1表达后胰腺癌细胞的ECAR水平明显降低(P<0.05)。结论:MXD1在胰腺癌组织中高表达,其高表达与患者不良预后相关;干扰MXD1表达会抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移以及Warburg效应。