Thin-layer Identification,Extraction Process and Content Determination of Chlorogenic Acid in Laggera alata(D.Don)Sch.Bip.ex Oliv.

[Objectives]This paper aims to establish thin-layer identification and content determination method for Laggera alata(D.Don)Sch.Bip.ex Oliv.with chlorogenic acid as the index component and compare the content of chlorogenic acid in L.alata from different places in Guangxi.[Methods]Silica gel GF254 thin-layer plate was used for identification under an ultraviolet lamp(365 nm),with butyl acetate-formic acid-water(V∶V∶V=7∶2.5∶2.5)as a developing agent.The content of chlorogenic acid was determined under the following chromatographic conditions:column,Inertsil ODS-3 C18 column(4.60 mm×250 mm,5μm);mobile phase,methanol-0.1%phosphoric acid(28∶72);detection wavelength,329 nm;flow rate,1.0 mL/min;column temperature,25℃;and injection volume,10μL.[Results]Chlorogenic acid can be detected by thin layer chromatography with clear spot and good specificity.Chlorogenic acid showed a good linear relationship in the injection amount range of 0.099-0.99μg(R^(2)=0.9999).The content of chlorogenic acid in L.alata varied greatly among the 10 different producing areas in Guangxi.L.alata produced in Dee Township,Longlin,Baise,Guangxi showed the highest chlorogenic acid content,and that produced in Shangsi County and Pingle County showed the lowest chlorogenic acid content.[Conclusions]This method can effectively identify L.alata and accurately determine the content of chlorogenic acid,thereby providing a scientific basis for the development and utilization of L.alata resources.

Content Determination of Chlorogenic Acid and Luteoloside in Flos Lonicerae

The contents of chlorogenic acid and luteoloside in Flos Lonicerae from Binhai New Area and Jinnan District of Tianjin were determined to provide basis for the quality identification of this medicinal material. The content of chlorogenic acid was determined by HPLC. In Flos Lonicerae from Binhai New Area and in Flos Lonicerae harvested at different stages from Jinnan District,the contents of chlorogenic acid were 3. 804%,5. 507%( three green stage),4. 855%( silver flower stage) and 4. 220%( golden flower stage),respectively,and the contents of luteoloside were 5. 53%,12. 405%( three green stage),14. 370%( silver flower stage) and 0. 917%( golden flower stage),respectively. The contents of chlorogenic acid in Flos Lonicerae from Jinnan District were higher than that from Binhai New Area. Among different stages,the content of chlorogenic acid was highest in three green stage,followed by that in silver flower stage. As the flowers bloomed,the content of chlorogenic acid in the medicinal material showed a significant downward trend. In Flos Lonicerae from Jinnan District,the content of luteoloside was highest in silver flower stage and lowest in golden flower stage.

Determination of Chlorogenic Acid in Stems of Mussaenda pubescens Ait.f.by High Performance Liquid Chromatography

[Objectives] This study was conducted to establish a method for determination of chlorogenic acid in Mussaenda pubescens Ait.f.[Methods]HPLC used SHISEIDO C_(18) MG Ⅱ column( 5 μm,4.6 mml.D.× 250 mm) as chromatographic column and acetonitrile-0.4% phosphoric acid solution( 9∶91) as mobile phase.The separation was performed at a flow rate of 1.0 ml/min and a column temperature of 30 ℃,and the detection wavelength was set at 327 nm.[Results]Chlorogenic acid had a good linear relation in the range of 0.254 7-2.547 5 μg( R2= 0.999 9).The recovery rate was 97.8%,RSD = 1.82%( n = 9).[Conclusions]The content of chlorogenic acid in M.pubescens was determined by ultrasonic extraction and HPLC.The method was simple,stable and reliable and could be used for the quality control of M.pubescens.

TLC Identification of Laggerae Alatae Herba and Extraction Process of Chlorogenic Acid

[Objectives]Taking chlorogenic acid as index component,TLC and content determination method of Laggerae Alatae Herba were established.[Methods]TLC identification used silica gel G thin-layer plate,and butyl acetate∶formic acid∶water(7∶2.5∶2.5)was taken as developing agent,and it was inspected under ultraviolet lamp(365 nm).The content was determined by chromatographic column Inertsil ODS-3 C_(18)(4.60 mm×250 mm,5μm).Mobile phase:methanol-0.1%phosphoric acid(28∶72);detection wavelength:329 nm;flow speed:1.0 mL/min;column temperature:25℃;injection volume:10μL.[Results]Chlorogenic acid can be detected by TLC,with clear spots and good specificity.When injection volume of chlorogenic acid was between 0.099 and 0.990μg(R^(2)=0.9999),there was good linear relationship.In low,medium and high sample adding groups of Laggerae Alatae Herba,average recovery rates of chlorogenic acids were 98.80%(RSD=2.09%),98.24%(RSD=1.96%)and 99.65%(RSD=2.15%).[Conclusions]The method could effectively identify medicinal material Laggerae Alatae Herba,and accurately measure the content of chlorogenic acid in Laggerae Alatae Herba,thereby providing a scientific basis for developing and using medicinal resources of Laggerae Alatae Herba.

HPLC法同时测定杠板归不同部位中5种成分的含量

目的建立高效液相色谱法同时测定杠板归不同部位(茎、叶、根)中5种成分的含量。方法采用Luna?-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为320 nm,柱温为30℃,测定杠板归不同部位中绿原酸、咖啡酸、芦丁、阿魏酸、槲皮素的含量。结果绿原酸、咖啡酸、芦丁、阿魏酸、槲皮素分别在0.046~4.6μg/mL,0.212~21.2μg/mL,0.055~5.5μg/mL,0.084~8.4μg/mL,0.114~11.4μg/mL范围内质量浓度与峰面积呈线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率为97.65%~102.09%,RSD为1.76%~2.44%。不同部位中5种成分含量差异较大,绿原酸和咖啡酸2个成分在叶中含量高,且远远高于根和茎中的含量;芦丁和阿魏酸主要存在于茎和根中,叶中未检测到;槲皮素在茎中含量最高,叶中次之,根中最低。结论建立的HPLC方法准确可靠、重复性好、专属性强,可用于杠板归不同部位中5个成分含量的同时测定。

HPLC-MS/MS法同时测定清开灵口服液中7种成分的含量

目的 建立高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法同时测定清开灵口服液中7种成分含量。方法 采用Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×10 mm,1.7μm);以含10 mmol·L^(-1)乙酸铵和0.1%甲酸的水溶液(A)及甲醇(B)为流动相,梯度洗脱;电喷雾离子源,正、负离子多反应监测(MRM)模式进行定量分析。结果 腺苷、绿原酸、咖啡酸、栀子苷、黄芩苷、猪去氧胆酸和胆酸质量浓度分别在0.100 4~3.213、0.784 5~8.982、0.998~3.194、0.622 5~19.92、25.05~300.6、2.513~30.15和7.775~93.30μg·m L^(-1)范围内与峰面积呈良好线性关系(r≥0.999 0);平均回收率(n=6)分别为100.9%、98.74%、101.2%、100.2%、100.8%、99.97%和98.94%,RSD分别为1.58%、0.59%、1.78%、1.25%、0.65%、1.69%和1.07%。15批样品中腺苷、绿原酸、咖啡酸、栀子苷、黄芩苷、猪去氧胆酸和胆酸的含量范围分别为0.12~0.18、0.19~0.24、0.06~0.09、0.34~0.37、4.54~4.85、0.49~0.67和1.82~2.19 mg·m L^(-1)。15批样品测定结果较为接近。结论 该方法具有良好的灵敏度、准确性和重复性,可为清开灵口服液的质量控制和后续研究提供参考及数据支持。

艾叶炮制前后5种化学成分的含量变化研究

目的:建立HPLC法同时测定艾叶及炮制品酒艾叶、醋艾叶、醋炭艾叶、炒炭艾叶中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C的含量,并比较炮制前后含量变化规律。方法:以AQ-C_(18)为液相色谱柱;以乙腈和0.4%磷酸水为流动相梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为325 nm,柱温为30℃。结果:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C在0.94~18.80、0.45~9.06、0.57~11.38、1.03~20.62、0.68~13.5μg/mL的质量浓度内与峰面积呈良好的线性关系(R^(2)分别为0.9996,0.9997,0.9993,0.9998,0.9996),精密度、稳定性、重复性良好,平均加样回收率分别为99.86%,99.26%,101.43%,98.08%,100.82%,相对标准偏差(RSD)分别为1.84%、1.94%、2.51%、2.28%、2.30%。结论:本研究建立的HPLC法高效简便、专属性强,能较好地对艾叶及其炮制品中苯丙素类成分进行含量测定。

构树叶软膏制剂的制备及其含量测定

目的:建立构树叶软膏的制备工艺及其软膏制剂中绿原酸、隐绿原酸和野黄芩苷含量的测定方法。方法:通过乳化法制备构树叶软膏制剂,并采用HPLC方法同时测定软膏制剂中绿原酸、隐绿原酸以及野黄芩苷的含量,色谱柱采用安捷伦ZORBAX SB-C18,柱温设置为40℃,以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,进样量为10μL;检测波长为339 nm。结果:制备所得构树叶软膏制剂易于涂抹,放置不分层,涂布无颗粒感,且所含绿原酸、隐绿原酸和野黄芩苷分别在相应浓度范围内呈现良好的线性关系(R^(2)>0.999);构树叶软膏中各目标物质的加样回收率在99.81%~103.22%,相对标准偏差(RSD)均<2%。结论:构树叶软膏制备工艺稳定可行,HPLC同时测定其绿原酸、隐绿原酸及野黄芩苷3种成分含量方法可行,具有良好的准确性和精密度,可用于构树叶软膏的质量控制。

高效液相色谱法同时测定补肾健骨口服液中4种成分的含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定补肾健骨口服液中没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素等4种成分含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Shim-pack GIST C_(18)(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,进行梯度洗脱;柱温为30℃;进样量为10μL;检测波长为285 nm。结果:4种成分线性关系良好,没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素的线性质量范围分别是0.036 970~0.735 800μg、0.205 400~4.108 000μg、0.014 130~0.282 600μg、0.004 853~0.097 060μg;线性方程分别是Y=2 513.700X-18.223(r=0.998 7),Y=2 165.500X+40.317(r=0.999 8),Y=2 480.400X+0.768(r=0.999 8),Y=3 845.800X+0.778(r=0.999 9)。结论:本试验建立的方法稳定可靠、简便、重复性好、准确度高,可为补肾健骨口服液的含量测定提供参考依据。

高效液相色谱法测定肝胆双清口服液中3种成分含量

目的 建立测定肝胆双清口服液中牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和特女贞苷含量的高效液相色谱法。方法 牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量测定,色谱柱为Agilent Extend-C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为0.02 mol/L磷酸二氢钠溶液(用三乙胺调pH至6.0)-乙腈(梯度洗脱),流速为1 mL/min,检测波长为205 nm,柱温为40℃,进样量为10μL;特女贞苷的含量测定,色谱柱为Thermo Acclaim^(TM)120A C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1 mL/min,检测波长为224 nm,柱温为40℃,进样量为10μL。结果 牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和特女贞苷的质量浓度分别在0.040 0~1.000 5 mg/mL、0.031 0~0.776 0 mg/mL、0.029 3~0.731 5 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9,n=6);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);加样回收率分别为98.49%,99.49%,99.78%,RSD分别为3.04%,2.20%,1.15%(n=6)。3批样品中3种成分的含量分别为0.323 1~0.325 8 mg/mL、0.285 8~0.287 6 mg/mL、0.268 8~0.305 5 mg/mL。结论 所建立的方法操作简便快速、重复性好、结果准确,可用于肝胆双清口服液中牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和特女贞苷的含量测定。

HPLC法同时测定野木瓜片中木通苯乙醇苷B和绿原酸的含量

目的:建立同时测定野木瓜片中木通苯乙醇苷B和绿原酸含量的高效液相色谱法。方法:采用Thermo BDS HYPERSIL C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为35℃;以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL•min^(-1);检测波长为327 nm;进样体积为10μL。结果:木通苯乙醇苷B和绿原酸分别在0.51~20.60μg•mL^(-1)(r=1.000)和0.52~20.63μg•mL^(-1)(r=1.000)内呈良好线性关系;平均回收率分别为100.3%(RSD为1.1%)和105.9%(RSD为1.4%)。测定5批次样品,木通苯乙醇苷B和绿原酸含量分别为0.083~1.115 mg•g^(-1)和0.161~1.204 mg•g^(-1)。结论:本法可为野木瓜片的质量评价标准提高提供参考依据。

HPLC法同时测定杞菊叶黄素酯颗粒中绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A的含量

为建立同时测定杞菊叶黄素酯颗粒中绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A含量的测定方法。本研究采用高效液相色谱法,用Amethyst C18-H(4.6 mm×250 mm,5μm)作为色谱柱选择乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长348 nm柱温25℃进样量2μL。结果显示,绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A分别在0.01~0.07 mg/mL、0.01~0.05 mg/mL、0.03~0.16 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.999 4、0.999 5、0.999 2;平均回收率分别为101.33%、95.31%、109.60%相对标准偏差为1.59%、1.29%、1.42%;精密度试验结果相对标准偏差(RSD)分别为1.01%、0.73%和0.45%;稳定性试验结果相对标准偏差为1.49%、1.26%、0.72%。该方法测得3批产品中绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A的含量均值为(98.94±0.56) mg/100 g、(90.45±0.82) mg/100 g、(145.63±2.21)mg/100g(n=9)。本研究方法简便、准确、可靠,可作为杞菊叶黄素酯颗粒的含量测定方法。

阿胶益寿口服液指纹图谱及4种成分的含量测定

为了建立阿胶益寿口服液的高效液相色谱指纹图谱,同时测定制剂水解产生的L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的含量,采用异硫氰酸苯酯衍生化、高效液相色谱法检测得到10批次阿胶益寿口服液的指纹图谱,并采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)进行相似度评价,确定共同拥有峰;同法测定制剂中4种氨基酸的含量。研究发现,10批次制剂中共有8个共有峰,相似度≥0.9;指认了L-羟脯氨酸(1号峰)、甘氨酸(3号峰)、丙氨酸(4号峰)、L-脯氨酸(5号峰),4种成分的线性关系良好(r≥0.9997),加样回收率平均值分别为104.39%、105.37%、102.89%、105.19%,RSD分别为3.47%、3.50%、3.68%、2.42%。该研究建立的阿胶益寿口服液指纹图谱特征性强,4种氨基酸的含量测定方法简单、准确易行,可为阿胶益寿口服液的质量评价提供参考。

HPLC法测定小儿肺热咳喘口服液中3种防腐剂的含量

目的:建立小儿肺热咳喘口服液中3种防腐剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱为Thermo syncronis C_(18)(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(19∶81),流速1 mL/min,柱温30℃,检测波长320 nm,进样量10μL。结果:苯甲酸、山梨酸、糖精钠在5~60μg/mL范围内与其峰面积均呈良好的线性关系(r>0.999),平均加样回收率分别为99.72%(RSD=1.57%,n=6),97.30%(RSD=1.70%,n=6),101.37%(RSD=0.99%,n=6);苯甲酸、山梨酸、糖精钠精密度试验的RSD分别为0.07%、0.21%、0.18%。结论:实验采用的HPLC法简便、准确、专属性强、重复性好,可用于液体口服制剂中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量测定。

HPLC法测定金银翘清热解毒颗粒中绿原酸的含量

建立金银翘清热解毒颗粒中金银花有效成分绿原酸的含量测定方法;采用高效液相色谱法测定金银翘清热解毒颗粒中绿原酸的含量,选用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂,乙腈(13)∶0.4%磷酸溶液(87)作为流动相,流速为每分钟0.8 mL,检测波长设定327 nm,柱温设定为25℃,理论板数按绿原酸峰计算应大于1000;结果显示绿原酸在0.3232~2.424μg范围内具有良好线性关系,平均回收率为98.6%,相对标准偏差1.02%。说明该方法简便迅速,精密度高,重现性好,结果稳定,适用于金银翘清热解毒颗粒成品的含量控制。

艾不同部位有效成分含量的比较

目的建立药材艾不同部位中4种活性成分的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法。方法采用HPLC测定艾叶和茎中绿原酸、芦丁、槲皮素、山奈酚含量,色谱柱为Agilent Extend C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长为360 nm;柱温为30℃;流速为1.0 ml/min。结果绿原酸、芦丁、槲皮素、山奈酚分别在7.826~782.6μg/ml,0.842~84.2μg/ml,1.685~168.5μg/ml,2.654~265.4μg/ml范围内与峰面积线性关系良好(R^(2)分别为0.9998,0.9995,0.9997,0.9998),精密度、稳定性和重复性良好,平均加样回收率分别为98.92%,97.58%,101.25%,98.02%,RSD分别为1.89%,2.04%,1.69%,2.27%。艾叶和茎中4个成分的含量存在显著差异,其中绿原酸在叶和茎中含量最高,芦丁在叶和茎含量最低。结论本研究所建立的方法高效简便、专属性强,可用于艾叶和茎中绿原酸、芦丁、槲皮素、山奈酚的含量测定。

高效液相色谱法测定不同产地拳参中没食子酸、儿茶素、绿原酸的含量

目的:建立测定拳参中没食子酸、儿茶素和绿原酸的定量分析方法,并比较不同产地拳参中3个指标性成分含量差异。方法:采用高效液相色谱法,梯度洗脱。结果:在建立的色谱条件下,3个成分分离度良好,没食子酸、儿茶素和绿原酸分别在4.48179.2μg/mL、4.14165.6μg/mL和8.42505.2μg/mL范围内线性关系良好;方法的精密度、稳定性、重复性试验的结果良好;平均加样回收率在85%105%内。结论:建立的方法操作简单、稳定可靠,重复性好,可为拳参的质量评价提供参考;拳参药材中3个成分含量存在显著产地差异。

基于HPLC法测定骨髓炎颗粒中4种主要有效成分含量

目的建立骨髓炎颗粒中黄芩苷、绿原酸、黄芪甲苷、汉黄芩苷等主成分含量测定方法,为深入研究骨髓炎颗粒奠定基础。方法采用HPLC法。色谱条件:Diamonsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱;检测波长280 nm;流速为1.0 mL/min;柱温30℃;进样量10μL。结果绿原酸、黄芪甲苷、黄芩苷、汉黄芩苷分别在质量浓度6.00~120、5.75~115、34.0~680、7.55~151μg/mL范围内线性关系良好,r均大于0.9995;加样回收率分别为97.71%、100.36%、99.81%、101.05%,RSD值均小于2.0%。结论所建立的含量测定方法操作简单,重复性及准确性较好,可用于骨髓炎颗粒的质量标准评价。

亳州地区菊花的HPLC指纹图谱研究

目的 通过建立亳州地区菊花的HPLC指纹图谱,鉴别菊花的不同品种类型,为评价亳州地区菊花质量控制提供一定参考。方法 采用HPLC,ZORBOX SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相,流速0.8 ml/min,柱温35℃,进行梯度洗脱,检测波长325 nm。结果 建立了亳州地区菊花药材的HPLC指纹图谱,标定13个共有峰,指纹图谱的相似度在0.100~0.999之间,并定量测定了菊花样品中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量。结论 本实验建立的高效液相指纹图谱方法能简便、快速地对亳州地区菊花品种进行区分,也为亳州地区菊花的质量控制与品质评价奠定初步的研究基础。

基于抗炎有效成分畲药树参茎质量标准的研究

目的:以抗炎有效成分为评价指标,建立畲药树参茎的质量标准。方法:采用显微鉴别法对树参茎粉末的特征性组织、细胞及细胞内含物进行鉴别;采用薄层色谱法对树参茎中的4个主要抗炎有效成分(紫丁香苷、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C)进行鉴别;采用高效液相色谱法建立树参茎中上述4种成分的含量测定方法;并对树参茎的水分、总灰分、浸出物进行控制。结果:建立的显微鉴别法可鉴别出树参茎粉末中的木纤维、木栓组织碎片细胞、草酸钙簇晶、石细胞、导管、韧皮纤维;建立的两个薄层色谱法,可分别鉴别出树参茎中的主要抗炎有效成分紫丁香苷、绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C;建立的两个高效液相色谱法,可分别对树参茎中的紫丁香苷、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C进行含量测定,4种成分的线性范围分别为0.0357~0.8940μg、0.0775~1.9380μg、0.0223~1.1140μg、0.0123~0.6170μg;回归方程分别为y=1829.1x+3.5032(r=0.9998)、y=531.13x-5.3732(r=0.9998)、y=3296.4x+0.3842(r=0.9999)、y=3493.8x-13.2120(r=0.9999);平均加样回收率分别为98.52%、99.83%、98.32%、99.42%,RSD分别为0.57%、0.57%、0.86%、0.96%。结论:建立的方法简便、准确、重现性好,以抗炎有效成分为评价指标建立的质量标准更有利于发挥树参茎的临床疗效。