Mayven不同截短体原核表达载体的构建、表达和纯化

为了探索Mayven蛋白的功能,进一步研究多发性硬化症的发病机制,我们通过PCR扩增得到Mayven4个不同长度的基因片段,包括片段P1(1-902 bp)、片段P2(1-523 bp)、片段P3(507-182 bp)和片段P4(887-1782bp),将这些片段克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21,并用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE及western blot方法分析,采用GST蛋白纯化系统对融合蛋白进行纯化。实验结果显示我们成功构建了4个包含不同截短体的重组融合表达质粒GST-Mayven(P1、P2、P3、P4),诱导后表达得到4个截短体的Mayven融合蛋白,其表达形式均为可溶性表达,其相对分子质量与预期相符,纯化后得到各自的目的蛋白,为后续的Mayven蛋白的功能研究奠定了基础。

多发性硬化症相关蛋白Mayven全长及结构域在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因激活作用的检测

目的探索Mayven在多发性硬化症病程中的作用以及寻找能与之发生相互作用的蛋白。方法通过PCR扩增得到Mayven基因全长P1及4个不同长度的Mayven基因片段，构建出包含Mayven全长P1及4个不同结构域片段的酵母双杂交诱饵载体，然后将其导入酵母菌株MAV203中，并检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因的激活作用。结果实验结果表明全长P1、片段P3、P4不能激活报告基因HIS3和LacZ的表达，而片段P7和P8可以激活报告基因的表达，Mayven的C末端可能存在一个转录激活区。结论提示在筛选相互作用蛋白时可以使用全长P1及片段P3、P4，但转录激活是否是Mayven的生理功能仍有待进一步研究确证。