牛分枝杆菌Mb2277蛋白的表达及其反应原性初步研究

目的构建牛分枝杆菌Mb2277基因的原核表达载体,获得高纯度的融合表达蛋白,并对其表达产物的免疫原性进行初步研究。方法根据GenBank提供的M.bovisMb2277基因序列设计引物。以牛分枝杆菌(93006)DNA为模板,通过PCR方法扩增出Mb2277基因片段,以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切PCR产物和pET28a(+),后将纯化的Mb2277基因克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达质粒,再转化到E.coliBL21(DE3)表达菌株中,IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE,进一步利用Western Blot对表达产物的反应原性进行研究。结果获得了牛结核分枝杆菌Mb2277原核表达质粒,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约25ku蛋白表达条带,Western Blot结果显示,表达产物与兔抗分枝杆菌抗体具有反应性。结论该蛋白具有较强的反应原性。