EXPERIMENTAL STUDIES OF TARGETING THERAPY OF GASTRIC CANCER WITH ^(131)-I LABELED McAbs

To investigate the radioimmunotherapeutic efficacy, radio-immunoconjugate 131-I-3G9, 811-I-3H11 and 131-I-NMIgG (irre levant antibody) were i.p. injected into nude mice bearing human gastric cancer xenograftes. Each animal received a single doses of 555MBq. Over 14 days the accumulative absorbed doses in tumors were 13.7 Gy for 131-I-3H11 and 12.17 Gy for 131-I-3G9. Both were significantly higher than that for 131-I-NMIgG (3.23 Gy). Thera peutic efficacy appeared most sharply from 2 to 3 weeks after injection. The inhibition ratio of tumor were 86% and 70% for 131-I-3H11 and 131-I-3G9 respectively. Histopathological evidance indicated that in tumor tissues radioactive damage was showed as karyopyknosis, karyorrhexis and necrosis or partial disappearance of tumor cells, while in the other tissues no radioactive damage was observed. WBC counts of all animals did not show significant difference before and after treatment, which indicated that the haemopoietic function of bone marrow was not affected.

H5亚型AIV HA抗原表位重组蛋白McAbs的制备及应用

目的以H5亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的血凝素(HA)抗原表位重组表达蛋白为抗原,探索H5亚型AIV单克隆抗体制备的简便有效途径。方法利用H5亚型AIV的HA抗原表位原核表达重组蛋白为抗原,4次免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法筛选能分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特性及初步应用价值进行测试。结果得到一株能稳定分泌针对H5亚型AIVHA抗原表位的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株,单克隆抗体ELISA效价达1:5×104,为具有IgK轻链的IgM亚类。该单克隆抗体能特异性地与H5亚型AIV产生肉眼可见的WesternBlot免疫印迹反应,与其它供试的禽病抗原无反应。H5N1亚型AIV阳性血清能有效阻断辣根过氧化酶标记的单克隆抗体与HA抗原表位重组蛋白的结合。结论本研究探索出一条利用H5亚型AIV的HA抗原表位重组表达蛋白为抗原的单克隆抗体制备的简便、高效途径,所制备的单克隆抗体稳定性好、效价高、特异性强,在H5亚型禽流感病毒及其血清学检测中有较高的应用价值。

猪瘟病毒保护性抗原E2蛋白单抗的制备及其抗原表位的初步分析

应用大肠杆菌表达的猪瘟病毒主要保护性 E2抗原决定簇蛋白和全长 E2基因构建的 DNA疫苗免疫 BAL B/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与 SP2 /0骨髓瘤细胞进行融合 ,经克隆和间接 EL ISA筛选 ,获得了 A11、B2、E3、H6、D5、D86株稳定分泌抗猪瘟病毒 E2蛋白单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞株。它们的腹水效价在 1∶ 80 0～ 1∶ 2 10 0 0 0之间。抗体类型鉴定结果表明 ,A11、E3、H6、D5和 D8为 Ig M类型 ,B2为 Ig G类型。随后用蛋白 A凝胶层析法和 PEG沉淀法分别纯化了 Ig G和 Ig M单抗。对纯化单抗进行的抗原识别表位研究结果初步表明 ,6株单抗可能识别 3种不同的E2抗原表位。

McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCRVβ基因的表达

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ用ＦＡＣＳ进行表型分析，结果发现：作用后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化，同时基因家族采用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析ＴＣＲＶβ基因１～２０亚家族表达水平与特征，健康人ＰＢＬｓ分别加入ＩＬ２、ＰＨＡ、抗ＣＤ３和ＣＤ３＋ＣＤ２８、ＣＤ２８＋ＣＤ８０、ＣＤ２＋ＣＤ５８作用肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）前表达水平平均约为５％，作用ＢＥＬ７４０２后表达水平约为１３％～２５％，其特征为Ｖβ７增高，这提示在癌抗原的参与下ＭｃＡｂ共刺激的Ｔ细胞活化，ＴＣＲ接受ＡＰＣ相应抗原的刺激，具有该ＴＣＲ的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的Ｔ细胞克隆，发挥其识别和杀伤癌细胞的作用，这将为肿瘤生物治疗的研究提供分子免疫学依据。

脑囊虫病人血清特异IgG4测定

应用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测脑囊虫病人血清特异性ＩｇＧ４抗体，检出率为９３．８３％（１５２／１６２），ＧＭＲＴ为１∶１４２４。其中重度囊虫感染病人的特异ＩｇＧ４检出率为１００％（２９／２９），ＧＭＲＴ为１∶２０９５；中度感染病人为９５．４５％（６３／６６），ＧＭＲＴ为１∶１５１０；轻度感染病人为８９．５５％（６０／６７），ＧＭＲＴ为１∶４００。显示血清特异ＩｇＧ４抗体水平与囊虫感染度有关。经药物治疗后，脑囊虫病人血清特异ＩｇＧ４抗体水平逐渐下降，４个疗程后的特异ＩｇＧ４检出率降为３８．４６％（１０／２６），ＧＭＲＴ为１∶２４６。ＩｇＧ４测定具有高特异性和敏感性。

相思子毒素-a双抗体夹心ELISA法的建立和初步应用

以已制备的抗相思子毒素-a(abrin-a)的单克隆抗体(McAb)4G1和兔源多抗建立了abrin-a双抗体夹心ELISA法。abrin-a质量浓度在15.62~250.00μg/L的范围内,质量浓度的对数值与其D450值呈直线相关,回归方程为y=1.0467x+0.5277(R2=0.9992,n=5),检测灵敏度为7.81ng/mL。该法与相思子凝集素、蓖麻毒素(ri-cin)和蓖麻凝集素无交叉反应。经初步用于人工污染abrin-a香肠样品和自来水样品检测,回收率分别为92.0%和85.0%,变异系数(CV)<6%。表明该检测方法具有快速、特异、灵敏等特点,可望用于食品、饲料和饮用水中abrin-a检验。

CIK细胞体外培养的免疫表型

目的探讨体外培养过程中细胞因子激活的杀伤细胞(CIK)免疫表型的动态变化。方法通过向外周血单个粒细胞(PBMC)中加入白细胞介素2(IL-2)、γIL-1α、γ干扰素(γ-IFN)与抗CD3McAb,诱导出CIK细胞。经流式细胞分析法对CIK细胞进行动态表型分析。结果动态表型分析显示,在第14~21天时CD3+CD16+56+细胞为(31·6±5·5)%^(35·8±9·7)%,呈高表达的平台期。结论CIK细胞在体外培养14~21d,CIK细胞CD3+CD16+56+双阳性细胞呈高表达,此时临床应用可取得较好疗效。

黄曲霉毒素B_1抗体和纳米金颗粒的相互作用机理

研究了纳米金标黄曲霉毒素B1单克隆抗体（McAb）探针的制备及其标记机理,确定了稳定标记5种不同粒径金溶胶（10.7～67.4 nm）所需McAb的最适质量浓度,分别为0.07,0.051,0.033,0.019,0.012mg/mL,作用时间为5 min,pH为7.4.对金标探针复合物进行透射电镜、红外光谱和免疫反应性鉴定的结果表明,与未标记抗体相比,抗体探针的免疫亲和常数、效价和常温贮藏稳定性得到了明显提高.通过荧光光谱和圆二色谱研究纳米金与AFB1单抗McAb的相互作用机理,发现纳米金对McAb产生静态猝灭,猝灭的速率常数随着温度升高而降低.确定了结合位点数和结合常数.结果显示,表明McAb的色氨酸残基与纳米金颗粒之间发生了F rster偶极-偶极无辐射能量转移.初步确定反应前后McAb构象组成发生了变化是McAb探针亲和力和稳定性提高的原因.

人脐血CD_3AK细胞生物活性及抗瘤作用的实验研究

目的 应用抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)和重组人白细胞介素- 2(rhIL- 2)共同诱导人脐血单个核细胞以制备CD3AK细胞,动态观察其体外增殖能力、杀伤活性、免疫表型变化及分泌细胞因子水平。方法 用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数,MTT法测定细胞杀伤活性,间接免疫荧光法分析细胞免疫表型,ELISA双抗夹心法检测肿瘤坏死因子- α(TNF- α)、干扰素 -γ(IFN- γ)、白细胞介素 -6(IL- 6)的水平。结果 脐血CD3AK细胞在第2周增殖能力最强,增殖倍数为78.56;培养至第12天的脐血CD3AK细胞杀伤活性最高,并对多种靶细胞的杀伤作用显著;表型分析脐血CD3AK细胞属异质性细胞群,培养第7、14 天,群体中 CD3+、CD8+、CD25+、CD38+、CD16+及 CD56+ 细胞较培养前显著增加(P<0.01); CD3 AK细胞培养至第 3 天的上清中 TNF -α、IFN -γ、IL -6 水平明显升高。结论 脐血CD3AK细胞是一种具有广谱杀瘤活力且增殖活性强的免疫细胞。本研究为脐血 CD3 AK细胞的免疫治疗提供了实验和理论依据。

McAb-ELISA检测丝虫特异IgG_4的应用研究

目的 探讨McAb -ELISA检测丝虫特异IgG4在丝虫感染监测中的应用价值。方法 利用生化免疫技术 ,经细胞融合 ,建立起 7株对IgG4表现为单一反应性的单克隆抗体 (McAb)。以此为探针 ,采用ELISA方法检测丝虫特异IgG4。结果 检测班氏微丝蚴血症者血清的敏感性为 96 3% (10 4 / 10 8) ,测得IgG4的最低限量为 0 0 1ul/ml;检测丝虫病非流行区健康者、肠道线虫感染者、华支睾吸虫感染者和囊虫病患者等血清均呈阴性 ,未出现交叉反应 ,特异性为 10 0 %。经现场应用研究 ,同样获得良好的实用性 ,有效地反映出当地丝虫病流行与感染状况。结论 该技术是监测丝虫感染的理想方法。

弓形虫病分子诊断技术研究进展

弓形虫病是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,严重危害人类健康并给世界各国的畜牧业造成巨大的经济损失,但弓形虫病缺乏特异性临床症状,给该病的诊断带来很大困难。分子诊断技术的迅速发展为弓形虫病的诊断提供了快速、灵敏、特异及稳定的检测方法。笔者从核酸分子杂交技术、聚合酶链反应(PCR)、单克隆抗体(McAb)技术及生物芯片技术几个方面介绍了用于诊断弓形虫病的分子诊断技术的研究进展。

^(211)At偶联CEA单克隆抗体的标记及初步动物实验

以砹苯甲酸为中间体,通过活化羧基反应,制得了^(221)At偶联癌胚抗原(CEA)单克隆抗体(McAb)。改进了文献报道的方法,并采用HPLC对偶联物进行了分析和鉴定。方法全程标记率不低于30％,经凝胶色谱Sephadex G_(75)柱分离得到的偶联物注射液比活度可达3.7×10~4Bq/μg McAb。通过测定^(211)At-CEA McAb和^(211)At-在鼠血液和其它组织中的动态曲线,还讨论了偶联物在动物体内代谢的稳定性。

抗戊型肝炎病毒单克隆抗体识别表位的初步研究

通过Western blot、体外捕获PCR、ELISA阻断实验及合成的多肽库等方法，对23株抗戊型肝炎病毒（HEV）单克隆抗体（单抗）识别HEVORF2表位的作用进行系统研究。结果显示，7株线性单抗识别表位都位于ORF2aa408-458之间，16株构象型单抗识别表位都定位于ORF2aa459-606之间，大部分构象型单抗识别表位都在天然病毒表面。对这些单抗识别表位系统地了解将为HEV疫苗、诊断、病毒受体和病毒感染机制等方面的研究提供重要工具。

McAb检测囊尾蚴循环抗原诊断脑囊虫病试剂盒的研制

本文报道了McAb(4F_2)ELISA检测囊尾蚴循环抗原诊断脑囊虫病试剂盒的研制。实验对227例脑囊虫病患者脑脊液进行检测,循环抗原阳性率为84.58％,其中活动型脑囊虫病患者171例,循环抗原阳性率为93.57％。56例非活动型脑囊虫病患者,循环抗原阳性率为57.14％,前者的循环抗原强度也明显高于后者。83例患有其它中枢神经系统疾病的患者,1例阳性,阴性符合率为98.80％。本试验方法简便,结果客观,对脑囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高、特异性强。

检测特异IgG4用于丝虫病监测的研究

应用细胞融合技术建立抗人ＩｇＧ４ＭｃＡｂ杂交瘤细胞，生产ＭｃＡｂ。以此为探针，应用ＥＬＩＳＡ方法检测班氏微丝蚴血症血清中特异ＩｇＧ４的阳性率为９５．９１％（４７／４９）；治疗后的原微丝蚴血症ＩｇＧ４阳性率为１．４５％（１／６９）；７７例晚期丝虫病症状者及５０份非流行区健康人血清均为阴性；肠道线虫感染、囊虫感染及华支睾吸虫感染者血清均未出现交叉反应；检测原班氏丝虫病高、中度流行区正常人群滤纸干血的特异ＩｇＧ４阳性率分别为０．７９％（６／７６０）和０．２７％（３／１０９５）。显示特异ＩｇＧ４检测具有较高的敏感性与特异性。是诊断丝虫感染的有效方法，可取代微丝蚴血检用于现场的人群丝虫病监测。

淋巴细胞经TCR－CD3活化增殖作用的分析

本文探讨了抗ＣＤ３单抗诱导的淋巴细胞活化增殖及有关影响因素。实验结果表明：①淋巴细胞内钙升高是淋巴细胞活化增殖的重要条件，ＣＤ３ＭｃＡｂ引起的早期胞浆游离钙迅速升高主要由内质网释放钙离子所致，而淋巴细胞增殖不仅需要细胞内钙释放，还需要细胞外钙内流；②ＧＴＰ结合蛋白是淋巴细胞激活过程的一重要环节，经Ｇ蛋白作用物霍乱毒素作用后，淋巴细胞ＤＮＡ合成显著降低；③新霉素和ＰＳＳ可抑制ＰＬＣ和ＰｋＣ的活性，对淋巴细胞ＮＤＡ合成造成剂量依赖性抑制作用。此外，抗ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导的淋巴细胞ＤＮＡ合成需要辅佐细胞的存在，高度纯化的Ｔ细胞对ＣＤ３ＭｃＡｂ的刺激不发生增殖反应。

^(131)I-抗VEGF McAb的制备及其体外免疫结合活性鉴定

目的 制备13 1I 抗 VEGFMcAb( 13 1I sc 72 69) ,并探讨其作为肿瘤放射免疫显像剂的可能性。方法 采用Iodogen法碘化标记制备13 1I sc 72 69。SephadexG5 0分离纯化标记产物 ,三氯醋酸法测定标记产物的放射化学纯度 ,体外细胞结合分析法鉴定13 1I sc 72 69的免疫结合活性。结果 ①13 1I标记率为 2 7.46% ,标记产物的放射性比活度为 1.0 2MBq/μg ,平均放射性化学纯度为96.2 0 %。平均放射性浓度为 18.3 0MBq/ml。②体外结合分析显示 ,13 1I sc 72 69与人膀胱癌T2 4细胞结合率达 5 9.12 % ,而与人脐静脉血管内皮细胞结合率仅为 7.16% (P <0 .0 0 1)。13 1I sc 72 694℃保存 7d后与T2 4细胞的结合率仍为 5 6.3 1%。结论 本实验制备的13 1I sc 72 69,其放射性化学纯度 >95 % ,有良好的免疫活性和稳定性 ,具备作为放射性显像剂的条件。

抗人CD20单克隆抗体诱导Daudi细胞凋亡的功能研究

目的 观察由基因重组抗原制备的抗人CD2 0单克隆抗体 (CD2 0 McAb) 1- 2 8对B淋巴瘤细胞的促凋亡作用 ,并探讨其作用机理。方法 利用流式细胞术测定所获 1- 2 8单抗对标准CD2 0 FITC单抗的竞争抑制作用及对胞内游离钙的影响 ;通过电镜观察其诱导Daudi细胞凋亡后形态上的改变 ,免疫印迹实验显示Daudi细胞凋亡后功能上的变化。结果 1- 2 8能明显竞争标准CD2 0 FITC单抗与Daudi细胞表面CD2 0分子的结合。电镜结果证实了 1- 2 8能够促进Daudi细胞发生凋亡的结论 ;实验结果显示Daudi细胞与 1- 2 8作用后胞内游离钙浓度明显升高 (P <0 .0 5 ) ,细胞内Bcl 2蛋白和caspase酶原的表达量下降 ,而Bax蛋白和caspase酶原降解的活性产物表达增加。结论 1- 2 8能竞争结合Daudi细胞表面的CD2