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结核分枝杆菌Mce2R/Rv0586蛋白的克隆、表达与纯化
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作者 卢作焜 李文文 +3 位作者 李蓉芳 许燕浩 张良 张爱莉 《许昌学院学报》 CAS 2021年第5期63-66,共4页
构建pET-32m-Mce2R原核表达质粒,对重组蛋白Mce2R进行诱导表达、纯化及活性鉴定.以结核分枝杆菌H37Rv全基因组为模板,经聚合酶链式反应(PCR)扩增Mce2R(Rv0586)基因片段,产物经BamHⅠ和HindⅢ限制性内切酶酶切,电泳验证后与同样双酶切后... 构建pET-32m-Mce2R原核表达质粒,对重组蛋白Mce2R进行诱导表达、纯化及活性鉴定.以结核分枝杆菌H37Rv全基因组为模板,经聚合酶链式反应(PCR)扩增Mce2R(Rv0586)基因片段,产物经BamHⅠ和HindⅢ限制性内切酶酶切,电泳验证后与同样双酶切后的载体质粒pET32m进行连接,将连接产物pET-32m-Mce2R转化到大肠杆菌DH5a中,抽提质粒后测序验证,重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)中以IPTG诱导表达,利用亲和层析纯化,经SDS-PAGE检测目的蛋白,分子量约为29 kDa.为进一步探索结核分枝杆菌Mce2R蛋白的结构及生化机制奠定了基础. 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 mce2r 克隆 表达 纯化
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