miR-137通过靶向MCL1和谷氨酰胺转运SLC1A5调节肺癌细胞的铁死亡机制

目的 探讨miR-137通过靶向髓系白血病1蛋白(MCL1)和谷氨酰胺转运蛋白溶质载体家族A1成员(SLC1A)5调节肺癌细胞铁死亡的机制。方法 非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549从美国典型培养物保藏中心获得。培养基均补充有10%胎牛血清(FBS),在37℃的含5%CO_(2)的潮湿空气中孵育。培养细胞以进行miR-137载体转染,直至细胞融合度达到70%~80%。将培养细胞分为对照组、miR-137转染组和miR-137沉默组。通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析细胞MCL1和SLC1A5、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4 mRNA表达。通过双重荧光素酶报告基因测定miR-137与MCL1和SLC1A的靶向作用。通过铁测定试剂盒测量每个细胞系中的Fe2+浓度。通过线粒体超氧化物(MitoSOX)指示剂测量了细胞中MitoSOX的产生。通过相应试剂盒检测活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平。通过流式细胞仪检测细胞凋亡。通过Transwell法测定miR-137对细胞迁移、侵袭的影响。结果 miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组MCL1、GPX4和SLC1A5 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组MCL1、SLC1A5和GPX4 mRNA表达显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-137转染组显著降低了用Wt-SLC1A5和Wt-MCL1载体共转染的NSCLC细胞中的荧光素酶活性(P<0.05),而Mut-SLC1A5和Mut-MCL1模拟共转染荧光素酶活性酶无显著变化(P>0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组Fe2+浓度、MitoSOX浓度显著降低,线粒体相对膜电位显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组Fe2+浓度、MitoSOX浓度显著升高,线粒体相对膜电位显著降低(P<0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组ROS和MDA浓度显著降低,GSH浓度显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组ROS和MDA浓度显著升高,GSH浓度显著降低(P<0.05)。24、48和72 h时,miR-137转染组较miR-137沉默组和对照组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),72 h时miR-137沉默组较对照组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组细胞迁移、侵袭数量显著增多(P<0.05),miR-137转染组较对照组细胞迁移、侵袭数量显著减少(P<0.05)。结论 miR-137可以靶向调控SLC1A5和MCL1,诱导肺癌细胞铁死亡,从而促进细胞凋亡。

CircSMC3调节miR-582-5p/MCL1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨环状非编码RNA(CircRNA)SMC3通过调节微小RNA(miR)-582-5p/髓细胞白血病基因1(MCL1)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测4种GC细胞系及正常胃上皮细胞系GES-1中SMC3、miR-582-5p、MCL1mRNA的表达水平。将SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-SMC3组、mimics NC组、miR-582-5p组、si-SMC3+inhibitor NC组、si-SMC3+miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p+pcDNA3.1组、miR-582-5p+MCL1组。检测各细胞凋亡、增殖、迁移及相关蛋白表达的情况;验证miR-582-5p与SMC3、MCL1的靶向关系。结果:4种GC细胞系中SMC3、MCL1 mRNA表达均增加,miR-582-5p表达下降(P<0.05)。干扰SMC3、过表达miR-582-5p可以抑制SGC-7901细胞增殖、迁移及相关蛋白、表达(P<0.05);抑制miR-582-5p表达可逆转干扰SMC3对细胞的作用(P<0.05);上调MCL1可逆转过表达miR-582-5p细胞的作用(P<0.05)。结论:干扰SMC3可能通过调节miR-582-5p/MCL1轴,抑制SGC-7901细胞增殖、迁移,促进凋亡。

乳腺癌中MCL1基因的研究进展

髓样细胞白血病1(MCL1)是BCL2家族中的一种独特的抗凋亡基因。MCL1在多种人体肿瘤中高表达,对肿瘤的发生发展、治疗及预后具有重要影响。MCL1在乳腺癌组织中的高表达与组织学分级、预后及化疗耐药密切相关。针对MCL1的特异性靶向治疗化合物在乳腺癌临床前期动物实验模型中显示出较好疗效。深入解析MCL1的分子结构、功能和表达状况有助于乳腺癌的临床评估,并为乳腺癌的治疗提供了一个新的靶点。

miR-125b靶向抑制BCL2、MCL1表达对胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药性的影响

目的:研究miR-125b在胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药形成中的作用。方法:运用miRNA实时定量PCR方法检测miR-125b在SGC7901/VCR细胞与母代SGC7901细胞中的表达差异,运用Western blot检测SGC7901/VCR细胞与母代SGC7901细胞抗凋亡蛋白BCL2、MCL1的表达差异,分别构建BCL2、MCL1 3’UTR荧光素酶报告质粒验证miR-125b的靶基因,在耐药细胞株中瞬时转染miR-125b模拟物以检测上调miR-125b对SGC7901/VCR细胞BCL2、MCL1蛋白表达及多药耐药性的影响,并运用流式细胞术检测转染后耐药细胞对长春新碱诱导凋亡的影响。结果:miR-125b在SGC7901/VCR细胞中呈低表达,抗凋亡蛋白BCL2、MCL1在SGC7901/VCR细胞中呈高表达,荧光素酶报告实验证实BCL2、MCL1是直接受miR-125b调控的靶基因,在耐药株中上调miR-125b显著抑制BCL2、MCL1蛋白表达水平,显著增加细胞对长春新碱、顺铂、阿霉素、依托泊苷的敏感性,并显著增加细胞对长春新碱诱导的凋亡。结论:miR-125b靶向抑制BCL2、MCL1表达可增加胃癌SGC7901/VCR细胞对多种化疗药物的敏感性。

MCL1蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的:MCL1(myeloid cell leukemia-1)与多种恶性肿瘤的发生、发展及转移相关。本文从临床样本和细胞水平检测胃癌组织中MCL1蛋白的表达水平,探讨MCL1蛋白在胃癌发生、发展中的作用。方法:采用S-P免疫组化法检测正常胃黏膜、癌旁胃黏膜和胃癌组织芯片中MCL1蛋白的表达,Western blot检测MCL1蛋白在人胃癌BGC823、SGC7901、MKN28细胞中的表达。结果:免疫组化结果显示,MCL1蛋白表达定位于细胞的胞浆,着色呈黄色至棕黄色;正常胃黏膜、癌旁胃黏膜、胃癌中MCL1蛋白阳性表达率分别为18.18%(4/22)、54.17%(26/48)、83.33%(75/90);MCL1蛋白在胃癌中的表达高于癌旁胃黏膜及正常胃粘膜,癌旁胃黏膜与正常胃粘膜MCL1蛋白表达亦具有明显差异(P<0.05);MCL1蛋白阳性表达率在伴淋巴结转移组为93.48%(43/46),无淋巴结转移组为72.72%(32/44),两者差异有显著性意义(P<0.05);而与性别、年龄和肿瘤大小无关。S-P免疫组化法与Western blot结果显示MCL1蛋白表达与胃癌分化程度呈负相关。结论:MCL1蛋白表达与胃癌发生、分化程度和淋巴结转移相关。

胶质瘤细胞中上皮剪接调控蛋白1(ESRP1)对人髓细胞白血病基因(MCL1)剪接的调控

目的研究胶质瘤细胞系U251中上皮剪接调控蛋白1(ESRP1)对人髓细胞白血病基因1(MCL1)转录本剪接的调控作用。方法对胶质瘤患者数据库中MCL1的测序结果进行数据挖掘,寻找关键位点。构建pc DNA-ESRP1外源表达载体并在U251细胞中进行过表达,通过反转录PCR和Western blot法检测MCL1不同异构体的表达情况。结果 ESRP1在U251细胞中的蛋白表达水平较正常胶质细胞低,MCL1异构体1在U251细胞中的表达高于正常胶质细胞,而异构体2和异构体3的表达则低于正常胶质细胞;在U251细胞中过表达ESRP1以后,发现异构体1表达较未转染组下降,而异构体3表达则显著升高,异构体2表达无明显变化。此外,第801G、802A缺失的MCL1无法被ESRP1正确剪切,异构体1和异构体3的表达与ESRP1转染前后无显著差异。结论抑制ESRP1表达或RNA识别位点突变可以引起肿瘤中癌基因转录本剪接异常。

人mcl1不同亚型在结肠癌组织中表达变化的临床意义

目的探讨人mcl1基因不同亚型在结肠癌组织中差异表达的临床意义。方法采用RT-PCR和Western blot分别检测正常结肠组织、结肠腺瘤、结肠腺癌组织以及相应的癌旁组织各20例中mcl1基因三种m RNA剪接异构体和三种蛋白亚型的表达水平,进而分析这些亚型表达差异与肿瘤临床病理特征之间的相关性。结果 mcl1基因亚型1在结肠肿瘤组织及相应旁组织中的m RNA和蛋白质水平表达均高于正常组(P=0.009,P=0.022),且腺癌组中的m RNA和蛋白质水平表达亦高于腺瘤组(P=0.004,P=0.034)。亚型2在结肠肿瘤组织及对应旁组织中的m RNA和蛋白质水平表达均高于正常组(P=0.002,P=0.011),且腺癌组中的m RNA和蛋白质水平表达亦高于腺瘤组(P<0.001,P=0.007)。亚型3在结肠肿瘤组织及对应旁组织中的m RNA和蛋白质水平表达均高于正常组(P=0.027,P=0.045),但肿瘤组与相应旁组织之间以及腺癌组与腺瘤组之间的比较差异均无统计学意义。结论研究表明mcl1亚型1和亚型2对结肠癌肿瘤恶性程度呈正相关,可以作为临床评估结肠癌恶性程度有效的诊断指标之一。而亚型3可以作为肿瘤早期诊断的标志物,但其表达水平与恶性程度无明显相关性。

MCL1在鼻咽癌中的表达水平及临床意义

目的研究髓样细胞白血病蛋白1(myeloid cell leukemia-1 protein,MCL1)在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中的表达情况,并分析其表达水平与鼻咽癌患者临床预后指标之间的关系。方法运用免疫组化方法检测鼻咽癌组织和正常鼻腔黏膜组织中MCL1蛋白的表达差异,并分析MCL1表达与鼻咽癌患者临床病理指标之间的关系;运用Western blot法检测人鼻咽癌细胞系CNE2、CNE1以及人永生化鼻黏膜上皮细胞NP-69中MUC1蛋白表达情况。结果免疫组化结果显示,鼻咽癌组织中MCL1表达阳性率为58.3%(35/60),在正常鼻腔黏膜组织中MCL1阳性表达率23.8%(5/21),鼻咽癌组织的MCL1表达水平显著高于正常鼻腔黏膜组织(P<0.05);MCL1的表达水平与鼻咽癌患者的T分级、临床分期及淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与患者年龄、性别及分化程度无显著相关性(P>0.05);同时,MCL1在鼻咽癌细胞系CNE2及CNE1中的表达高于NP69细胞,差异均有统计学意义(P<0.05);结论 MCL1在鼻咽癌中可能起到促进肿瘤进展的作用,患者的MCL1表达水平可能与其预后相关。

人MCL1基因表达载体的构建及在293细胞中的表达

目的构建含有人髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,MCL1)和绿色荧光蛋白基因(pEGFP)的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-MCL1真核表达质粒。经脂质体介导转染293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-MCL1真核表达质粒在293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MCL1mRNA的表达,Western Blot(蛋白质印迹)方法检测MCL1蛋白的表达。结果阳性重组子经酶切鉴定含有MCL1基因片段,基因测序结果与GenBank中MCL1序列相同。重组pEGFP-MCL1真核表达质粒转入293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出MCL1的条带,Western Blot检测出40kDa大小的蛋白。结论成功地构建了含有人全长MCL1基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物293细胞系中表达。

乳腺癌组织中MCL1的表达及临床意义

目的探讨MCL1蛋白在乳腺癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化方法检测78例乳腺癌及40例癌旁正常乳腺组织中MCL1蛋白的表达,并结合临床资料进行分析。结果 MCL1蛋白表达定位于乳腺癌细胞的胞浆及胞核,阳性率为49.11%,在癌旁正常乳腺组织中几乎不表达。MCL1蛋白在乳腺癌中的表达显著高于癌旁正常乳腺组织(P<0.01)。此外,MCL1蛋白阳性表达率在临床病理Ⅲ期组织中明显高于Ⅰ期和Ⅱ期(P=0.001),伴淋巴结转移者的表达显著高于无淋巴结转移者(P=0.018),其表达与年龄和肿瘤大小无关。结论 MCL1蛋白表达与乳腺癌发生、分化程度和淋巴结转移相关。MCL1基因可作为乳腺癌治疗的有效靶点。

MCL1激活MAPK-MEK信号通路促进食管癌细胞EC9706增殖

目的:探讨食管癌中MCL1表达变化及其调控食管癌细胞EC9706增殖的机制。方法:对2018年期间收集的12份食管癌组织及其癌周组织进行相对定量检测MCL1基因表达情况。构建表达MCL1的真核表达载体pCDNA3.1 H-MCL1-myc-His;将EC9706细胞设置转染空载体pCDNA3.1-myc-His的对照组、转染pCDNA3.1-MCL1-myc-His的实验组,细胞计数检测MCL1对细胞数量的影响,流式细胞仪检测细胞周期中各时期细胞比例变化,划痕实验检测对细胞迁移能力的影响。并以Western blot检测MCL1对MEK1磷酸化的影响,qRT-PCR检测MCL1对MAPK-MEK下游基因C-MYC、C-FOS、CCND1激活情况。结果:成功构建了表达MCL1的真核表达载体。和对照组相比,超表达MCL1后能够调控细胞周期改变,显著促进EC9706细胞数量增加,尤其在超表达MCL148h后,差异显著(P≤0.05);流式细胞仪检测细胞周期变化时也发现超表达MCL1后能够增加S+G2期的细胞比例;细胞划痕实验显示MCL1能够提高细胞迁移能力。检测到MCL1能够提高p-MEK1含量,并激活MAPK-MEK下游的靶基因C-MYC、C-FOS、CCND1的转录,差异显著(P≤0.05)。结论:MCL1在食管癌中普遍高表达,并且能够通过激活MAPK-MEK信号通路促进食管癌细胞EC9706增殖,或许可以作为一个鉴别食管癌的候选基因。

miR-125b靶向MCL1抑制胃癌MGC-803细胞增殖

探讨mi R-125b对胃癌MGC-803细胞增殖的影响及机制,为阐明胃癌发病的分子机制提供实验依据.采用q RT-PCR和原位杂交,检测mi R-125b在正常胃黏膜(NGM)和胃癌(GAC)组织中的表达.将mi R-125b导入胃癌MGC-803细胞,观察mi R-125b高表达对MGC-803细胞增殖的影响.利用Targetscan 6.2软件及荧光素酶报告基因检测,分析mi R-125b对MCL1基因的靶向性作用.构建MCL1干扰载体,观察干扰MCL1基因表达对MGC-803细胞增殖的影响.结果发现,mi R-125b在胃癌组织中低表达,其表达与胃癌的分化程度及患者预后呈正相关,与TNM分期、淋巴结转移呈负相关(P<0.01).mi R-125b高表达后MGC-803细胞的增殖降低、凋亡率增加、裂解caspase-3与裂解PARP表达增加(P<0.01);mi R-125b与MCL1基因的3′UTR(2 613~2 620)结合,抑制MCL1的m RNA及蛋白质表达(P<0.01);沉默MCL1基因表达后MGC-803细胞的增殖降低、凋亡率增加、裂解caspase-3与裂解PARP表达增加(P<0.01).从而得出结论,mi R-125b在胃癌组织中低表达,其表达与胃癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移及患者预后密切相关;mi R-125b靶向抑制MCL1基因表达,活化caspase-3信号通路,抑制MGC-803细胞增殖.

miRNA-4429靶向结合MCL1调控食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移与侵袭的机制研究

目的探讨miRNA-4429靶向结合髓样细胞白血病-1(MCL1)对食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。方法采用qRT-PCR法检测食管鳞状细胞癌细胞系和食管正常上皮细胞中miRNA-4429的相对表达量。采用脂质体转染法分别将miRNA-4429模拟物和模拟物对照转染至食管鳞状细胞癌EC9706细胞,分为实验组和对照组。应用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术和Transwell小室实验等探究miRNA-4429对食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。构建MCL1的3'非编码区(3'UTR)野生型和突变型荧光素酶报告基因载体,应用荧光素酶报告基因实验验证MCL1是否为miRNA-4429的靶基因。采用Western blot法检测实验组和对照组MCL1蛋白的表达水平。结果4株食管鳞状细胞癌细胞中miRNA-4429相对表达量均明显低于食管正常上皮细胞(均P<0.01);而与对照组比较,实验组细胞中miRNA-4429相对表达量显著上调(P<0.01)。实验组细胞OD值在72、96 h均明显低于对照组(均P<0.01);与对照组比较,实验组细胞集落形成数明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。实验组细胞迁移数及侵袭数均明显低于对照组(均P<0.01)。miRWalk、miRDB和miRTarBase预测结果表明,MCL1是miRNA-4429的作用靶基因。荧光素酶报告基因实验的结果表明,共转染MCL13'UTR-野生型荧光素酶报告载体后,与对照组比较,实验组荧光素酶相对活性降低(P<0.05);而共转染MCL13'UTR-突变型荧光素酶报告载体后,实验组与对照组荧光素酶相对活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组MCL1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.01)。结论食管鳞状细胞癌细胞株中miRNA-4429相对表达量降低,上调miRNA-4429表达可减弱食管鳞状细胞癌EC9706细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,其作用机制可能与靶向结合调控MCL1的表达有关。

Notch1、Mcl1蛋白的表达与结肠癌分期、转移因素的关系

目的:探讨结肠癌组织中Notch1蛋白、Mcl1蛋白的表达与结肠癌分期、转移因素的关系。方法:选取我院收集的手术后结肠癌组织60例、对应的癌旁组织60例,采用免疫组化和Western-blot检测两组标本中的Notch1蛋白、Mcl1蛋白表达水平,分析不同病灶直径、不同肿瘤分化程度、不同TNM分期、是否发生淋巴结转移的结肠癌组织中Notch1蛋白、Mcl1蛋白表达水平。结果:结肠癌组织中的Notch1蛋白、Mcl1蛋白相对表达强度均高于癌旁组织,差异均具有统计学意义(P<0.05);TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移的结肠癌中的Notch1蛋白、Mcl1蛋白相对表达强度高于TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、未发生淋巴结转移的结肠癌(P<0.05);不同分化程度、不同病灶直径的结肠癌组织中的Notch1蛋白、Mcl1蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。结论:与正常结肠组织相比,结肠癌组织中的Notch1蛋白、Mcl1蛋白表达水平增加,且Notch1蛋白、Mcl1蛋白的表达水平与结肠癌的发生发展相关。

多发性骨髓瘤患者血清IL-6、IL-6R、MCL1的检测分析及与预后的关系

目的通过检测多发性骨髓瘤(MM)患者血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-6受体(IL-6R)、髓样细胞白血病蛋白1(MCL1),以及骨代谢标志物[N-端骨钙素(N-MID)、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(PINP)、Ⅰ型胶原蛋白羧基端β降解产物(β-CTX)]的表达,探讨血清IL-6、IL-6R、MCL1水平与MM预后的关系。方法选取该院收治的MM患者纳入MM组,按临床分期将其分为Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组3个亚组,以同期健康体检者为对照组,每组40例;采用电化学发光免疫分析法测定各组的血清IL-6、IL-6R、MCL1、β-CTX、PINP、N-MID水平。结果 MM组患者血清IL-6、IL-6R、MCL1水平均明显高于对照组(P<0.05),其中Ⅲ期组明显高于Ⅱ期组(P<0.05),Ⅱ期组明显高于Ⅰ期组(P<0.05)。MM组患者血清N-MID、PINP水平明显低于对照组(P<0.05),其中Ⅲ期组明显低于Ⅱ期组(P<0.05),Ⅱ期组明显低于Ⅰ期组(P<0.05);MM组患者血清β-CTX水平明显高于对照组(P<0.05),其中Ⅲ期组明显高于Ⅱ期组(P<0.05),Ⅱ期组明显高于Ⅰ期组(P<0.05)。血清IL-6、IL-6R、MCL1水平与MM临床分期呈正相关(r=0.68、0.56、0.72,P<0.05)。结论 MM患者血清IL-6、IL-6R、MCL1水平明显升高,与MM临床分期呈正相关,可用于评价MM骨损伤及MM预后。

miR-520f-3p靶向MCL1抑制结肠癌细胞生长及移植瘤发生

目的探讨miR-520f-3p对结肠癌细胞生长及移植瘤发展的作用及机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测结肠癌组织和细胞中miR-520f-3p的mRNA表达。将miR-NC、miR-520f-3p mimic、miR-520f-3p inhibitor质粒分别转染进入HT-29细胞,克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式检测细胞凋亡率,Western印迹检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、cleaved caspase-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。将裸鼠分为Control组、miR-NC组、miR-520f-3p mimic组、miR-520f-3p inhibitor组,在每只裸鼠左腋下皮下注射各转染的结肠癌HT-29细胞,30 d后处死。观察移植瘤体积并测定其重量,TUNEL检测细胞凋亡率,免疫组化检测Ki67阳性表达水平,Western印迹检测Ki67、PCNA、caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。双荧光素酶报告检测靶向关系,Western印迹检测髓样细胞白血病蛋白(MCL)1蛋白表达水平。将miR-520f-3p mimic与pc-NC或pc-MCL1质粒联合转染进入HT-29细胞,克隆形成实验检测细胞生长能力,流式检测细胞凋亡率,Western印迹检测Ki67、PCNA、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果与正常结肠组织和细胞相比,结肠癌组织和细胞中miR-520f-3p mRNA表达显著下调(P<0.01),选取HT-29细胞做后续实验。与Control组相比,miR-520f-3p mimic组HT-29克隆细胞数目显著减少,细胞凋亡率显著增加,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著下调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著上调(均P<0.01);miR-520f-3p inhibitor组HT-29克隆细胞数目显著增加,细胞凋亡率显著减少,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著上调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著下调(均P<0.01)。与Control组相比,miR-520f-3p mimic组HT-29移植瘤重量和体积显著减少,细胞凋亡率显著增加,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著下调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著上调(均P<0.01);miR-520f-3p inhibitor组HT-29移植瘤重量、体积及Ki67阳性细胞百分率显著增加,细胞凋亡率显著减少,Ki67和PCNA蛋白表达水平显著上调,cleaved caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著下调(均P<0.01)。miR-520f-3p靶向下调MCL1。过表达MCL1逆转miR-520f-3p过表达对HT-29细胞增殖和凋亡的作用(均P<0.01)。结论miR-520f-3p通过靶向下调MCL1来抑制结肠癌细胞生长及移植瘤的发展。

瑞吉欣介于JAK-STAT-MCL1通路对大鼠肾脏缺血再灌注损伤保护机制探究

构建大鼠模型,应用瑞吉欣后观察μ受体与JAK-STAT-MCL1各蛋白之间的变化,来证实瑞吉欣减轻肾脏再灌注损伤与JAK-STAT-MCL1的关系。方法 选取60只健康 Wistar 大鼠,重量:250~300g,雌雄不做限制,将所选大鼠随机分成四组,每组15只(按照随机数字表):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、瑞吉欣组(A组)和瑞吉欣+纳洛酮组(AN)组,建立大鼠肾脏缺血再灌注模型。S组不做人为缺血干预,IR组使用无创动脉夹夹闭双侧肾动脉45min,后松开动脉夹继续灌注24h,其余两组均使用无创动脉夹夹闭双侧肾动脉45min,再灌注即刻给予瑞吉欣20ug/kg/min,AN组同时给予纳洛酮5mg/kg。抽取静脉血备用,处死大鼠后留取肾组织,化验血检测BUN与SCr,显微镜下观察肾脏损伤情况、血管改变,采用免疫组化法观察肾脏病理变化以及蛋白表达情况,Western-Blot检测MCL1表达。结果 对大鼠肾功能检测进行统计学分析,S组较其他四组BUN、Scr数值较低,IR组与S组相比,表达具有显著差异(*P<0.05),A组与IR组相比,数值下降很明显,同样具有显著差异(#P<0.05)。大鼠HE 染色发现Sham组肾皮质、肾髓质结构清晰,IR组肾脏结构破环明显,提示造模成功。通过观察肾脏组织免疫组化结果,分析各组大鼠相关蛋白表达:S组三组蛋白表达强度介于A组与IR组之间,蛋白表达强度低于A组和A+N组,但高于IR组,可见STAT蛋白在细胞核表达成度较IR组略高,MCL1蛋白在肾小管中表达明显低于A组和A+N组,介于二者之间。通过对WB的结果分析,我们得出S组大鼠肾脏组织中MCL1的表达结果要明显低于各组,而A组蛋白表达程度有明显上升,IR组表达有上升趋势,但依旧低于A+N组。结论 瑞吉欣通过调控MCL1蛋白来减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤。

Mcl1对晚期非小细胞肺癌患者预后意义

目的:检测细胞凋亡通路蛋白Mcl1和Fbw7对晚期非小细胞肺癌患者预后的预测作用。方法:收集2008年3月至2011年6月在第四军医大学第一附属医院西京医院确诊晚期非小细胞肺癌且最初两个化疗周期采用"多西他赛+顺铂"方案的患者,通过电话和信件进行随访。用免疫组化方法检测患者肿瘤蜡块组织中蛋白Mcl1和Fbw7表达,用H评分系统将蛋白表达分为高表达组和低表达组。统计采用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析并进行Log-Rank检验,通过比例风险模型(Cox模型)逐步后退法进行多因素分析,以P<0.05为有显著差异。结果:共收集病例144例,其中腺癌69例,鳞癌64例,其它11例。Ⅲ期患者45例(31.25%)Ⅳ期患者99例(68.75%).64例(44.44%)患者Mcl1高表达,80例(55.56%)患者Mcl1低表达。单因素结果提示TNM分期是提示预后的显著因素(P=0.033),Ⅲ期患者1年生存率为74.20%(中位生存时间为666天),Ⅳ期患者1年生存率为55.60%(中位生存时间为415天)。Mcl1的表达与晚期非小细胞肺癌预后相关联(P=0.042),其中Mcl1高表达组1年生存率为69.9%(中位生存时间为612天),Mcl1低表达组1年生存率为55.30%(中位生存时间为406天)。多因素分析结果显示Mcl1(OR=1.809,95%CI(1.123-2.912),P=0.015)和TNM分期(OR=0.573,95%CI(0.336-0.978),P=0.041)有独立的预后意义。结论:Mcl1蛋白表达和TNM分期是晚期非小细胞肺癌的独立预后因素,Mcl1高表达组较低表达组有更好的预后,Ⅲ期患者比Ⅳ期患者有更好的预后。

人MCL1不同亚型在结肠癌中表达变化的临床意义

目的以MCL1基因为例,研究不同亚型在结肠癌组织中差异表达的临床意义。方法采用RT-PCR和WB分别检测正常结肠组织、结肠腺瘤、结肠腺癌组织以及对应的癌旁组织各20例中MCL1基因3种mRNA剪接异构体和3种蛋白亚型的表达水平,进而通过χ2检验分析了这些亚型表达差异在213例肿瘤临床病例中与肿瘤病理特征之间的相关性。结果 MCL1基因亚型1在结肠肿瘤组织及对应旁组织中的表达均高于正常组(mRNA,P=0.009;蛋白,P=0.022),且腺癌组中的表达亦高于腺瘤组(mRNA,P=0.004;蛋白,P=0.034)。亚型2在结肠肿瘤组织及对应旁组织中的表达均高于正常组(mRNA,P=0.002;蛋白,P=0.011),且腺癌组中的表达亦高于腺瘤组(mRNA,P<0.001;蛋白,P=0.007)。亚型3在结肠肿瘤组织及对应旁组织中的表达均高于正常组(mRNA,P=0.027;蛋白,P=0.045),但肿瘤组与对应旁组织之间以及腺癌组与腺瘤组之间的比较均无统计学意义。此外MCL1亚型1和亚型2对结肠癌肿瘤恶性程度呈正相关,而亚型3可以作为肿瘤早期诊断的标志物,但其表达水平与恶性程度无相关性。结论在临床评估结肠癌恶性程度过程中,位于核表达的MCL1亚型2可以作为有效的诊断指标,本研究为MCL1引物设计以及抗体选择提供一定参考价值。

MCL1基因扩增型胰腺癌一例

患者男，56岁，2015年5月外院诊断胰腺癌伴多发肺转移。2015年6月开始行吉西他滨联合替吉奥和尼莫珠单抗方案化疗6周期，疗效稳定。停药数月后于2016年1月替换为奥沙利铂联合伊立替康和5-氟尿嘧啶方案化疗4周期，疗效稳定，末次化疗时间2016年3月。