广东省腹泻仔猪大肠杆菌blaCTX-M-65与mcr-1基因共传播特征

【目的】调查分析广东省某生猪养殖场腹泻仔猪的大肠杆菌耐药情况以及同时携带blaCTX-M-65与mcr-1两种耐药基因的阳性大肠杆菌的分子特征与其共同传播特征,为耐药性监测及风险防控提供科学依据。【方法】从广东省肇庆市某生猪养殖场采集腹泻仔猪直肠棉拭子样品90份,并进行大肠杆菌分离鉴定;采用PCR方法检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与mcr-1基因,通过测序确定CTX-M亚型;采用琼脂二倍稀释法和微量肉汤稀释法测定分离菌对12种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC);使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)及多位点序列分型(MLST)分析菌株间的遗传背景;通过接合转移方法确定质粒水平转移的能力;使用复制子分型、S1-PFGE、Southern blotting方法检测质粒类型、耐药基因的定位及定位质粒的大小;通过三代测序及序列分析确定质粒的重组过程。【结果】共分离鉴定86株大肠杆菌,检测到44株携带CTX-M型ESBLs基因,其中blaCTX-M-55基因最流行(n=16,36.4%),其次是blaCTX-M-65(n=10,22.7%)、blaCTX-M-27(n=8,18.2%)、blaCTX-M-15(n=5,11.4%),还检测出blaCTX-M-79(n=2,4.5%)、blaCTX-M-14(n=2,4.5%)和blaCTX-M-24(n=1,2.3%)。10株blaCTX-M-65基因阳性菌有8株同时携带mcr-1基因。这8株大肠杆菌均表现为多药耐药,包括氨苄西林、阿莫西林、头孢噻呋、头孢喹肟、黏菌素等多种抗生素。8株菌共分为6种ST型、7个PFGE谱型。接合转移试验发现,有6株菌的blaCTX-M-65和mcr-1基因发生了共转移,且blaCTX-M-65与mcr-1基因均位于IncHI2型(253 kb)质粒上。其中1株菌在接合转移的过程中,其所携带的一个253 kb IncHI2质粒与一个69 kb IncFⅡ质粒发生融合,形成一个大小323 kb的融合质粒。对融合质粒进行三代测序解析,结果表明,在接合转移的过程中IS26介导了两个不同大小质粒的重组。【结论】IncHI2质粒是介导blaCTX-M-65和mcr-1基因共同传播的主要媒介,IS26通过与靶位点GTTTCACT的整合导致IncHI2质粒与IncFⅡ质粒融合。质粒重组扩大了大肠杆菌的耐药谱,加速了耐药基因的传播,促使多药耐药现象更严重,对公共卫生安全构成威胁,本研究为阐明多重耐药大肠杆菌的传播机制提供了参考依据。

mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌耐药基因研究

目的调查鲁中地区禽源性大肠埃希菌mcr-1基因的携带情况,了解mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌对常用β-内酰胺类药物、氨基糖苷类药物、喹诺酮类药物耐药基因的携带情况,掌握其耐药性。方法收集2020年4月至2021年10月鲁中地区3家大规模养殖场302份健康活鸡、鸭肛拭子新鲜粪便,对分离的大肠埃希菌用聚合酶链反应(PCR)检测mcr-1基因的携带率。对mcr-1阳性大肠埃希菌,采用BD凤凰hoenix TM 100 NMIC/ID-4复合板鉴定菌种及进行药敏试验,采用PCR检测各种β-内酰胺类药物耐药基因、氨基糖苷类修饰酶耐药基因、16S rRNA甲基化酶耐药基因和质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因。结果302份样品中共分离出291株禽源性大肠埃希菌,其中27株携带mcr-1基因,mcr-1基因携带率为9.3%。27株mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌中:超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因CTX-M-14、CTX-M-15、TEM-1携带率分别为100.00%(27/27)、70.37%(19/27)、74.07%(20/27);质粒介导AmpC酶耐药基因CMY-2携带率为14.81%(4/27);未检出bla SHV、bla DHA、OXA等β-内酰胺类药物相关耐药基因;未检出碳青霉烯酶基因;16S rRNA甲基化酶耐药基因rmtB及氨基糖苷类修饰酶耐药基因aac(6′)-Ⅰb-cr、ant(3″)-Ⅰ的携带率分别为25.93%(7/27)及25.93%(7/27)、92.59%(25/27);喹诺酮类药物耐药基因qnrS的携带率为81.48%(22/27),未检出qnrA、qnrB基因。对多黏菌素B、头孢噻肟、头孢西丁、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑表现出了100.00%耐药,对头孢吡肟、头孢他啶、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星和庆大霉素的耐药率分别为85.19%、33.33%、62.96%、14.81%、25.93%和77.78%,未出现对碳青霉烯类药物耐药的菌株。结论禽源性大肠埃希菌mcr-1基因的携带率为9.3%,是引起多黏菌素耐药的主要耐药机制。mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌同时携带多种耐药基因,表现出多重耐药的特征。

山东省聊城地区耐碳青酶烯类肠杆菌目细菌黏菌素耐药基因mcr-1相关感染的分子机制及临床特征

目的 探讨携带mcr-1耐药基因的耐碳青酶烯类肠杆菌目细菌(CRE)相关感染的分子机制及临床特征,为该类菌株感染的临床诊疗及预防区域内传播与暴发流行提供参考依据。方法 收集聊城市第二人民医院2016年1月—2022年12月分离自临床的非重复CRE,采用乙二胺四乙酸碳青霉烯酶失活试验(eCIM)与改良碳青霉烯酶失活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶表型;采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)扩增并测序分析与黏菌素耐药相关的mcr-1基因及碳青霉烯类耐药基因;采用多位点序列分型技术(MLST)确定菌株的序列分型(ST)。收集mcr-1基因阳性菌株感染患者的病历资料,统计相关信息并进行分析。结果 共分离CRE菌株127株,包括65株大肠埃希菌,52株肺炎克雷伯菌,3株阴沟肠杆菌,3株产酸克雷伯菌,2株奇异变形杆菌,以及产气肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌各1株。所有CRE菌株中有6株携带mcr-1基因,且同时为blaNDM-5基因阳性。携带mcr-1的6株CRE仅对替加环素具有较高的敏感性,表现为低水平耐药。MLST分型结果显示有4种不同的ST型别,其中2株为ST167,2株为ST410,其余2株分别株为ST48和ST361。6例患者的性别、年龄、抗菌药物使用史、基础疾病及病情严重程度均不同,各项感染指标有不同程度的升高,患者最终均治愈出院。结论 黏菌素耐药基因mcr-1在聊城地区临床分离的CRE中检出率较低且呈低水平耐药,但已发现该基因与碳青霉烯酶耐药基因共存的现象,需引起临床重视并加强监测。

MCR-1介导多黏菌素耐药性的分子机制研究进展

多黏菌素耐药基因mcr-1的出现为临床感染治疗带来了新的挑战。自其发现以来,已有6大洲61个不同的国家或地区报道了mcr-1的流行。为了遏制mcr-1的流行,我国农业农村部颁布了禁用多黏菌素作为饲料添加剂的禁令。尽管已有研究指出停用多黏菌素作为动物饲料添加剂可有效降低动物源、环境源和人源样本中mcr-1阳性菌的检出率,但是mcr-1在临床上仍呈低流行性的状态。截至目前已经发现34种mcr-1突变体和9种不同的MCR家族蛋白,未来是否会进化出流行率更高的MCR亚型也有待观察。关于mcr-1介导多黏菌素耐药的分子机制及其影响细菌细胞壁的机制也有新的成果不断出现。本文将对mcr-1的流行性、耐药机制及其对细菌适应性影响的分子机制3个方面的最新进展进行简要综述,以期为遏制多黏菌素耐药基因mcr-1的传播提供可参考依据。

鸡源携带黏菌素耐药基因mcr-1大肠杆菌的流行情况及耐药性研究

【目的】调查不同年份不同地区携带质粒介导的黏菌素耐药基因mcr-1大肠杆菌的流行情况,并分析其耐药性。【方法】2017、2018、2019、2021年从河南省开封、南阳以及江西省赣州随机收集鸡肛门拭子和粪便样品,对其进行细菌分离培养,挑取疑似菌落进行革兰染色镜检,利用药敏试验检测分离株对常见14种抗菌药的敏感性及多重耐药情况,通过PCR扩增分离株携带的临床常见耐药基因。采用多重PCR对mcr-1基因阳性分离株进行种族系统进化分析。【结果】共分离到724株鸡源大肠杆菌,其中河南省364株,江西省360株。724株分离株对四环素耐药率最高(93.65%),其次为氟苯尼考(87.98%),对阿米卡星和黏菌素较敏感,耐药率分别为4.83%和18.51%。724株菌株中共有96株分离株携带mcr-1基因,其均呈现多重耐药性,对多西环素和氟苯尼考的耐药率均为96.88%。96株携带mcr-1基因分离株中有27株同时携带其他临床耐药基因,其中14株携带fosA3基因,11株携带bla CTX-M-1G基因,13株携带bla CTX-M-9G基因,3株携带bla NDM基因,有11株同时携带磷霉素耐药基因fosA3和超广谱β-内酰胺酶基因。种族系统进化分析结果显示,87株携带mcr-1基因分离株为A群,4株为B1群,5株为D群。【结论】不同年份不同地区鸡源大肠杆菌携带mcr-1基因存在差异,mcr-1基因阳性菌株多重耐药情况较明显,部分携带mcr-1基因的分离株同时携带其他临床耐药基因。持续监测mcr-1基因在不同区域和不同领域的流行情况,有助于更好地了解细菌耐药性的形成和传播规律,进而采取有效的防控措施。

1株产NDM-9和MCR-1的鸡源大肠杆菌的分子及生物学特征

为探究质粒介导耐药性的传播特征,本试验以1株分离自山东某肉鸡养殖场的产新德里金属β-内酰胺酶NDM-9和磷酸乙醇胺转移酶MCR-1的大肠杆菌(25R)为研究对象,通过全基因组序列分析、质粒接合转移试验、抗菌药物敏感性试验、大蜡螟毒性感染试验、质粒稳定性试验和生长动力学方法研究其质粒分子和生物学特征。结果显示,携带bla NDM-9和mcr-1的质粒可各自亦可共同转移至其他菌株,并且携带上述耐药基因的质粒对宿主菌造成的适应性代价和毒性较低,更有利于耐药基因的传播。本试验为更深入了解质粒介导的细菌耐药性传播机制提供理论依据。

长沙地区禽源mcr-1肠杆菌流行病学调查

为研究湖南长沙地区禽源肠杆菌中黏菌素耐药基因mcr-1的流行情况,试验以湖南长沙某生鲜市场和禽源屠宰场采集的123份禽源泄殖腔拭子和环境样本为研究对象,通过耐药菌株筛选试验、采用PCR方法鉴定mcr-1耐药基因试验和药敏试验,分析禽源粪便及周围环境中大肠杆菌mcr-1阳性细菌耐药率。结果显示:分离到119株大肠杆菌,耐药基因mcr-1检出率13.8%(17/123),并对17株耐药菌株进行药敏试验,其结果显示,耐药率分别为:林可霉素100%,阿莫西林100%,氯霉素94%,庆大环素88%,氧氟沙星76%,噻胞霉素65%,头孢吡肟29%,替加环素0%;对两种药物耐药的菌株为41.2%(n=7),对三种及以上的药物耐药菌株为35.3%(n=6)。此研究为掌握长沙地区禽源mcr-1耐药菌株的耐药情况和耐药特征奠定了研究基础。

MALDI-TOF质谱技术对猪肠道菌群中携带mcr-1细菌的鉴定与聚类分型

为了解多粘菌素耐药基因mcr-1在猪肠道微生物群落中的分布特征,本研究采集分离同一猪肠道样品中的多粘菌素耐药菌,利用PCR进行mcr-1基因检测,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对mcr-1阳性菌株进行种属鉴定与亲缘关系分析。结果显示,在收集获得的325株多粘菌素耐药菌中,136株(41.8%)含有mcr-1基因,包括大肠杆菌70株,肺炎克雷伯菌19株,放线杆菌47株。细菌蛋白指纹图谱进行聚类分析显示,70株mcr-1阳性大肠杆菌被划分为13个亚型,19株肺炎克雷伯菌被分为3个亚型,其中有17株菌属于同一亚型(占89.5%),47株放线杆菌均为同一克隆。上述结果表明mcr-1在肠道菌群中存在克隆传播现象,细菌指纹图谱的多样性也提示可能存在质粒或者其他转移元件介导的mcr-1水平传播。MALDI-TOF-MS作为一种新的技术,不仅能够实现细菌的快速鉴定,而且可基于细菌蛋白指纹图谱对菌株进行初步的亲缘关系分析。

浙江省丽水地区碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌多黏菌素耐药性及mcr-1基因背景分析

目的了解丽水地区碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)的多黏菌素耐药情况及其耐药机制,为临床CRE抗感染治疗和防控提供实验依据。方法收集丽水市中心医院2010—2018年临床分离的CRE菌株,采用多位点序列分型(MLST)技术分析菌株的克隆群,采用微量肉汤稀释法检测菌株对碳青霉烯类和多黏菌素的最低抑菌浓度(MIC),利用PCR法检测碳青霉烯耐药基因和多黏菌素耐药基因mcr-1及其周围基因结构,并测序确认。以转化或接合试验分离纯化耐药质粒,利用复制起始子分析法鉴定质粒类型,纯化提取质粒并以二代测序(NGS)验证。结果共分离CRE菌株223株,其中多黏菌素MIC≥4μg/mL的耐药菌11株,且均为bla_(NDM)基因阳性。多黏菌素耐药菌中8株为mcr-1阳性且均呈低水平耐药(4μg/mL≤MIC≤8μg/mL)。4株菌获得mcr-1基因阳性的接合/转化子,其中IncⅠ2、IncⅩ4型质粒各2例,mcr-1基因分别位于IS Apl1-mcr-1-PAP2和ParA-hyp-hyp-mcr-1-PAP2结构。结论丽水地区CRE菌株对多黏菌素耐药主要呈mcr-1阳性并呈低水平耐药,首次发现bla_(NDM)和mcr-1双阳性的多黏菌素耐药性CRE菌株,需加强对其监测。

1株mphA和mcr-1阳性鼠伤寒沙门菌的鉴定及耐药特征分析

目的1株mphA和mcr-1阳性鼠伤寒沙门菌的鉴定及耐药特征分析;方法分离自4岁腹泻患者粪便样本中的1株鼠伤寒沙门菌,使用沙门菌血清凝集法进行菌株鉴定,质谱法复核鉴定结果;使用微量肉汤稀释法进行药敏试验;通过全基因组测序及耐药基因注释鉴定菌株所携带的耐药基因;通过质粒测序及生信分析进行质粒类型鉴定、质粒耐药基因、插入子等注释及质粒结构分析;通过质粒接合转移试验评估质粒的水平转移能力。结果药敏试验结果显示分离株对包括阿奇霉素、多黏菌素、头孢曲松和环丙沙星等临床常用抗生素药物耐药。耐药基因鉴定结果显示:该分离株携带包括大环内酯类抗性基因mphA,多黏菌素抗性基因mcr-1在内的12类45个耐药基因及1个氟喹诺酮类耐药点突变gyr A S83F。质粒测序分析结果显示:该菌株携带一个260,008bp大小的Inc HI2型质粒,该质粒携带包括mphA基因和mcr-1基因在内的19个耐药基因,15种插入子,4种转座子。质粒接合转移实验结果显示该质粒可以在肠杆菌目细菌之间水平转移。结论研究结果为临床治疗鼠伤寒沙门菌感染中合理使用抗生素以及有效预防、控制耐阿奇霉素、多黏菌素鼠伤寒沙门菌的传播提供了科学依据。

黏菌素耐药基因mcr-1的研究进展

多黏菌素类抗生素,尤其是多黏菌素B和多黏菌素E(黏菌素),因其良好的临床抑菌效果,常被认为是耐青霉烯类肠杆菌科(CRE)的最后一道防线。然而,近年来质粒介导的黏菌素抗性基因(mcr)及其多种亚型的出现和传播对公共卫生安全构成了严重的威胁与挑战。mcr-1基因在宿主和传播途径方面均呈现出复杂性,且遗传环境和生态位点分布均表现出多样性。本文基于世界各地携带mcr-1的肠杆菌科细菌的现有流行病学研究,讨论了mcr-1阳性分离物的流行情况、传播途径、耐药及传播机制,以期为相关科研人员提供理论参考。

基于RPA-LFD法的多黏菌素耐药基因mcr-1可视化快速检测方法建立与应用

目的:建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法,为其基层检测的展开提供依据和便利。方法:利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术(Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,RPA-LFD),辅以手持式胶体金读数仪;根据mcr-1基因保守序列设计合成一对特异性RPA引物,通过对反应条件和体系的优化,以及特异性试验、灵敏度试验、模拟食样试验和实际样品试验,成功建立了可视化定量检测细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD方法。结果:在引物浓度400 nmol/L,引物比例1:1时,该方法最佳反应条件为Mg^(2+)浓度14.0 mmol/L,反应温度37℃,反应时间20 min;灵敏度好,标准曲线方程为y=0.117x+0.051,定量限为10^(1)~108 copies/μL,检出限为10^(1)copies/μL,比PCR法低一个数量级且模拟样品检出结果与PCR法一致。利用建立的RPA-LFD法对猪肉样品、鸡肉样品、生猪养殖场环境样品、肉鸡养殖场环境样品、大肠杆菌分离株和弯曲肠杆菌分离株各15份中多黏菌素耐药基因mcr-1携带情况进行分析;RPA-LFD法与常规PCR法阳性样本检出率一致,共检出9份mcr-1基因阳性样品。RPA-LFD定量分析显示,阳性样品中mcr-1基因浓度在4.5×10^(2)~8.6×10^(4)copies/μL之间。结论:本研究建立的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD检测法特异性强、灵敏性高、操作简单,可广泛应用于基层检验。

利用重组酶聚合酶扩增和表面增强拉曼散射快速检测大肠杆菌耐药基因mcr-1

目的利用重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)方法和表面增强拉曼散射(surface enhanced Raman scattering,SERS)技术建立一种大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)耐药基因mcr-1的快速检测方法。方法首先,通过RPA特异性扩增大肠杆菌耐药基因mcr-1的保守序列。然后,以金纳米粒子(gold nanoparticles,Au NPs)作为SERS增强基底,利用便携式拉曼光谱仪采集样品的SERS光谱。最后,利用样品的特征SERS信号,实现大肠杆菌耐药基因mcr-1的快速、灵敏检测。结果样品位于505.5和840.9 cm^(-1)拉曼位移处的SERS信号强度与其浓度的对数值之间具有良好的线性相关关系,r^(2)分别为0.9827和0.9636。该方法的最低检测限为3.2×10^(-4)pg/μL,检测时间约为30min。结论本研究建立的RPA结合SERS方法检测耐药基因灵敏度高、用时短,为细菌耐药基因的快速检测提供了新思路。

超声、紫外及加温对质粒介导的黏菌素耐药基因mcr-1的影响

为探讨超声、紫外线照射及加温等方法对质粒介导的黏菌素耐药基因mcr-1的影响,采用四因素三水平正交试验设计,以mcr-1阳性猪场废水样品为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定mcr-1基因绝对丰度,以处理前后mcr-1基因绝对丰度变化率为指标,考察不同因素及水平对mcr-1基因含量的影响。结果表明,超声对mcr-1丰度有显著影响,其次是温度、加温时间,而紫外线照射对mcr-1的影响甚微。当依次将样品进行超声30 min、紫外线照射15 min、温度40℃作用30 min时,会使mcr-1含量比对照组高5倍多。而当超声时间为15 min、同时提高温度至50℃作用30 min和60℃作用5 min时,可使mcr-1的含量分别降低20.5%和30.6%。可见,不同因素及水平的组合可对mcr-1基因的含量造成相反的影响。因此,在实际中应筛选最佳的条件以尽可能地降低mcr-1基因的含量,减少mcr-1基因的进一步污染和扩散。

产mcr-1耐碳青霉烯类大肠埃希菌的分子特征研究

目的研究mcr基因在耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中的分布情况。方法回顾性研究2016年1月至2020年12月宁波大学附属人民医院临床分离非重复耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌454株,用PCR方法筛查所有菌株的mcr基因,用质粒接合试验分析相关耐药质粒的可接合情况,并用Nanopore三代测序技术分析相关菌株基因信息。结果仅检测到分离自同一患者的不同标本类型的两株携带碳青霉烯酶NDM-5亚型的大肠埃希菌携带mcr-1基因。基因组测序分析发现,两株细菌相差7个单核苷酸多态性(SNP),可判为同一克隆株,且均成功进行了mcr-1质粒接合试验。结论携带mcr-1耐碳青霉烯类肠杆菌细菌较少,但应注重此类细菌的控制。

黏菌素耐药基因mcr-1 TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。【方法】针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料用量、退火温度等反应条件,建立针对mcr-1基因的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性。【结果】Taq Man-MGB荧光定量PCR最佳反应体系20.00μL:Premix Ex Taq^(TM)10.00μL,Rox参比染料(50×)0.25μL,引物MCR-1F/MCR-1R(10μmol/L)各0.50μL,MCR-1-P探针(10μmol/L)0.50μL,重组质粒pMCR-1(模板)2.00μL,灭菌双蒸水6.25μL。扩增程序:95℃预变性20 s;95℃10 s,60℃20 s,进行40个循环。该检测方法能特异性扩增出mcr-1基因,其检测敏感性为2.85拷贝/μL,是常规PCR的100倍,组内和组间重复性试验的变异系数为0.37%~1.18%,均小于1.20%。采用建立的Taq Man-MGB荧光定量PCR对82株广西鸡源致病性沙门氏菌分离株进行检测,结果未发现有携带mcr-1基因的菌株。【结论】针对mcr-1基因建立的Taq Man-MGB荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于临床筛查mcr-1基因,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。

多黏菌素耐药基因mcr-1重组酶介导扩增方法的建立及应用

根据多黏菌素耐药基因mcr-1的保守序列,设计合成一对重组酶介导扩增方法(RAA)特异性引物和一条FAM标记的荧光探针,优化扩增条件,建立了检测多黏菌素耐药基因mcr-1的RAA方法,验证其特异性和敏感性,并应用于临床检测。结果显示,建立的RAA方法只需21 min就能出结果,能特异性地检测多黏菌素耐药基因mcr-1,最低能检测出10~2的mcr-1阳性质粒拷贝数,也可很好地检测出临床样品中的mcr-1基因。4株临床分离大肠埃希氏菌株样品,有2株mcr-1基因阳性,2株为mcr-1基因阴性。

肠杆菌科细菌mcr-1基因筛查及其与多黏菌素耐药表型的相关性

目的筛查沈阳地区肠杆菌科细菌mcr-1基因并进行分析,明确本地区mcr-1基因在肠杆菌科细菌中的携带率,携带mcr-1基因菌株的流行情况以及对多黏菌素的耐药情况。方法收集沈阳地区5家三甲医院2013年至2015年临床分离的肠杆菌科细菌共计2 680株,采用PCR方法筛查mcr-1基因,结果阳性菌株用Sanger测序方法进行验证;用脉冲场凝胶电泳检测携带mcr-1基因的肠杆菌科细菌的同源性。采用微量肉汤稀释法进行多黏菌素的药敏试验。结果沈阳地区2 680株肠杆菌科细菌携带mcr-1基因者共26株(0.97%),其中大肠埃希菌20株(1.4%)、肺炎克雷伯菌6株(0.8%)。携带mcr-1基因的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对多黏菌素的耐药率分别为65%(13/20)和83.3%(5/6),不敏感率为95%(19/20)和100%(20/20);对照组的40株大肠埃希菌和12株肺炎克雷伯菌均对多黏菌素敏感。中国医科大学附属第一医院携带mcr-1基因的19株大肠埃希菌的脉冲场凝胶电泳结果为无关,不具有同源性。结论沈阳地区发现了少量携带mcr-1基因的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌;携带mcr-1基因与多黏菌素耐药密切相关;本地区携带mcr-1基因的肠杆菌科细菌未出现医院感染的爆发流行。

福建省猪源多黏菌素耐药基因mcr-1阳性细菌的耐药特性及分布特征

【目的】了解福建省猪源mcr-1基因阳性细菌的流行性、耐药特性及分布特征。【方法】从福建省7个地市的21个猪场采集313份粪便样本,应用PCR方法筛选、分离和鉴定mcr-1基因阳性细菌;采用K-B琼脂扩散试验进行药敏检测,分析mcr-1基因阳性细菌的耐药性,并使用PCR方法分析其耐药表型;进一步采用多位点序列分型(MLST)方法鉴定mcr-1基因阳性大肠杆菌的类型,使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析方法对mcr-1阳性大肠杆菌进行聚类分析,探明其分布特征和亲缘关系。【结果】从313份猪粪便中共分离获得43株mcr-1基因阳性细菌,其中大肠杆菌39株。耐药性结果显示,分离菌株对磺胺甲基异恶唑、氟苯尼考、链霉素、强力霉素、恩诺沙星、新霉素、阿莫西林、头孢噻肟、林可-壮观、亚胺培南、呋喃妥因、利奈唑胺和替加环素的耐药率分别为90.1%,83.7%,74.4%,67.4%,67.4%,58.1%,53.5%,39.5%,34.9%,11.6%,4.6%,0和0。磺胺类耐药基因中的sul1、sul2和sul3基因检出率较高,分别达到81.4%,90.7%和74.4%;喹诺酮类耐药基因中仅有qnrS和aac(6′)-Ib-cr被检出,其检出率分别为51.2%和30.2%;氯霉素类耐药基因中Cat2和cmlA基因的检出率较高,分别达到86.0%和74.4%;氟苯尼考耐药基因(floR)的检出率为83.7%;金属β-内酰胺酶耐药基因(NDM-1)的检出率为23.2%;多药耐药基因(cfr)的检出率为7.0%;而替加环素耐药基因(tet(X))未被检出。39株mcr-1基因阳性大肠杆菌除了4株不能分型外,其他35株共分为19个ST型,具有高度多样性,其中ST10为优势型,共有9株菌株。PFGE图谱显示,39株mcr-1基因阳性大肠杆菌共获得30种PFGE谱型,具有多态性特征,分为6组克隆群。【结论】福建猪源mcr-1基因阳性细菌主要为大肠杆菌,少部分为肠杆菌科其他菌株,且分离菌株具有明显的多重耐药性;mcr-1基因阳性大肠杆菌在地域分布上具有多态性和高度多样性特点。

质粒介导的黏菌素耐药基因mcr-1研究进展

mcr-1基因是迄今为止国际上首次发现的质粒介导的黏菌素耐药基因,可介导肠杆菌科细菌对多粘菌素类药物产生耐药并可通过质粒进行水平转移。最新研究表明该基因已通过Inc I2、Inc X4和Inc HI2等流行性质粒以及可移动元件,在全球35个不同国家和地区的人、动物和环境源多种肠杆菌中广泛传播。这些研究对于深入了解mcr-1基因介导的黏菌素耐药和传播机制、全球流行分布特征奠定了基础,丰富了耐药性形成理论。文章主要介绍了不同来源肠杆菌科细菌中mcr-1的分布流行情况、耐药和传播机制、基因环境等方面的研究进展,探讨了其临床风险性以及后续应对措施,以期为相关科研人员和临床工作者提供参考,共同应对抗生素耐药日益严峻的局面。