苹果丝裂原活化蛋白激酶MdMKK9互作蛋白筛选与验证

以红肉苹果‘黛红’和‘新疆4号’果皮和果肉为试材,构建红肉苹果cDNA文库,通过酵母双杂交及体内双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)等方法进行丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族重要成员之一的MAPK激酶9(mitogen-activated protein kinase kinase 9,MKK9)互作蛋白筛选及验证。结果表明:以红肉苹果MdMKK9为诱饵筛选红肉苹果cDNA文库,筛选测序后初步得到10个候选的互作蛋白,分析发现其功能与植物花青苷合成及逆境胁迫相关。进一步通过酵母双杂交试验验证,10个候选蛋白中只有成髓细胞瘤域蛋白质(myeloblastosis domain protein,MYB)基因家族的MYB87与MdMKK9互作。通过体内BiFC试验,进一步验证了MdMKK9与MdMYB87互作。