RNA干扰沉默mdrl基因联合阿霉素对卵巢癌耐药细胞株SKOV_3/ADM增殖的抑制作用

目的:观察RNA干扰沉默mdrl基因后化疗药物对卵巢癌耐药细胞株SKOV3 /ADM增殖的影响。方法:RT -PCR检测靶向于mdrl基因的小发夹状RNA(pshRNA -mdrl)对SKOV3 /ADM细胞内mdr1mRNA表达的影响;采用MTT法及软琼脂克隆形成实验测定pshRNA -mdrl联合化疗药物阿霉素对SKOV3 /ADM的增殖抑制作用。结果:pshRNA -mdrl能抑制SKOV3 /ADM细胞mdr1mRNA的表达,pshRNA -mdr1联合阿霉素明显抑制SKOV3 /ADM细胞的增殖。结论:靶向于mdr1的pshRNA联合阿霉素能显著抑制SKOV3 /ADM的增殖。

多药抗药基因Mdrl探针的克隆及初步应用

多药抗药基因Ｍｄｒｌ的表达水平与细胞的耐药性直接相关，检测Ｍｄｒｌ的表达水平可预测化疗的效果以及预后，用分子原位杂交的方法可检测单个细胞中Ｍｄｒｌ的表达水平．用ＰＣＲ扩增方法获得了一段特异的ＤＮＡ片段，并将其克隆到ｐＵＣ１８载体中，经ＤＮＡ序列分析证明与文献报道一致，此探针可用于临床标本的分子杂交检测．

多药耐药基因Mdr1 RNA探针的构建及初步临床应用

检测 Mdrl基因表达水平可预测白血病化疗效果 ,用原位杂交的方法可检测 Mdrl在单个细胞的表达水平。本文用Rt- PCR的方法获得了一段特异的 c DNA片段 ,将其克隆到 PGEM4Z载体中 ,经 DNA序列分析证明与文献报道一致。采用地高辛素 (DIG) RNA标记试剂盒制备反义 RNA探针 。

MDRI的siRNA干扰口腔Tca8ll3/DDP细胞表达的研究

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)对口腔鳞癌多药耐药基因mdr1(MDRI)及其表达产物P-糖蛋白(permeability-glyco-protein,P-gp)的干扰作用。方法体外构建针对MDR1的小干扰RNA,将其转染至人舌癌耐药细胞系Tca8113/DDP,采用RT-PCR法检测转染前后MDR1 m RNA的表达;采用免疫细胞化学技术比较转染前后P-gp的表达;采用MTT法检测转染前后肿瘤耐药细胞对顺铂的敏感性。结果 Tca8113/DDP细胞经MDR1-si RNA转染后48 h的转染率达最高,为71.3%;转染后mdr1 m RNA表达较对照组显著降低,降低率为68.32%,转染48 h后P-gp的表达较对照组明显降低;si RNA可显著提高Tca8113/DDP细胞对DDP的敏感性,逆转其耐药性,耐药倍数为2.05。结论 si RNA可以明显干扰口腔鳞癌MDR1及相应蛋白P-gp的表达。

利用重构pc-MDR1质粒快速诱导肝癌细胞耐药

目的 :从裸鼠原位耐药肿瘤组织中进行MDR1cDNA的全克隆和pc MDR1重组质粒的构建 ,并转染HepG2细胞 ,快速诱导其耐药 ,并筛选其抗性克隆。方法 :设计单酶切位点引物 ,利用长距离逆转录PCR(LongRT PCR)技术 ,由HepG2耐药细胞扩增MDR1cDNA ,约 3.8kb大小。将其插入至真核表达载体pcDNA3.0质粒中构建pc MDR1诱导质粒 ,使其能够在真核细胞中表达p gp蛋白。转染HepG2细胞 ,并用G4 1 8筛选出转染的细胞。结果 :成功地扩增出 3.8kb左右的MDR1cDNA片段 ,经酶切鉴定、RT PCR扩增特异片段和序列测序结果显示质粒构建初步成功 ,用G4 1 8筛选细胞耐药抗性克隆的时间约为 1 4d。结论 :从耐药肿瘤组织中进行MDR1cDNA的全克隆和pc MDR1诱导质粒的构建成功快速诱导了肝癌细胞发生耐药 。

Snail增强乳腺癌细胞MCF-7中P-gp介导的多药耐药

目的探讨乳腺癌细胞中Snail过表达与P-gp之间的关系,揭示EMT对乳腺癌细胞多药耐药的影响。方法构建Snail真核表达载体pCDNA3.1-Snail,将载体转染人乳腺癌细胞MCF-7后用阿霉素对细胞进行诱导。利用细胞毒性实验(MTT)、阿霉素外排实验对耐药细胞系的耐药状况进行评价;通过流式细胞术和Real-time PCR分别测量耐药细胞系中P-gp和MDR1 mRNA,Snail mRNA的表达。结果由细胞毒性实验和阿霉素外排实验的结果显示,MCF-7/Snail细胞经阿霉素诱导后相对耐药指数升高至109.2,细胞内荧光强度降至7.1(P<0.05);Real-time PCR显示相对于MCF-7,MCF-7/Snail细胞中的MDR1 mRNA,Snail mRNA的表达明显升高与流式细胞术显示的P-gp升高相一致。结论转染Snail真核表达载体后,MCF-7/Snail细胞的耐药性较MCF-7细胞明显升高。

多重/泛耐药鲍曼不动杆菌分子流行病学及整合子研究

目的:了解我院临床分离的38株多重/泛耐药鲍曼不动杆菌(MDR-Ab/PDR-Ab)的分子流行病学以及不同来源菌株整合子的携带情况。方法:采用经过MicroScan WalkAway-40全自动微生物分析仪鉴定的38株MDR-Ab/PDR-Ab,应用肠杆菌科基因间重复一致序列(ERIC-PCR)方法分析不动杆菌分子流行特征,并用聚合酶链式反应(PCR)方法对全部菌株的整合酶基因进行扩增。结果:38株MDR-Ab/PDR-Ab在ICU检出率最高,占55.3%;共发现7种克隆基因型,A型检出率最高,为60.5%;整合酶基因阳性菌株占73.7%(28/38)。结论:本地区MDR-Ab/PDR-Ab呈多克隆系并存,而且同一克隆系整合子在进化过程中起到很重要的作用。