食品微生物检验检测方法研究

食品微生物检验是确保食品安全的关键环节,当前面临培养基标准化、培养条件控制和分子检测技术等方面的挑战。本文分析了食品中常见致病微生物的危害性,并指出了现有检测方法的不足,如培养基质量不一、培养条件控制不精确以及分子检测技术的局限性。为提升检测效能,本文提出了建立培养基质控体系、优化培养条件参数和引入新分子检测技术等对策。通过这些措施,旨在提高食品微生物检测的准确性和效率,从而更好地保障人们的健康。

ADSCs-CM对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞神经保护作用及其机制

目的 探讨人脂肪间充质干细胞条件培养基(ADSCs-CM)对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞神经保护作用及其机制。方法 将SH-SY5Y细胞分为Ctrl组、PD组、CM组,Ctrl组置于基础培养基中培养,PD组于MPP+(1.0 mmol/L)+基础培养基中培养,CM组于MPP+(1.0 mmol/L)+ADSCs-CM培养,均培养24 h。分别使用活性氧(ROS)试剂盒、三磷酸腺苷(ATP)试剂盒、线粒体复合物Ⅰ(CⅠ)活性试剂盒检测各组SH-SY5Y细胞中ROS含量、ATP总量和线粒体CⅠ活性;使用单丹磺酰尸胺(MDC)荧光法观察各组SH-SY5Y细胞自噬率;采用Western blot方法检测各组SH-SY5Y细胞线粒体自噬相关蛋白P62、LC3的表达水平。结果 PD组与Ctrl组、CM组比较,SH-SY5Y细胞的ROS含量、ATP总量、线粒体CⅠ的活性、细胞自噬率、P62、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白相对表达量比较差异均有显著性(tLSD=3.23~12.61,P<0.05)。结论 ADSCs-CM可改善MPP+诱导的SH-SY5Y细胞中线粒体的功能障碍,其作用机制可能是通过影响自噬相关蛋白P62、LC3的表达实现的。

不同培养基及贮藏条件对山梅花属植物花粉生活力的影响

以欧洲山梅花(Philadelphus coronaries Aureus)、庆典山梅花(Philadelphus‘Galahad’)、东北山梅花(P.schrenkii Rupr.)、京山梅花(P.pekinensis Rupr.)4个山梅花植物为试材,采用正交试验方法对影响花粉生活力的3个因素(蔗糖、硼酸和培养温度)进行优化试验。结果表明:4种山梅花的花粉萌发率在种间存在差异。欧洲山梅花和庆典山梅花花粉萌发率低于京山梅花和东北山梅花。3个因素对东北山梅花花粉萌发率的影响,从大到小的顺序为硼酸、蔗糖、培养温;3个因素对其余3种山梅花花粉萌发率的影响,从大到小的顺序为蔗糖、硼酸、培养温度;培养温度在20～30℃范围内,对花粉萌发率影响不显著。依据正交试验不同组合的花粉萌发率,确定4种山梅花的最佳花粉萌发条件。在此基础上,在3种不同贮藏温度下(常温(20℃)、冷藏(3℃)和冷冻(-23℃)),对花粉生命力进行单因素对比试验,结果表明:3℃低温冷藏为4种山梅花花粉贮藏的最佳贮藏温度。

无土栽培基质电导率和pH值测定条件的研究

将无土栽培中常用的几种单一基质组成混合基质,对其电导率(EC)和pH值的测定条件进行了研究。结果表明:当样品量为10.00 g,固∶液=1∶5(W∶V),振荡时间为40 min时,其浸提液可用于无土栽培基质的EC和pH值测定。

链霉亲和素产生菌培养条件的研究

目的通过对分泌链霉亲和素 (streptavidin)的菌株L 183最佳培养条件的研究 ,为提高链霉亲和素的产量及其规模生产打下了基础。方法选用 3种种子培养基和 5种发酵培养基 ,通过检测种子菌体湿质量、间接ELISA检测发酵液中链霉亲和素的效价 ,筛选出菌体生长快的种子培养基及链霉亲和素产量高的发酵培养基。结果B号种子培养基、2 #发酵培养基最适合L 183的生长和链霉亲和素合成 ;不同菌种接种量对链霉亲和素的产量也有明显影响 ,在 140ml发酵液中 ,种子接种量为 0 .3ml,链霉亲和素产量可达 111mg/L。 结论本实验筛选的培养基价格低廉 ,且L 183生长快、链霉亲和素产量高 。

苏云金芽孢杆菌生物杀虫剂发酵生产的影响因素及其工艺选择

化学杀虫剂的长期使用给生态环境造成了严重破坏,也使害虫种群的抗药性日益提高,生物杀虫剂以其"绿色环保"的特点引起人们的广泛关注。其中,苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)制剂是目前世界上产量最大、应用最广的生物杀虫剂。它对鳞翅目、双翅目、鞘翅目、螨类等许多有害昆虫有毒杀作用,而对人类、动物和农作物无害。长期以来,人们一直致力于苏云金芽孢杆菌发酵过程的研究,以期获得高毒效的生物杀虫剂产品。本文首先对苏云金芽孢杆菌发酵生产的各种影响因素进行了综合分析,将影响因素分为培养条件和培养基组分两类,得出最佳培养条件为温度:(30±1)℃,pH:7.0±0.1,搅拌速度:400～600r·min-1,通气量:1∶0.6～1.2(发酵培养基体积与每分钟通入空气的体积之比),接种时间:对数期初;最佳培养基配比为碳氮比:8～10∶1,无机盐含量:KH2PO4或K2HPO4为0.075%～0.2%;MgSO4·7H2O为0.075%～0.3%;CaCO3为0.075%～0.15%;MnSO4·H2O、FeSO4·7H2O各为0.002%。其次,对当前研究与工业化生产中的各种发酵工艺进行了评述,总结了现有发酵工艺的优缺点。在现有研究基础上,降低培养基原料成本、改进发酵工艺和采用基因学手段构建高效工程菌株将成为未来研究热点。

培养基和培养条件对4个梨基因型试管苗生根的影响

试验以4种基因型梨试管苗为试材,在含有MS、ASH、1/2MS、1/4MS及不同IBA和蔗糖浓度的培养基上,采用前期光、暗培养各10d,然后转入有无活性碳(AC)和IBA的处理中在光照下生根。试验用L16(45)正交设计,通过生根率、平均根数、平均根长、平均株根鲜重和平均株根干重5个指标考查了基本培养基、IBA、AC以及光照对梨试管苗生根的影响。结果表明:IBA和蔗糖对于梨根的诱导是十分必要的,而在根的生长阶段IBA不是必需的;1.0～5.0mg/LIBA+5.0～15.0g/L蔗糖+0.5～1.0g/LAC组合下梨的生根率为75%～100%;前期暗培养能有效促进东方梨品种早酥梨和身不知根的发生,而对西洋梨品种巴梨和考密斯根的诱导效果较差。

纯培养拟茎点霉属真菌的产孢条件

对8种拟茎点霉纯培养下的产孢条件进行了筛选和比较.结果表明,拟茎点霉产孢的最佳培养基为苜蓿煎汁+Czapek培养基,其次为燕麦片琼脂培养基和苜蓿杆+水琼脂培养基;最适温度范围为22～25 C;最佳光照时间为每天12h(日光灯40W,与培养物问的距离约为30cm):合适的pH值范围为5.6～6.8.

炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基修复小肠黏膜急性辐射损伤

背景:间充质干细胞条件培养基被认为是干细胞移植的良好替代方案。既往研究表明,炎症因子的诱导激活能增强间充质干细胞多种生物学潜能,而正常状态的间充质干细胞可能由于免疫活性和迁徙能力不足,无法有效修复损伤组织。目的:探讨炎症预激活前后骨髓间充质干细胞条件培养基对急性辐射损伤小肠上皮治疗作用的差异。方法:分离、培养、鉴定SD幼鼠骨髓间充质干细胞,分别与正常对照和辐射损伤的小肠隐窝细胞株IEC-6在Transwell培养板中共培养24 h,预刺激的骨髓间充质干细胞继续单独培养48 h,收集到的上清液分别为正常状态间充质干细胞条件培养基(MSC-CM NOR)和辐射炎症预激活间充质干细胞条件培养基(MSC-CM IR)。将成年SD大鼠随机分为4组,正常对照组、辐射损伤组、MSC-CM NOR治疗组和MSC-CM IR治疗组,以14 Gy剂量一次性腹部局部照射制备急性小肠辐射损伤大鼠模型,模型制备后尾静脉注射和植入式胶囊渗透压泵腹腔植入联合给药。于治疗后第1,3,7天取小肠组织检测短回路电流和血清木糖水平观察小肠分泌、吸收功能变化。治疗后第3天取小肠组织行电镜观察超微结构改变,治疗后第1,3,5,7,14天取小肠组织行苏木精-伊红染色观察小肠黏膜组织学改变。记录各组大鼠生存状态及生存时间。结果与结论:输注MSC-CM IR后,大鼠小肠短回路电流差值、血清木糖水平较辐射损伤组升高,差异有显著性意义(P<0.05)。苏木精-伊红染色和电镜观察显示从治疗后第3天起MSC-CM IR组小肠黏膜病理改变明显减轻,上皮厚度、紧密连接间隙明显优于辐射损伤组。生存分析显示MSC-CM IR组生存率和平均生存时间明显改善(P<0.05),而MSC-CM NOR组的各项指标与辐射损伤组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明炎症激活状态下的骨髓间充质干细胞条件培养基可促进辐射损伤小肠结构和功能的修复。

培养基和培养条件对葡萄试管苗生根的影响

以矢荚罗莎等4种葡萄试管苗为材料，研究了蔗糖浓度、琼脂浓度、pH、光强及温度对葡萄试管苗生根的影响．结果表明：蔗糖浓度为15～20g／L对葡萄试管苗的生根最有利；pH值对试管苗平均根系数量、根粗、根长和根冠比影响显著。生根数与平均根长随pH值升高而减小，平均根粗与根冠比随pH值的增大而增大；琼脂浓度显著影响葡萄试管苗生根．随着琼脂浓度的增加，根源基产生时间延迟，平均根长和根冠比降低，而平均根粗和生根数增加；生根数在3种温度条件下无显著差异，平均根粗随温度的升高略有下降，平均根长和根冠比随培养温度的升高而增加，在35℃时降低；平均生根数、根长、根冠比和根粗均随光照强度的增强而增大．

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的 探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法 用体外培养早孕、晚孕蜕膜细胞的方法制备DCM,然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞。用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果 正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA）mRNA均有表达;而TIMP-2、纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）mRNA未见表达。早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2、MMP-9、u-PAmRNA的表达,而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕、晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达,但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论 蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2、MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡,而影响滋养细胞的侵袭能力。

林木原生质体培养研究进展

本文概述了近年来林木原生质体培养的研究进展,着重论述了不同树种和基因型、培养基、培养方法以及激素种类、浓度和配比对林木原生质体生长的影响,并针对林木原生质体培养中所存在的问题进行了较详细的讨论。

大黄鱼细菌性病原哈维氏弧菌培养特性的研究

弧菌是危害水产养殖动物的最为严重的病原之一。从患病大黄鱼肝脏分离致病的细菌哈维氏弧菌GYC1108-1为材料,对哈维氏弧菌GYC1108-1株的最佳生长条件及培养基优化进行了测定。综合考察不同的培养温度、培养时间、培养基盐度、培养基的pH值对细菌生长的影响,并采用正交实验法,对培养基配方进行优化。结果表明:不同的培养温度、培养时间、培养基盐度、培养基pH值等均会影响细菌的产量。GYC1108-1适宜生长的盐度为1%～5%、pH为5～9.5、温度为15～35℃、在培养基中添加硫酸铜、硫酸氨会明显促进生长;最佳培养条件及培养基成份为:NaCl 2%,pH8.0,温度30℃,蛋白胨1.0%、牛肉膏0.75%、CuSO_4 0.3mg/L、(NH_4)_2SO_4 0.1g/L。

草珊瑚离体不定丛芽诱导因子筛选的研究

【目的】探讨影响草珊瑚不定芽诱导的培养因素,为建立草珊瑚初代离体培养体系提供依据。【方法】以草珊瑚下胚轴诱导获得的无菌再生苗茎段为外植体,考察6-苄氨基嘌呤(6-BA)和吲哚丁酸(IBA)不同浓度配比、光照时间和强度以及温度对草珊瑚离体不定芽高频诱导的影响。【结果】6-BA和IBA组合能有效提高草珊瑚不定芽的诱导率,而高浓度的植物激素会抑制草珊瑚不定芽的生长;草珊瑚在散射光或弱直射光照射下生长势头好,暗培养或过强直射光会出现植株发黄、皱缩、甚至死亡的现象;在温度为25℃时,草珊瑚不定芽诱导率达到100%,低于25℃或高于30℃均不利于其生长。【结论】以MS培养基为基本培养基,附加2.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA,温度为25℃,采用柔弱自然散射光或低于2 000 lx直射光照射,时间少于8 h能有效促进草珊瑚离体不定芽的诱导,诱导率达82.98%。

视网膜Müller细胞条件培养基及抗VEGF对血管内皮细胞的作用

目的 :观察高糖条件下制备的视网膜 Müller细胞条件培养基 (HGMCM)及抗 VEGF对血管内皮细胞的作用。方法 :采用免疫荧光、流式细胞术和 Boyden小室迁移实验观察 HGMCM,含 wortmannin及含 VEGF单克隆抗体 HGMCM对血管内皮细胞的作用。结果 :HGMCM可促进体外培养的血管内皮细胞的增殖和迁移(14 2 .0 0± 15 .32 /视野 ) ,wortm annin、VEGF单克隆抗体可明显抑制 HGMCM诱导的血管内皮细胞的增殖和迁移(89.0 0± 9.2 8/视野 ,93.0 0± 9.6 4 /视野 ) ,使血管内皮细胞被阻滞于 G1 / S转变期 ,含 wortm ennin和 VEGF单克隆抗体 HGMCM组与 HGMCM组比较 ,差异均有显著性 (P<0 .0 1)。结论 :HGMCM诱导血管内皮细胞的增殖和迁移一部分是通过 VEGF发挥作用的 ,拮抗 VEGF的活性可抑制血管内皮细胞的增殖和迁移 ,进而抑制新生血管形成。

缺氧诱导骨髓间充质干细胞条件培养基体外修复辐射损伤小肠上皮细胞变化

背景:间充质干细胞条件培养基含有丰富的间充质干细胞旁分泌物质,被认为是干细胞移植理想的替代方案。然而,正常状态的间充质干细胞条件培养基可能由于旁分泌活性不足,常无法有效修复损伤组织。目的:观察缺氧诱导的骨髓间充质干细胞条件培养基(MSC-CM^(Hyp))对大鼠小肠隐窝上皮IEC-6细胞辐射损伤后增殖和凋亡的影响,并进一步探讨其修复小肠上皮细胞的旁分泌机制。方法:IEC-6细胞接受10 Gy X射线照射后分别加入MSC-CM^(Hyp)、正常培养的骨髓间充质干细胞条件培养基(MSC-CM^(Nor)组)及DMEM-F12培养基(DMEM-F12组)培养。结果与结论:锥虫蓝染色、流式细胞仪、Western blot检测结果显示,与DMEM-F12组相比,MSC-CM^(Hyp)组IEC-6细胞存活数和增殖率明显增加(P<0.05),凋亡率和凋亡相关因子Caspases-3/8表达明显下降(P<0.05),而MSC-CM^(Nor)组的各项指标与DMEM-F12组比较差异无显著性意义(P>0.05)。EILSA检测结果显示,与MSC-CM^(Nor)相比,MSC-CM^(Hyp)中血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、和白细胞介素10的含量明显升高(P<0.05)。结果表明,缺氧诱导的骨髓间充质干细胞条件培养基中细胞因子含量明显升高,显著促进辐射损伤IEC-6细胞的增殖,同时下调细胞凋亡信号,从而进一步促进损伤细胞的修复。

灵芝液体发酵产漆酶最佳培养基和培养条件研究

目的研究灵芝液体发酵产漆酶的最佳培养基和培养条件。方法以灵芝S3号菌株为试验材料,以灵芝漆酶活性为衡量指标,通过正交试验分别对灵芝液体发酵培养基及培养条件进行优化筛选。结果筛出最佳培养基组成为葡萄糖30g/L、棉花0.2%、磷酸氢二铵0.66g/L、干酪素0.5%、聚山梨酯-800.15%;优化培养条件为初始pH5.5、装液量75mL、接种量12.5%、菌龄5×24h、培养时间9×24h。结论优化培养基及培养条件后,发酵液中灵芝漆酶活性显著提高。

脂肪间充质干细胞条件培养基制备温敏凝胶外用治疗皮肤烫伤

背景:有研究显示脂肪干细胞参与烫伤后皮肤组织的修复,但利用脂肪干细胞分泌物制备水凝胶,并治疗皮肤烫伤的研究尚未见报道。目的:分析人脂肪干细胞条件培养基水凝胶外用治疗小鼠皮肤烫伤模型的疗效。方法:采用酶解联合贴壁培养法,从脂肪组织培养获得脂肪干细胞并进行鉴定。取稳定增殖期细胞,收集其条件培养基,加入壳聚糖、甘露醇、β-甘油磷酸钠和透明质酸等制备温敏水凝胶,同时用新鲜脂肪干细胞完全培养基制备水凝胶。24只C57BL/6小鼠背部脱毛后用95℃铝块烫伤10 s快速建立3度皮肤烫伤模型,右侧以脂肪干细胞条件培养基水凝胶每天涂抹2次;左侧使用脂肪干细胞新鲜培养基水凝胶每天涂抹2次,连续涂抹7 d,观察愈合时间与愈合进程,计算愈合率,在烫伤后第4,14,28天取材进行苏木精-伊红染色观察组织病理学变化。结果与结论:①人脂肪间充质干细胞为成纤维状,增殖旺盛,平均倍增时间为55 h,可被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞,高表达CD29、CD44、CD90和CD105,低表达CD31和CD34,证明其符合间充质干细胞的标准;②用人脂肪间充质干细胞条件培养基制备的温敏水凝胶在4-20℃呈现为清凉透明的黏稠液体,放入37℃15 min变为半固态凝胶;③95℃铝块烫伤小鼠表皮、真皮及皮下脂肪和肌肉组织的正常结构完全破坏,符合严重的3度烫伤标准,伤口面积均大致为3 cm^2;④在修复过程中发现,与新鲜培养基水凝胶对照组相比,脂肪干细胞条件培养基水凝胶组创口愈合时间短,伤口整洁,瘢痕增生少,创面组织结构恢复好;⑤脂肪干细胞条件培养基水凝胶组炎症浸润深度、炎症浸润细胞密度、肉芽组织厚度、成纤维细胞密度、新生血管密度和表皮厚度等指标显著好于新鲜培养基水凝胶组,差异有显著性意义(P<0.05);⑥以上结果表明,人脂肪间充质干细胞条件培养基水凝胶可有效促进烫伤皮肤伤口愈合,提高再生皮肤质量。

结核分枝杆菌在不同pH值液体培养基中对吡嗪酰胺敏感度的研究

目的研究结核分枝杆菌在不同pH值液体培养基中对吡嗪酰胺（PzA）敏感度的影响，同时比较不同pH值下结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的敏感度与测序结果的一致率，探讨最适合对吡嗪酰胺进行药物敏感性试验（简称“药敏试验”）的pH值。方法本研究采用简单随机抽样法中的直接抽选法，从2007年全国结核病耐药性基线调查的3929株结核分枝杆菌菌株中抽取348株；采用BACTECMGIT960系统在液体培养基pH值为5．3、5．5、5．7、5．9和6．1时，分别检测结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的敏感度；同时对吡嗪酰胺耐药的结核分枝杆菌相关基因pncA和rpsA进行测序，分析其突变特征；采用卡方检验统计2种方法检测吡嗪酰胺耐药率的差别，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果在348株结核分枝杆菌中，用MGITTM960PZA试剂盒（pH值为5．9）检测的吡嗪酰胺总耐药率为14．4％（50／348），DNA测序结果有43株耐药，其中有30（69．8％）株检测到吡嗪酰胺药物耐药相关基因加矾发生突变，1株（2．3％）耐药分离株仅在rpsA有突变。在液体培养基pH值为6．1、5．9、5．7、5．5和5．3时，DNA测序结果与所有菌株表型药敏试验结果的一致率分别为94．8％（330／348）、95．1％（331／348）、96．8％（337／348）、95．2％（316／332）和93．5％（287／307）。并且pH值为5．7时2种方法的耐药一致率（92．1％，35／38）明显高于pH值为5．9（76．0％，38／50）时（χ2=3．961，P=0．047）；而pH值为6．1（72．7％，40／55）、pH值为5．5（93．3％，28／30）和pH值为5．3（95．0％，19／20）时的耐药一致率与pH值为5．9时的耐药一致率相比，差异无统计学意义（χ2=0．147，P=0．702；χ2=．366，P=0．545；χ2=410，P=0．065）。结论液体培养基pH值为5．7时，结核分枝杆菌对吡嗪酰胺耐药与遗传突变检测结果有较好的相关性。

抗大豆尖孢镰刀菌新型固体生物农药的研制

以抑菌圈直径为指标,采用牛津杯法测定青霉TS67菌株的胞外代谢产物对大豆尖孢镰刀菌(Fusari-um oxysporum)的抑制活性,对该菌株的固体培养基成分及其配比进行优化,同时对pH、温度、含水量、接种量及最佳培养周期等生长条件进行测定.实验结果表明:青霉TS67菌株的最佳固体培养基配方为麸皮6g,黄豆粉3g,KH2PO40.3g,KCl 14.5mg,MgSO4.7H2O 14.5mg,FeSO4.7H2O 0.29mg,水29mL;将1.3mL 2×106 CFU/mL的青霉TS67菌株孢子悬液接种于40g最佳培养基上,pH6～7,28℃进行固体发酵培养96h,获得含有菌丝、孢子、代谢产物的固体培养物,该培养物的磷酸缓冲液浸提物能够有效抑制大豆尖孢镰刀菌的生长.