MecA基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素耐药中的作用

目的:探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中MecA基因表达水平对β-内酰胺类抗生素耐药的机制与作用。方法:利用头孢西丁纸片法筛选MRSA,提取MRSA细菌RNA,反转录成cDNA,实时荧光PCR检测MecA基因的表达水平;琼脂稀释法检测MRSA对头孢西丁、苯唑西林、万古霉素、利奈唑胺的最低抑菌浓度。结果:40株MRSA分为低水平耐药组(12株)、中水平耐药组(15株)、高水平耐药组(13株)。MecA基因的表达水平在MRSA低水平耐药组、中水平耐药组、高水平耐药组分别为58.87±30.30,363.37±200.05,1257.72±446.63,MRSA对头孢西丁、苯唑西林的耐药率为100.0%,没有检测到对万古霉素、利奈唑胺耐药的MRSA,但40株MRSA万古霉素的90%的细菌被抑制的浓度(MIC90)为2.0μg/mL。结论:MecA基因的表达水平可能与MRSA对β-内酰胺类抗生素耐药程度相关。

MRSA中mecA及femB基因的检测与耐药相关性

研究femB、mecA基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的表达与耐药的关系。运用PCR对MRSA的femB、mecA基因进行检测,MRSA耐药检测采用头孢西丁纸片法。40株金黄色葡萄球菌(下简称金葡菌)通过头孢西丁纸片法,检出30株耐头孢西丁的菌株,通过PCR检测这40株金葡菌mecA基因,30株MRSA全部为阳性,femB基因在30株MRSA中全部表达,而甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)的未表达。结果可见,PCR能快速准确地鉴定MRSA,mecA基因是MRSA的耐药基因,femB基因是MRSA的耐药相关基因。

mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的应用m ecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(m eth ic illin res istan tstaphy lococcus aureus,M RSA)。方法临床分离的70株金黄色葡萄球菌,应用m ecA基因PCR扩增法鉴定M RSA,并与苯唑西林纸片扩散法进行比较。结果70株金黄色葡萄球菌用PCR扩增法和纸片扩散法有6株鉴定有差异,4株m ecA基因阳性而纸片扩散法鉴定为敏感,1株m ecA基因阳性纸片扩散法鉴定为临界耐药,1株m ecA基因阴性却表现为苯唑西林耐药,2种方法符合率为91.43%。结论m ecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定M RSA,特别是对隐匿型或低水平耐药菌株的检出有重要的价值。

金黄色葡萄球菌中mecA基因的检测及其耐药相关性

目的探讨mecA基因在临床分离金黄色葡萄球菌(SA)中的表达水平与耐药的关系。方法收集临床分离的SA菌株186株,采用纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验,并提取DNA,运用PCR扩增mecA基因。结果耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率为30.65%(57/186),其中56株MRSA和129株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)中有10株检出mecA基因阳性;除对万古霉素、利奈唑胺敏感外,MRSA对其他抗菌药物耐药率均高于MSSA,携带mecA基因的菌株抗菌药物耐药率高于不携带mecA基因的菌株,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SA临床分离菌株中含mecA基因的菌株对多种抗菌药物耐药,可见mecA基因在SA的耐药机制中发挥着重要作用。

浙江、江西地区MRSA耐mecA、qacA/B基因检测

目的了解浙江、江西地区临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)中mecA基因及qacA/B基因存在状况. 方法在2004年1～12月间分别从浙江、江西地区住院患者中分离到42株和31株MRSA,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析技术检测mecA基因及qacA/B基因. 结果 73株MRSA中mecA基因均为阳性(100%),qacA/B基因34株(46.6%)阳性,其中浙江地区qacA/B基因阳性率为52.4%,江西地区为38.7%. 结论浙江、江西地区临床分离的MRSA中mecA基因和qacA/B基因携带率很高或较高.

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因的实时荧光定量PCR方法学评价

目的 评估实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测临床标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）MecA耐药基因的价值。方法 选择该院2013年6~12月125份临床标本,包括血液40份,痰液52份,创面分泌物33份进行FQ-PCR检测和细菌鉴定,分析结果符合率,以检测FQ-PCR的灵敏度及特异性。结果 FQ-PCR的灵敏度为0.159pg/μL,检测经细菌培养鉴定的菌株,特异性达到100%,与临床标本结果符合率为97.6%。结论 FQ-PCR检测MRSA的MecA基因更加方便、快速,且灵敏度和特异性等性能指标均比较理想,与细菌鉴定结果符合率较高,适合临床广泛应用。

医院获得性金黄色葡萄球菌mecA基因的表达及耐药性分析

目的分析医院获得性金黄色葡萄球菌(HA-SA)中mecA基因的表达和耐药性。方法收集2015年5月至2016年8月在郑州大学第五附属医院治疗的HA-SA肺炎患者中分离出的金黄色葡萄球菌(SA),应用聚合酶链反应(PCR)对HA-SA进行mecA基因扩增,采用纸片扩散法(K-B法)测定12种抗菌药物的耐药情况。结果分离出HA-SA 70株,其中医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA) 57株,mecA基因均阳性;医院获得性甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(HA-MSSA) 13株,有3株携带mecA基因。HA-MRSA和HA-MSSA对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺均敏感,对复方新诺明耐药率相近,分别为61.4%和51.6%。对青霉素、苯唑西林、头孢西丁、利福平、庆大霉素、克林霉素、红霉素、左氧氟沙星耐药率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MRSA在HA-SA肺炎患者中发病率高。HA-MRSA的耐药性高于HA-MSSA。mecA基因在HA-SA对β-内酰胺类药物耐药中起主要作用。

安徽池州地区金黄色葡萄球菌MecA基因的检测及耐药性分析

目的利用PCR技术扩增池州地区金黄色葡萄球菌(SA)mecA基因,同时分析其耐药性并探讨两者的关联。方法临床各科室送检标本中分离出79株金黄色葡萄球菌,应用西门子Microscan-walkway 96plus鉴定及药敏分析仪进行常规药敏检测,计算耐药率;采用苯唑西林MIC法、头孢西丁MIC法筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA);同时设计特异性引物,采用聚合酶链式反应(PCR)检测Mec A基因,用凝胶成像仪观察结果。结果 79株金黄色葡萄球菌中苯唑西林MIC法阳性33株,头孢西丁MIC法36株,mecA基因扩增阳性36株,MRSA检出率为45.57%(扩增法);发现3株苯唑西林敏感的MRSA。mecA(+)与mecA(–)均未发现万古霉素、利奈唑胺、达托霉素耐药菌株,但对青霉素都高度耐药,两者的差异无统计学意义(P>0.05);MSSA对庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、红霉素、四环素等耐药率均低于MRSA,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论池州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌已较为常见,其主要耐药机制为携带mecA基因,PCR扩增阳性菌株耐药性明显高于阴性,两者差异有统计学意义。已出现苯唑西林敏感的MRSA(OS-MRSA)。

多重PCR检测临床分离金黄色葡萄球菌lukS/F-PV和mecA基因

目的建立一种新的多重PCR方法,检测临床分离金葡菌的杀白细胞素毒力基因(lukS/F-PV)和甲氧西林耐药基因(mecA)。方法收集我院2006年1—12月从临床多种标本中分离鉴定的不重复金葡菌,应用多重PCR技术,优化反应条件,同时扩增葡萄球菌属特异性基因16S rRNA、金葡菌种特异性基因nuc、lukS/F-PV基因和mecA基因,扩增产物经凝胶成像系统分析。结果217株金葡菌经多重PCR检测,31株是16S rRNA+nuc+lukS/F-PV+mecA基因型,3株是16SrRNA+nuc+lukS/F-PV基因型,135株是16S rRNA+nuc+mecA基因型,40株是16S rRNA+nuc基因型,其中5株仅扩增出16S rRNA基因,3株仅扩增出nuc基因。lukS/F-PV基因和mecA基因测序显示与GenBank中的已有序列具有高度同源性,其阳性率分别为15.7%(34/217)和76.5%(166/217);34株lukS/F-PV基因阳性的分离株中,31株为MRSA,占91.2%(31/34)。结论本方法适用于快速检测和鉴定产杀白细胞素MRSA,lukS/F-PV基因阳性的菌株以MRSA为主,应加强监控。

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。

MecA、Nuc基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测中的应用

目的通过对180株金黄色葡萄球菌临床分离株MecA、Nuc基因的检测,以期选择出一种适合临床的并能简便、快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的方法。方法细菌鉴定及药敏采用全自动细菌鉴定和药敏分析仪。MecA、Nuc基因检测采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)法。结果 FQ-PCR对180株金黄色葡萄球菌MecA、Nuc基因检出率为75.0%,全自动细菌鉴定和药敏分析仪对180株金黄色葡萄球菌的MRSA检出率为72.8%,2种检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。全自动细菌鉴定和药敏分析仪对MRSA的检测正确率为94.8%。结论 FQ-PCR检测MRSA正确率高,只需要1~2 h即可完成。该方法快速、简便、准确,值得推广应用。

食品中金黄色葡萄球菌耐药性和mecA基因的检测分析

目的分析食品中金黄色葡萄球菌耐药性和mecA基因的检测情况。方法选取2018年1月至12月四川省阿坝州疾病预防控制中心收集的94株金黄色葡球菌菌株开展研究,来源为送检食品样本中分离所得。开展金黄色葡球菌耐药性以及mecA基因检测,分析结果。结果MRSA共计66株,64株存在mecA基因。所占比为96.97%。2株MRSA经分离后未能测定出mecA基因。MSSA共计28株。有6株携带mecA基因。分别为耐药E类2株,耐药F类4株。敏感性较高的A、B、C、D菌株没有检测到mecA基因。对MSSA以及MRSA携带mecA基因数据开展X2检验,组间数据存在明显差异(P<0.05)。MSSA内共计6类药物敏感型,A类4株MSSA对全部抗菌药敏感。66株MRSA分为GHI三类。对于左氧氟沙星、万古霉素、替考拉宁以及万古霉素敏感2株。对于万古霉素、替考拉宁敏感共计4株。仅有6株除万古霉素以及替考拉宁外药物敏感。结论绝大部分的MRSA均带有mecA基因。该类型基因在金黄色葡球菌耐药机制内发挥了不可替代的效用。且携带该类型基因的MSSA耐药性比不携带该类型基因MSSA更为严重。

便携式血糖仪对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的灵敏检测方法研究

本实验利用血糖仪构建了一种基于蔗糖酶修饰的纳米金功能化树状大分子对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的灵敏检测新方法。当靶基因存在时,其与捕获核酸探针特异性结合,释放出带蔗糖酶的信号分子复合物,经磁分离后,上清液中的蔗糖酶催化底物蔗糖,产生可检测的葡萄糖信号,从而实现血糖仪对mecA基因的定量检测。该检测方法的线性范围是0.5pM到1nM,检测限为0.26pM,优于一般的基因检测方法。结果表明,该方法在疾病诊断方面具有潜在的应用价值。

苯唑西林和头孢西丁敏感金黄色葡萄球菌MecA基因检测研究

目的:获得本地区苯唑西林和头孢西丁敏感金黄色葡萄球菌(SA)MecA基因携带率并分析其分子流行病学特征,为临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的诊治提供循证学依据。方法:回顾性分析深圳大学附属南山医院微生物室2010年1月至2016年12月分离出的435株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)的临床药敏特点,总结其对苯唑西林和头孢西丁的耐药情况。应用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增MecA基因,红霉素耐药基因ermA、ermB和ermC,扩增SA7对管家基因(arcc、aroe、glpf、gmk、pta、tpi、yqiL)。结果:在435株MSSA中发现2株对苯唑西林和头孢西丁敏感但MecA基因阳性的MRSA菌株,其多基因座顺序分型(MLST)分别为ST239和ST2631,标本均来源于痰液。ermA,ermB和ermC基因除ermA在菌株CHS172中检测阳性,其余均为阴性。结论:临床药敏实验提示苯唑西林和头孢西丁敏感的MSSA有必要进一步检测MecA基因,以验证耐药表型和指导临床治疗方案确定。

宁夏食源性金黄色葡萄球菌耐药特征研究及mecA基因检测

目的对宁夏食品安全风险监测分离到的金黄色葡萄球菌进行mecA基因检测和耐药性分析,了解宁夏地区近10年mecA分布特征和耐药趋势,为有效防控该菌蔓延和感染提供理论依据和技术参考。方法收集2011—2021年宁夏食品安全风险监测分离到的金黄色葡萄球菌195株,用多重荧光PCR法同时检测nuc和mecA基因,采用微量肉汤稀释法检测其对15种常用抗生素的药物敏感性。结果195株金黄色葡萄球菌中有19株携带mecA基因,检出率为9.74%。对青霉素完全耐药,耐药率达100.00%,其次为红霉素和克林霉素,耐药率分别为62.56%和46.67%。敏感率最高的药物是替考拉宁和利福平,敏感率均达到100.00%,其次为达托霉素、利奈唑胺、万古霉素和复方新诺明。195株金黄色葡萄球菌共形成40种耐药表型谱,多重耐药菌株共146株。结论2011—2021年宁夏地区食源性金黄色葡萄球菌中均检出mecA基因,应继续加强监测耐药变化,同时关注万古霉素耐药情况,积极采取有效防控措施。

犬鼻腔金黄色葡萄球菌的分离及耐药性监测

旨在了解犬源金黄色葡萄球菌的耐药现状。采集动物医院就诊犬鼻拭子样本,对金黄色葡萄球菌进行分离、纯化及鉴定,并进行甲氧西林耐药基因mecA和耐药表型检测,同时分析影响携带率的相关因素。结果:共采集229份样品,其中犬鼻腔金黄色葡萄球菌携带率为35.4%(81/229);该菌mecA基因检出率为23.5%(19/81)。影响金黄色葡萄球菌携带率的因素有性别和年龄,未发现影响该菌携带mecA基因的因素。金黄色葡萄球菌对青霉素G耐药最严重(耐药率77.78%),对复方新诺明耐药较严重(耐药率为60.49%),对其余药物呈不同水平耐药性(耐药率6.17%~23.46%)。以上结果说明,金黄色葡萄球菌在犬中较为流行,犬年龄和性别是影响其携带率的重要因素,同时这些菌株已呈较高耐药性,且存在mecA耐药基因,应加强对该菌流行情况及对兽医临床中抗生素使用的监测。

金黄色葡萄球菌耐药机制的研究

目的探讨金黄色葡萄球菌的耐药性及耐药机制。方法按NCCLS推荐的琼脂平皿对倍稀释法测定分离鉴定的198株金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药性(MIC值);用Nitrocephin纸片法测定各菌株产酶情况,统计对苯唑西林不同耐药水平的金黄色葡萄球菌产酶率并分析其耐药水平和产酶率的相关关系;PCR测定各菌株含mecA基因情况。结果198株金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药率为64.65%;128株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中,高耐菌株为118株(92.19%),低耐株为10株(7.81%)。敏感株产酶率为58.57%(41株),高耐株产酶率53.39%(63株),低耐株产酶率40.00%(4株),苯唑西林敏感株与高耐株之间产β-内酰胺酶的差别有统计学意义,前者高于后者;含mecA基因的高耐株占95.76%(113/118)、低耐株占60.00%(6/10)、敏感株占10.00%(7/70),高耐株与敏感株含mecA基因的差别有统计学意义,前者高于后者。结论金黄色葡萄球菌耐药机制主要是产β-内酰胺酶和mecA基因的表达。

牛源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测

【目的】了解内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】采用K-B纸片扩散法,检测分离自内蒙古地区38株金黄色葡萄球菌对17种药物的敏感性,同时用琼脂稀释法检测苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);再用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林盐琼脂筛选法和PCR方法扩增mecA耐药基因对分离菌株进行全面MRSA检测。【结果】分离菌株对每种抗生素都有不同程度抗性,对氨苄西林、头孢拉丁、青霉素、复方新诺明、新生霉素和链霉素的耐药率都高于45%,而对氧氟沙星、丁胺卡那霉素、万古霉素、环丙沙星、庆大霉素和头孢唑林的敏感性高于90%,2株细菌的万古霉素MIC≥16μg.mL-1;其中8株细菌的苯唑西林MIC≥8μg.mL-1,而其它菌株的苯唑西林MIC≤2μg.mL-1;分离菌株多重耐药情况严重,耐受3种及3种以上药物的菌株占84.21%,其中4株细菌能同时耐受9种不同抗菌药物;16(42.11%)株细菌被检测携带mecA耐药基因,而仅有其中7株的苯唑西林MIC≥4μg.mL-1;头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐琼脂筛选法分别检出7株、10株和7株表型为MRSA的菌株。【结论】分离菌株的耐药性和多重耐药现象较为严重,被调查地区奶牛场中已经存在MRSA和OS-MRSA感染情况,且感染率高。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的流行病学研究

目的了解某院患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的感染和医院环境中MRSA的污染情况，研究临床和相应环境标本中MRSA的同源性，寻找MRSA医院感染的传染源及传播途径。方法采用Vitek-2细菌鉴定系统鉴定金黄色葡萄球菌；以头孢西丁纸片琼脂扩散法和mecA基因聚合酶链反应（PCR）鉴定MRSA随机扩增多态性DNA（RAPD）技术进行同源性分析。结果临床标本分离的金黄色葡萄球菌中，MRSA占58．54％（24／41）；环境标本分离的金黄色葡萄球菌中，MRSA占38．10％（16／42）。MRSA菌株经RAPD扩增后均可见数量不等（4～6条）的条带，分型率达100％。经聚类分析，24株临床MRSA菌株分为4型，其中以RAPDⅠ型为主（14株）；16株环境MRSA菌株分为3型，亦以RAPDⅠ型为主（13株）。烧伤科与神经外科各有4例患者及其周围环境分离出同源菌。结论该院临床标本及医院环境标本中MRSA分离率较高，RAPDⅠ型MRSA为其主要流行株且存在RAPDⅠ型MRSA菌株克隆传播。外源性途径是MRSA医院感染的主要来源。

成都地区儿童金黄色葡萄球菌定植/感染分离株的流行病学研究

目的调查成都地区儿童金黄色葡萄球菌定植/感染分离株的流行病学特征。方法 2004年1月—2009年4月,以成都市健康儿童、门诊呼吸道感染患儿和金黄色葡萄球菌感染住院患儿为研究对象,采集鼻拭子或感染部位标本进行培养,并对分离的金黄色葡萄球菌进行药敏实验,应用PCR方法检测菌株的PVL毒力基因和mecA耐药基因,对菌株进行多位点序列分析(MLST)。结果培养分离金黄色葡萄球菌定植株174株、感染株51株。门诊呼吸道感染患儿金葡菌的多重耐药率分别为,定植株59.3%,感染株52.9%;PVL基因阳性率分别为,定植株55.6%(15/27),感染株80.4%(41/51);mecA耐药基因阳性率分别为,定植株11.1%(3/27),感染株62.7%(32/51)。对健康儿童定植株以及感染株进行MLST分析,共发现33个ST类型,定植株以ST121、ST59和ST398为主,感染株以ST121、ST88和ST398为主;这些菌株属于15个克隆类型,以CC121、CC59和CC398为主。结论成都地区儿童金黄色葡萄球菌定植和感染分离株具有较高的PVL毒力基因和mecA耐药基因携带率,具有明显不同于其他地区的独特的遗传背景。