Metabolomic Studies Using High Performance Liquid Chromatography and Tandem Mass Spectrometry to Discover Quality Markers for Oriental Beauty (Dongfang Meiren) Tea

In this study, a high-performance liquid chromatograph and an electrospray ionization (ESI) triple quadrupole mass spectrometry (TQ MS) detector were used to scan Oriental Beauty tea of different grades and prices. Principle component analysis (PCA) of the profiling data was performed for pattern recognition, clearly showing that the proposed MS profiling method was able to classify Oriental Beauty tea into different grades. The component mass ions primarily responsible for the separation were selected with high loading strength in the PCA for subsequent identification with tandem mass (MS/MS). Caffeine, citrate and salicylate were verified, whereas certain other compounds remained ambiguous. Regression analysis considering caffeine, citrate and salicylate showed a linear relationship between the prices of the Oriental Beauty tea with an adjusted R2 of 0.84. If all the selected marker ions (in addition to caffeine, citrate and salicylate) could have been identified and incorporated into regression analysis, a stronger relationship could have been confirmed. These results suggest that metabolomics can facilitate the determination of real markers in the quality control of Oriental Beauty tea, and may lead to the further application of metabolomics in other food quality controls.

美仁牦牛MYL 9基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究

【目的】克隆美仁牦牛肌球蛋白轻链9(myosin light chain 9,MYL9)基因CDS区并对其进行生物信息学分析,检测MYL 9基因的组织表达特征,为探究该基因功能提供一定理论依据。【方法】以美仁牦牛肌肉组织cDNA为模板,利用PCR扩增并克隆美仁牦牛CDS区序列,与其他物种进行相似性比对及系统进化树构建;通过在线软件对MYL9蛋白进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测MYL 9基因在美仁牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪和睾丸组织中表达情况。【结果】美仁牦牛MYL 9基因CDS区长516 bp,共编码171个氨基酸。系统进化树结果显示,美仁牦牛与野牦牛、普通牛亲缘关系最近,与高山倭蛙亲缘关系最远。MYL9蛋白分子式为C 858 H 1324 N 234 O 274 S 12,原子数为2702,理论等电点为4.85,不稳定系数和总平均亲水性分别为37.22和―0.772,属于稳定亲水性蛋白。MYL9蛋白无信号肽和跨膜螺旋结构,属于非分泌性蛋白;主要定位于线粒体、细胞核、细胞质中,具有17个特异性磷酸化位点。MYL9蛋白二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、β-折叠和延伸链构成,三级结构预测结果与二级结构一致。实时荧光定量PCR结果显示,MYL 9基因在美仁牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪和睾丸组织中均表达,且肝脏和肌肉组织中表达量显著高于其他组织(P<0.05)。【结论】本研究成功克隆美仁牦牛MYL 9基因CDS区,探究了MYL 9基因的生物学功能及组织表达特征,研究结果为进一步探究牦牛MYL 9基因功能特征提供了参考。

牦牛DJ-1基因克隆、生物信息学及组织表达分析

为了研究牦牛DJ-1基因的结构及功能,为后续深入研究牦牛DJ-1基因的生物学功能提供了重要的理论依据。以美仁牦牛脂肪组织cDNA为模板,利用RT-PCR克隆牦牛DJ-1基因的编码区序列(CDS),并且利用基因序列进行生物信息学分析,预测结构域及蛋白质理化性质等,再利用RT-qPCR技术进行组织表达分析。结果表明,美仁牦牛DJ-1基因的CDS区全长570 bp,共编码189个氨基酸;牦牛DJ-1结构域预测显示,在DJ-1氨基酸序列的29—168位中有1个含有Pfam的PfpI结构域;通过对DJ-1蛋白结构和功能进行预测,结果显示,无跨膜结构且无信号肽区域,分子质量20.03531 ku,原子总数2870,理论等电点6.84,不稳定系数28.37,表示为稳定的蛋白质;脂肪系数101.11,总平均亲水系数-0.004,为亲水蛋白,共有11个磷酸化位点;同时,亚细胞定位预测结果表明,美仁牦牛DJ-1蛋白主要分布于细胞质和线粒体中,系统进化树表明,美仁牦牛与野牦牛和欧洲牛亲缘关系最近,与北极狐和宽吻海牛亲缘关系最远;RT-qPCR结果表明,在成年美仁牦牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肌肉、脂肪和睾丸组织中均有所表达,在心脏组织和肌肉组织中表达水平最高,在肝脏和睾丸组织中表达水平最低。

牦牛FABP3基因克隆及组织表达谱分析

【目的】分析牦牛心肌脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因的结构和功能,并检测其在成年牦牛和胎牛中的表达水平,为探究该基因在牦牛育种中的生物学功能提供理论参考。【方法】以美仁牦牛的心脏组织为试验材料,PCR扩增FABP3基因,对得到的编码区序列(CDS)进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR),检测FABP3基因在成年牦牛和胎牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及肌肉组织的表达水平。【结果】牦牛FABP3基因编码区序列长度为402 bp,编码133个氨基酸;蛋白质的高级结构主要是β-转角和延伸链;牦牛FABP3蛋白不存在跨膜区域和信号肽,属于具有一定亲水性的稳定蛋白;牦牛FABP3基因CDS区核苷酸及其编码氨基酸序列的同源性分析显示,FABP3基因在牛属动物中具有一定的保守性;系统进化树分析表明,牦牛与野牦牛和瘤牛的亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。RT-qPCR结果显示,FABP3基因在成年牦牛和胎牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及肌肉组织中均有表达,但在胎牛肝脏、脾脏、肾脏和肌肉中的表达水平显著或极显著高于成年牦牛,在成年牦牛肺脏中的表达水平极显著高于胎牛。【结论】克隆了牦牛FABP3基因,探究了FABP3基因在牦牛中的组织表达规律,为进一步研究该基因在牦牛脂肪沉积中的作用提供了基础数据。

草原两轮补奖政策生态效益评价——以甘南州美仁草原为例

本文以甘南州美仁草原为例,通过甘南州草原监测数据及牧户调查问卷资料,对两轮草原生态补奖政策实施效果进行了分析。结果表明,随着草原补奖政策的实施,甘南州草原年均降水量、年最低气温、年最高气温、年平均气温均呈升高趋势,草原植被盖度、草群平均高度和鲜草产量也呈增长趋势,草原可利用面积和草原理论载畜量均增加。甘南州两轮草原生态保护补助奖励政策的实施对改善草原气候、提高草原产草量、增加草原可利用面积和提升草原理论载畜量有明显的促进作用,取得了显著的生态效益、经济效益和社会效益。

美仁牦牛ILK基因克隆及生物信息学分析

为探究美仁牦牛ILK基因的结构与功能,利用PCR技术克隆了美仁牦牛背最长肌ILK基因CDS区序列,并利用在线软件预测和分析其编码氨基酸序列的生物信息学特征。结果表明,美仁牦牛ILK基因编码区长度1 359 bp,共编码452个氨基酸,是一种主要在细胞质中发挥生物学功能的亲水性蛋白;美仁牦牛ILK基因编码蛋白分子式C2276H3580N656O647S30,分子量51 447.27 Da,原子总数7 189,理论等电点8.30,不稳定性指数41.47,共有27个磷酸化位点;同时,亚细胞定位结果表明,美仁牦牛ILK基因主要分布在细胞质中;系统进化树表明,美仁牦牛与野牦牛和普通牛亲缘关系最近,与非洲爪蟾亲缘关系最远。

放牧美仁牦牛屠宰性能和肉品质特性研究

为研究美仁牦牛的屠宰性能和肉品质特性,发掘其遗传资源,随机选取13头美仁牦牛(5头公牛,8头母牛)进行屠宰试验和肉品质相关指标的测定。将检测结果与相关文献进行比对分析,结果表明,放牧美仁牦牛成年公牛的屠宰率52.10%,母牛的屠宰率49.91%。公牛的屠宰率高于查吾拉牦牛、雪多牦牛和环湖牦牛公牛。美仁牦牛公牛的眼肌面积高于雪多牦牛、环湖牦牛公牛,低于查吾拉牦牛和肃南牦牛。美仁牦牛肉的剪切力大于金川牦牛和麦洼牦牛。美仁牦牛肉的蛋白质含量21.20%,氨基酸和脂肪酸种类丰富,比例均衡。综合来看,美仁牦牛产肉性能优良,肉品质相对较好。

基于全基因组重测序对7个牦牛类群的群体结构分析

为了探究美仁牦牛遗传资源的进化历史和群体结构,以分布于甘肃省甘南藏族自治州合作市的美仁牦牛及周边分布的7个牦牛群体为研究对象,基于全基因组重测序技术,结合主成分分析、系统进化树、杂合度分析、群体连锁不平衡分析和群体分化指数等研究其群体进化情况。结果表明,7个牦牛群体间均表现为较高的分化程度;美仁牦牛单独聚为一类,甘南牦牛、雪多牦牛和帕米尔牦牛聚为一类,天祝牦牛、木里牦牛及九龙牦牛聚为一类;7个牦牛群体的期望杂合度均在0.354左右,观测杂合度均低于期望杂合度;美仁牦牛连锁不平衡程度较低,甘南牦牛连锁不平衡程度较高;7个牦牛群体的Fst值均高于0.04。综上说明,这7个牦牛群体间没有过多的基因交流;美仁牦牛在长期的进化过程中形成了一套独特的遗传机制,演变为一个单独的类群。

美仁牦牛乳品质特性分析

为深入开发利用美仁牦牛乳产品,2022年5月份采集了10头美仁牦牛的乳样,采用乳成分测定仪、全自动氨基酸分析仪、气相色谱仪和风味分析仪等对其常规营养成分、氨基酸、脂肪酸和挥发性风味物质含量进行检测。结果表明,美仁牦牛乳的主要营养成分含量为脂肪6.43%,蛋白质5.45%,乳糖5.06%,酪蛋白3.97%,非脂乳固体9.57%,总固形物13.97%;氨基酸总量(TAA)为4.78 g/100 g,其中谷氨酸含量最高,为1.03 g/100 g,甘氨酸含量最低,为0.08 g/100 g,必需氨基酸(EAA)为1.81 g/100 g,非必需氨基酸(NEAA)为2.97 g/100 g,EAA/TAA为37.9%,EAA/NEAA为60.9%;脂肪酸主要以不饱和脂肪酸为主,其中主要是单不饱和脂肪酸,占70.58%;多不饱和脂肪酸主要以γ-亚油酸为主,占1.32%;美仁牦牛乳中共检测出34种挥发性风味物质,包括醛类8种,脂类6种,酮类6种,醇类5种,酸类3种以及其他类6种,主要有2,3-丁二酮、乙酸乙酯、异戊醛、2-庚酮、2-丁酮等挥发性物质。

美仁牦牛Akirin1基因克隆及在不同组织中的表达

【目的】Akirin1基因是调控成肌细胞分化的关键基因,克隆美仁牦牛Akirin1基因编码区(CDS)序列进行生物信息学分析,并检测该基因在各组织间的表达特征,为研究调控牦牛肌肉生长的基因功能提供理论依据。【方法】利用RT-PCR技术克隆美仁牦牛Akirin1基因CDS区序列,通过生物信息学软件分析蛋白理化性质和结构,预测蛋白信号肽和磷酸化位点及构建系统进化树;通过qPCR技术检测Akirin1基因在美仁牦牛成年牛各组织间及胎牛肌肉中mRNA的表达水平。【结果】美仁牦牛Akirin1基因CDS区全长579 bp,编192个氨基酸,蛋白相对分子质量为21879.86u,理论等电点8.91,总平均亲水性-0.822,为亲水性蛋白;系统进化树表明:美仁牦牛与普通牛和印度水牛亲缘关系最近,同源性分别为100%、98.44%;Akirin1蛋白有29处磷酸化位点,无信号肽和跨膜区,主要在细胞核中发挥生物学功能;美仁牦牛Akirin1蛋白主要是由α-螺旋和无规则卷曲组成。Akirin1基因在美仁牦牛脂肪组织中表达量最高,与其他组织比较差异显著(P<0.05),且肌肉和心脏组织中的表达量最低;胎牛背最长肌中Akirin1基因表达量显著高于成年牛(P<0.05)。【结论】美仁牦牛Akirin1蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构域,美仁牦牛Akirin1基因与普通牛和印度水牛亲缘关系最近,表明该基因高度保守;Akirin1基因在美仁牦牛不同组织中的表达差异显著,且在胎牛背最长肌中的表达量高于成年牛,推测该基因的表达在牦牛早期的生长发育阶段发挥了重要作用。

牦牛FTL基因克隆、生物信息学及表达分析

旨在了解牦牛铁蛋白轻链(FTL)基因的结构与功能,以及在不同年龄段8个组织中的表达规律。以成年(36月龄)美仁牦牛肝脏组织cDNA为模板,克隆FTL基因的编码区序列,并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量(qRT-PCR)技术检测FTL基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、脂肪、睾丸中的相对表达量。结果表明,美仁牦牛FTL基因的CDS区为528 bp,共编码175个氨基酸,与野牦牛和牛的亲缘关系最近(99.8%);FTL蛋白为稳定亲水性分泌蛋白,不存在信号肽和跨膜结构,主要分布在细胞质中,蛋白的二级结构以α-螺旋为主,主要与FTH1、SCARA5、NCOA4等蛋白存在相互作用。qRT-PCR结果显示,FTL基因在成年牛的表达量依次为肝脏、肾脏、睾丸,脾脏、肺脏、脂肪、背最长肌、心脏,在7日龄犊牛的脂肪和背最长肌组织中表达最高,成年牛中肝脏组织表达量最高;通过2个阶段比对发现,脂肪、背最长肌和心脏组织的表达量随美仁牦牛年龄的增长呈下降趋势,而肺脏、脾脏、睾丸、肾脏和肝脏组织的表达量随年龄的增长而升高。

美仁牦牛PHB基因克隆及组织表达

为研究美仁牦牛抗增殖蛋白(PHB)的结构及功能,并探究其在7日龄牛和成年牛的各组织中的表达情况。以美仁牦牛肾脏组织cDNA为模板克隆美仁牦牛PHB基因序列。对基因序列进行生物信息学分析以及对蛋白质进行理化性质预测,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测PHB基因在美仁牦牛2个年龄段8个组织中的相对表达量。结果表明,美仁牦牛PHB基因的CDS区全长819 bp,共编码272个氨基酸;同源性比对发现美仁牦牛与普通牛的同源性最高(99.1%);美仁牦牛PHB蛋白分析显示,PHB蛋白内存在1个N-糖基化潜在位点和2个O-糖基化潜在位点,其氨基酸等电点为5.55,不稳定系数(Ⅱ)为46.07,总平均疏水性为0.045,预测为不稳定疏水性蛋白质;亚细胞定位显示,PHB蛋白位于线粒体(30.4%),蛋白内共有潜在磷酸化位点15个,PHB蛋白高级结构由α-螺旋(56.25%)、无规则卷曲(22.43%)、延伸链(16.54%)和β-转角(4.78%)相互连接而成。RT-qPCR结果显示,美仁牦牛2个发育阶段的8个组织中均有PHB基因的表达。在对比2个时期的PHB基因组织表达规律后发现,7个组织的PHB基因表达量随美仁牦牛的生长发育而降低,在美仁牦牛肝脏、脾脏、肺脏、脂肪和睾丸组织中,PHB基因表达量随年龄显著降低(P<0.05)。

牦牛IGF2基因克隆及生物信息学分析

为探究牦牛IGF2基因生物学的特征及结构,利用RT-PCR方法克隆了IGF2基因CDS区,并进行了生物信息学分析。结果表明,IGF2基因共有5个开放阅读框,编码区长540 bp,共编码179个氨基酸。该基因编码的蛋白分子式为C864H1377N251O257S9,分子量为19681.51 Da,原子总数2758个,理论等电点9.11,不稳定系数为59.56,总平均亲水性为-0.184,属于亲水性蛋白。IGF2编码蛋白具有73个磷酸化位点且仅存在于细胞质中。通过系统进化树的构建,发现美仁牦牛在进化过程中相对保守。

牦牛GOLT1B基因克隆及生物信息学分析

为研究牦牛GOLT1B基因的结构及功能,以美仁牦牛脂肪组织cDNA为模板,克隆牦牛GOLT1B基因的编码区序列(Codingsequence,CDS),并且利用该基因序列进行生物信息学分析、结构域预测及蛋白理化性质预测。结果表明,美仁牦牛GOLT1B基因的CDS区全长417 bp,共编码138个氨基酸;牦牛GOLT1B结构域预测显示,在GOLT1B氨基酸序列的第11~114位有1个Pfam结构域的Got1家族;GOLT1B蛋白预测结果表明,跨膜结构域有3处,分别位于氨基酸序列的第13~30位、第34~56位以及第69~91位,无信号肽区域,其氨基酸分子质量15425.69 Da,原子总数2232个,等电点10.36,不稳定系数25.43,为稳定的蛋白质,脂肪系数117.10,总平均亲水系数1.087,为疏水蛋白,共有10个磷酸化位点;同时,亚细胞定位结果表明,美仁牦牛GOLT1B基因主要分布于细胞外基质和细胞壁中;系统进化树表明:美仁牦牛与野牦牛和欧洲牛的亲缘关系最近。

美仁牦牛 PDK4 基因克隆及组织表达

为研究美仁牦牛PDK4基因在各组织中的表达特征,探索其与脂肪沉积机制的相关性,采集了美仁牦牛背最长肌、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和睾丸等组织样,并提取了其总RNA,通过RT-PCR、生物信息学软件及qPCR等技术对美仁牦牛PDK4基因进行了扩增、生信分析和表达特征研究。结果表明,美仁牦牛PDK4基因CDS区全长1224 bp,编码407个氨基酸,蛋白相对分子质量为46.15914 ku,理论等电点6.60,总平均亲水性-0.169,为亲水性蛋白;系统进化树结果表明,美仁牦牛与野牦牛亲缘关系最近,与鬣狗亲缘关系最远;PDK4蛋白有34处磷酸化位点,无信号肽和跨膜区,主要在线粒体中发挥生物学功能;美仁牦牛PDK4蛋白主要是由α-螺旋和无规则卷曲组成。PDK4基因在7日龄美仁牦牛肝脏和肺脏中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),在肌肉、脂肪、脾脏和睾丸中中度表达,在肾和心脏中低表达。随着牦牛年龄增长,PDK4基因在30月龄美仁牦牛脂肪组织中的表达量增加,并显著高于7日龄美仁牦牛脂肪中的表达量(P<0.05)。以上结果表明,PDK4基因可能在美仁牦牛的生长过程中参与脂肪调控,在脂肪沉积过程中发挥重要作用。

‘美人’梅与其近缘种亲缘关系的AFLP研究

以美人梅型的 4个品种以及部分近缘种为试材 ,运用AFLP银染法 ,采用引物组合E ACT/M CAT ,E GA/M CTC ,E ACT/M CCA ,E ACT/M CAC ,扩增得到 4 2 0个位点的 6 30 0条带数据。使用NTSYSpc 2 .1t软件 ,分别采用DICE ,SM和Jaccard匹配系数 ,SAHNClustering进行不加权成对算术平均法(UPGMA)聚类分析 ,得到了‘美人’梅与近缘种的亲缘关系依次为梅、紫叶李、李、山桃、桃花、山杏和杏的结果 ,与形态学、遗传育种学的相关结论相符。

不同扦插日期美人梅嫩枝扦插生根特性及生理生化

从美人梅半木质化茎段的中上部选取插穗,在2015年5月和8月采用2 500 mg·L^-1IBA处理插穗,研究不同扦插日期美人梅生根特性和生根指标差异及扦插后不同时期插穗皮部可溶性糖、可溶性蛋白、淀粉含量和过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）、吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性的变化。结果表明,（1）不同季节美人梅嫩枝扦插生根过程均可分为根的诱导期（0-10 d）、表达期（10-30 d）和伸长期（30-40 d）3个阶段。（2）IBA处理可显著提高插穗生根率。扦插后,诱导期淀粉与可溶性糖含量上升,可溶性蛋白含量降低,POD活性升高,IAAO活性处于较低水平,有利于诱导根原基的发育。表达期,IBA处理能加速淀粉的分解,使POD活性先下降后升高,IAAO活性持续升高,有利于不定根的表达。伸长期,IBA处理能使可溶性蛋白含量继续增加,POD活性下降,有利于不定根的伸长。（3）扦插时间不同,其内源物质含量及变化存在差异。5月份插穗内可溶性糖含量及3种氧化酶活性在表达期均高于8月份;整个生根过程中,5月份插穗与8月份插穗的PPO活性变化呈现相反规律。该研究以5月份IBA处理插穗生根效果较好,可为北方抗寒梅花嫩枝扦插生产提供技术支持和理论依据。

不同激素对‘美人’梅叶片离体培养的影响及其细胞学观察

该试验以‘美人’梅离体培养的无菌苗叶片为材料 ,研究了不同种类激素配比对叶片脱分化及再分化的影响 ,并对不同条件下产生的愈伤组织进行了细胞学观察。结果表明 :BA对‘美人’梅叶片的愈伤组织诱导起到抑制作用 ;NAA可使叶片直接生根 ;2 ,4 D的加入可以诱发叶片形成球形愈伤。但只有配合适当浓度的BA ,才能形成胚状体。诱导胚状体合适的培养基为 :WPM +BA 1mg L +NAA 0 1mg L +2 ,4 D 1mg L +L 谷氨酰胺 10 0mg L +水解乳蛋白 10 0 0mg L。

从古典“美人”到当代“美女”——称谓、认同与文化走向

中国古典时期的作家常自喻为"美人",今天则有不少作家被冠以"美女作家"称谓。称谓的变化折射出认同的变化,背后则是古典文化与美学精神的变化。"美人"作家,其内在精神气质偏"悲",这种"悲"性精神正是中国古典美学与文化内在气质的特有表达;"美女作家",其内在精神气质则趋于"乐"性,这一精神也契合了当代文化娱乐化发展的时代精神。作家称谓从"美人"到"美女"的嬗变,以及由此衍生出来的美人文学的终结和美女文学的兴起,意味着古典文化与美学悲性精神有一种向娱乐化以及深层的享乐主义、纵欲主义一脉相承的文化嬗变趋向。

美人梅叶片中花色苷稳定性研究

对美人梅叶片花色苷的稳定性进行研究,结果表明:花色苷在高温(100℃)条件下稳定;紫外光、直射光对花色苷具有增色作用;在pH1~3的环境下花色苷颜色较为稳定;氧化剂Vc,H2O2,Na2SO3对花色苷影响较大,而还原剂无影响;Fe3+,Ca2+,Cu2+,Zn2+对花色苷有增色效果,并以Fe3+效果最好,Ca2+,Cu2+,Zn2+次之,而Mg2+与Na+对花色苷无影响;葡萄糖、柠檬酸和蔗糖均对花色苷也有增色作用。