大豆苷元对心肌梗死大鼠心电图、心肌肌钙蛋白I及Raf-MEK-ERK信号通路的影响

目的探讨大豆苷元对心肌梗死大鼠心电图、心肌肌钙蛋白I(cTnI)及Raf-MEK-ERK信号通路的影响。方法取无特定病原体等级成年雄性大鼠60只作为研究对象。将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量大豆苷元组、中剂量大豆苷元组、高剂量大豆苷元组及瑞舒伐他汀组,每组10只。除假手术组外均建立心肌梗死动物模型。监测各组大鼠心电参数;采用酶联免疫吸附试验检测各组血清cTnI、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α及白细胞介素(IL)-6水平;采用苏木精-伊红染色观察心肌组织病理形态;采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率;采用免疫印记检测心肌组织中Raf、MEK、ERK蛋白水平。结果与假手术组比较,模型组和低、中、高剂量大豆苷元组及瑞舒伐他汀组T波均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,模型组和低、中、高剂量大豆苷元组及瑞舒伐他汀组cTnI、CK-MB、TNF-α及IL-6水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量大豆苷元组及瑞舒伐他汀组cTnI、CK-MB、TNF-α及IL-6水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。假手术组、模型组和低、中、高剂量大豆苷元组及瑞舒伐他汀组大鼠心肌细胞凋亡率分别为(3.56±0.41)%、(32.50±5.50)%、(24.15±3.66)%、(19.66±2.80)%、(11.20±1.80%)及(12.03±2.11)%。与假手术组比较,模型组和低、中、高剂量大豆苷元组及瑞舒伐他汀组心肌细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量大豆苷元组及瑞舒伐他汀组心肌细胞凋亡率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,模型组和低、中、高剂量大豆苷元组及瑞舒伐他汀组Raf、MEK、ERK蛋白水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量大豆苷元组及瑞舒伐他汀组Raf、MEK、ERK蛋白水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论心肌梗死大鼠采用大豆苷元干预后可提高心电T波,降低cTnI水平进而保护心脏,同时可降低心肌细胞凋亡,其作用机制与抑制Raf-MEK-ERK信号激活相关。

杞菊地黄丸调控Raf/MEK/ERK通路改善糖尿病视网膜病变小鼠炎症反应实验研究

目的基于纤维肉瘤蛋白(rapid accelerated fibrosarcoma,Raf)/丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase,MEK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)信号通路探讨杞菊地黄丸改善糖尿病视网膜病变炎症反应的价值。方法将50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组,模型组,杞菊地黄丸低剂量组,杞菊地黄丸中剂量组以及杞菊地黄丸高剂量组。通过腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病模型。造模12周后,正常组、模型组每天予生理盐水灌胃1次,杞菊地黄丸各剂量组每天予相应杞菊地黄丸药液(11,22以及44 g·kg^(-1))灌胃1次,连续8周。每月测定血糖、饮水量、排尿量、进食量以及体质量变化;影像学检测[眼底血管荧光造影(Fundus angiofluorescence,FFA)、光学相干断层扫描血管成像(Optical coherence tomography angiography,OCTA)以及光学相干断层扫描(Optical coherence tomography,OCT)]评估视网膜病变情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色评估视网膜组织病理学变化;免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测视网膜组织白介素-6(interleukin-6,IL-6),白介素-17(interleukin-17,IL-17)以及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)表达;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测外周血中IL-6、IL-17以及TNF-α水平。蛋白免疫印迹法(western blot,WB)检测视网膜组织中Raf、p-Raf、MEK、p-MEK、ERK以及p-ERK表达。结果与正常组相比,模型组小鼠随机血糖高,多饮、多尿、多食以及体质量下降症状明显;视网膜血管密度低,管径增粗,走行迂曲;视网膜各层结构疏松,总体厚度变薄明显;IL-6、IL-17、TNF-α、p-Raf、p-MEK以及p-ERK表达明显增多(P<0.01)。与模型组相比,杞菊地黄丸组小鼠随机血糖高,多饮、多尿、多食以及体质量下降症状明显改善;血管密度低,管径增粗,走行迂曲程度明显减轻;视网膜各层结构疏松,总体厚度变薄显著缓解;IL-6、IL-17、TNF-α、p-Raf、p-MEK以及p-ERK表达明显减少(P<0.01)。结论杞菊地黄丸能有效保护视网膜,延缓DR进展,可能与其调控Raf/MEK/ERK信号通路,发挥抗炎作用相关。

基于MEK/ERK通路研究桂枝茯苓丸改善慢性阻塞性肺疾病小鼠气道重塑的作用与机制

目的:研究桂枝茯苓丸通过丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶(MEK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路改善慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠气道重塑的作用与机制。方法:采用烟熏的方法建立COPD小鼠模型,将32只造模成功小鼠随机分为模型组、桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组,每组8只。另取8只未烟熏的小鼠为空白组。各组予相应药物灌胃14 d。采用小动物肺功能仪测定小鼠每分钟通气量(MV)、呼气峰值流速(PEF)和吸气峰值流速(PIF),HE染色评估肺组织炎症,Masson染色观察气道重塑改变,Western blotting检测COL1A1、COL3A1、MEK1、p-MEK1、ERK(1/2)和p-ERK(1/2)蛋白相对表达量。结果:模型组小鼠MV、PIF和PEF水平均低于空白组(P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠肺组织出现明显炎症和气道重塑,且肺组织COL1A1、COL3A1、p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK/MEK和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)均高于空白组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠MV、PEF、PIF水平均高于模型组(P<0.05),肺组织COL1A1、COL3A1、p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK/MEK和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)均低于模型组(P<0.05)。与模型组比较,桂枝茯苓丸组、PD98059组和桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠的肺组织炎症和气道重塑改善。桂枝茯苓丸+PD98059组小鼠MV、PIF、PEF水平高于桂枝茯苓丸组和PD98059组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠MV、PIF和PEF水平与PD98059组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠肺组织COL1A1和COL3A1蛋白相对表达量低于PD98059组(P<0.05),高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。PD98059组小鼠肺组织COL1A1和COL3A1蛋白相对表达量高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。桂枝茯苓丸组小鼠肺组织p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK1/MEK1和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)低于PD98059组(P<0.05),高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。PD98059组小鼠肺组织p-MEK1、p-ERK(1/2)、p-MEK1/MEK1和p-ERK(1/2)/ERK(1/2)高于桂枝茯苓丸+PD98059组(P<0.05)。结论:桂枝茯苓丸能显著改善COPD小鼠气道重塑过程,抑制MEK/ERK通路可能是其作用机制之一。

基于ROS/Ras/MEK信号通路探讨四君子汤干预溃疡性结肠炎癌变的作用机制

目的探讨四君子汤通过ROS/Ras/MEK信号通路干预溃疡性结肠炎癌变(Ulcerative colitis Associated Carcinogenesis,UCAC)小鼠的作用机制。方法60只BALB/c小鼠适应性喂养一周,采用随机数字法分为正常组(10只)和造模组(50只)。造模组小鼠予以DMH溶液进行腹腔注射,自由饮用3%DSS溶液19周构建UCAC模型,经病理验证成功后,将造模组随机分为模型组(8只)、西药组及中药低、中、高剂量(每组10只)。中药低、中、高剂量组分别予以4.29 g/kg、8.58 g/kg、17.16 g/kg的四君子汤药液灌胃,西药组予以0.4 g/kg的柳氮磺吡啶肠溶片药液灌胃,正常组与模型组均给予等量生理盐水灌胃。造模期间,每日观察各组小鼠的一般状态。末次造模给药结束后,各组小鼠以1%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉,取小鼠病变结肠组织,HE染色观察结肠组织病理变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测Ras、MEK mRNA转录水平,蛋白免疫印迹法(Western-blot,WB)检测Ras、MEK蛋白表达水平,免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)检测Ras、MEK2、MAP2K1蛋白表达水平。结果与正常组相比:模型组小鼠的一般状态相对较差,结肠组织存在着明显肠道黏膜组织损伤,ROS的含量明显上升(P<0.01),Ras、MEK mRNA转录水平提高(P<0.01),Ras、MEK、MEK2、MAP2K蛋白表达水平提高(P<0.01)。与模型组相比:西药组与中药各剂量组小鼠的一般状态较前明显改善,小鼠结肠组织黏膜结构有所修复;西药组ROS含量、Ras和MEK mRNA转录水平及Ras、MEK、MEK2、MAP2K1蛋白表达水平下降(P<0.01);中药中、高剂量组ROS含量均有所下降(P<0.05,P<0.01),中药各剂量组Ras和MEK的mRNA转录水平均下降(P<0.05,P<0.01),中药各剂量组Ras、MEK蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),中药低、高剂量组及中药中剂量组MEK2、MAP2K1蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论四君子汤能通过阻断ROS/Ras/MEK信号通路传导,修复UCAC小鼠结肠组织黏膜损伤,改善UCAC小鼠肠道炎症,从而达到干预UCAC进程的作用。柳氮磺吡啶肠溶片也可以通过阻断ROS/Ras/MEK信号通路传导,从而达到干预UCAC进程的作用。

补阳还五汤调节MEK/ERK通路对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及机械性痛觉超敏的影响研究

目的研究补阳还五汤对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及机械性痛觉超敏的影响,以及对丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号相关激酶(ERK)通路的调节作用。方法36只大鼠随机分为正常对照组(6只)及造模组(30只),造模组采用高糖高脂饲料喂养法联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立糖尿病坐骨神经病变大鼠模型,造模完成后,造模组大鼠随机分为模型组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组及阳性对照组,每组6只。补阳还五汤低、中、高剂量组大鼠分别按照7.5、15.0、30.0 g/kg(以生药含量计)给予补阳还五汤灌胃,1次/d,连续给药12周。阳性对照组大鼠按照0.1 mg/kg腹腔注射给予PD98059,2次/周,连续12周。测定大鼠热缩足潜伏期及后足伸姿推力,使用肌电图仪测定运动神经传导速度(MNCV)及感觉神经传导速度(SNCV),使用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、总抗氧化能力(T-AOC)及坐骨神经谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,采用苏木精-伊红(HE)染色法检查坐骨神经病理学变化,采用缺口末端标记法(TUNEL)测定坐骨神经细胞凋亡率,采用免疫印迹法测定大鼠坐骨神经p-MEK、p-ERK水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠热缩足潜伏期、MNCV、SNCV及T-AOC、GSH、SOD水平均明显降低(P<0.05),后足伸姿推力、坐骨神经细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、p-MEK、p-ERK水平均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及阳性对照组大鼠热缩足潜伏期、MNCV、SNCV及T-AOC、GSH、SOD水平均明显升高,且补阳还五汤低剂量组<补阳还五汤中剂量组<补阳还五汤高剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及阳性对照组大鼠后足伸姿推力、坐骨神经细胞凋亡率及IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、p-MEK、p-ERK水平均明显降低,且补阳还五汤低剂量组>补阳还五汤中剂量组>补阳还五汤高剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补阳还五汤能够显著抑制糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激损伤及炎症因子水平,修复坐骨神经病理性损伤,改善大鼠坐骨神经功能,抑制坐骨神经细胞凋亡,进而促进糖尿病大鼠坐骨神经损伤的恢复,其机制可能与调节MEK/ERK通路有关。

基于MEK/ERK/STAT3信号通路探讨丹皮酚对糖尿病心肌病大鼠的影响

目的 探究丹皮酚调节丝裂原活化细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)/信号转导与转录激活因子3 (STAT3)信号通路对糖尿病心肌病大鼠心脏功能、氧化应激损伤和炎症的影响。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、丹皮酚组、丹皮酚+MEK/ERK激活剂(C16-PAF)组,除对照组外,其余各组建立糖尿病心肌病大鼠模型,给予相应药物干预6周。检测大鼠心功能指标[左室后壁厚度(LVPWT)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)];观察心肌组织形态并进行病理评分;检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、 IL-6、单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)水平,以及MEK、磷酸化MEK (p-MEK)、 ERK、磷酸化ERK (p-ERK)、 STAT3、磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠心肌组织病理损伤严重,LVPWT、 LVEDD、 LVESD、心肌组织病理评分、 MDA、 TNF-α、IL-1β、 IL-6、 MCP-1水平和p-MEK/MEK、 p-ERK/ERK、 p-STAT3/STAT3蛋白表达升高(P<0.05),LVEF、 LVFS、NO水平和SOD、 NOS活性降低(P<0.05);与模型组比较,丹皮酚组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVPWT、LVEDD、 LVESD、心肌组织病理评分、 MDA、 TNF-α、 IL-1β、 IL-6、 MCP-1水平和p-MEK/MEK、 p-ERK/ERK、 pSTAT3/STAT3蛋白表达降低(P<0.05),LVEF、 LVFS、 NO水平和SOD、 NOS活性升高(P<0.05);C16-PAF可减弱丹皮酚对糖尿病心肌病大鼠上述指标的改善效果(P<0.05)。结论 丹皮酚可通过抑制MEK/ERK/STAT3信号通路改善糖尿病心肌病大鼠心脏功能、氧化应激损伤和炎症。

毛蕊异黄酮通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用机制

目的探讨毛蕊异黄酮(Calycosin)通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制肺癌细胞增殖、迁移的作用机制。方法将肺癌A549细胞分为空白对照组和毛蕊异黄酮20、40、80μmol/L 3个浓度组。MTT法检测细胞存活率;Western Blot检测肺癌A549细胞RAS、p-RAF、p-MEK和p-ERK蛋白的表达;细胞集落试验和划痕试验观察肺癌A549细胞的增殖和迁移。结果当毛蕊异黄酮浓度在80μmol/L以下时,毛蕊异黄酮无明显细胞毒性。毛蕊异黄酮可抑制RAS、p-RAF、p-MEK和p-ERK蛋白表达,且抑制效果呈剂量依赖性;毛蕊异黄酮对肺癌A549细胞增殖和迁移的抑制作用呈剂量依赖性。结论毛蕊异黄酮能够通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路抑制肺癌A549细胞增殖和迁移。

基于Raf/MEK/ERK信号通路探讨内异康复片对hEM15A细胞的影响

目的探讨内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)内膜间质细胞hEM15A的影响。方法制备内异康复片含药血清,将hEM15A细胞分为空白对照组,阴性对照组,5%、10%、20%含药血清组。采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移,Western blo法检测RKIP及Raf/MEK/ERK通路相关蛋白表达。再将hEM15A细胞分为阴性对照组、10%含药血清组、si-RKIP-1组、si-RKIP-1+10%含药血清组,观察上述检测指标的变化。结果与阴性对照组比较,各浓度含药血清组hEM15A细胞活性降低(P<0.05),凋亡率、RKIP蛋白表达升高(P<0.05);10%及20%含药血清组hEM15A细胞迁移数、p-MEK及p-ERK1/2蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf蛋白表达降低(P<0.05)。与阴性对照组比较,si-RKIP-1组hEM15A细胞活性、迁移数升高(P<0.05),RKIP蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf、p-ERK1/2、p-MEK蛋白表达升高(P<0.05);与10%含药血清组比较,si-RKIP-1+10%含药血清组hEM15A细胞活性、迁移数升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),RKIP蛋白表达降低(P<0.05),p-Raf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05)。结论内异康复片可能通过调节RKIP及其介导的Raf/MEK/ERK信号通路抑制hEM15A细胞活性和迁移,促进ESC凋亡,发挥改善EMT的作用。

MEK1/2抑制剂U0126对射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H作用的研究

目的研究MEK1/2抑制剂U0126对肝癌射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H的增殖、迁移和侵袭的影响。方法运用肝癌细胞系HepG2体外制作射频消融术后残留肝癌细胞系HepG2-H,通过细胞增殖、划痕、侵袭实验,观察实验组(加入10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L的U0126)和对照组(不加入U0126)细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果实验组(加入10、20、30μmol/L的U0126)的吸光度值分别为:(0.6929±0.08257)、(0.5084±0.06012)、(0.4549±0.07660),对照组吸光度值为:(1.1245±0.07971);组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组的迁移面积分别为:(5640.2±285.4)mm^(2)、(5082.4±237.7)mm^(2)、(4821.7±246.3)mm^(2),对照组的迁移面积为:(6053.8±269.2)mm^(2),组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组的每高倍视野细胞计数分别为:(164.2±18.89)个、(138.4±18.06)个、(129.4±18.54)个,对照组的每高倍视野细胞计数为:(226.6±16.81)个,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论U0126可抑制射频消融术后残留肝癌细胞HepG2-H的增殖、迁移和侵袭。

中医药靶向干预RaF/MEK/ERK信号通路治疗肝细胞癌的研究进展

肝细胞癌(HCC)是一种高度恶性肿瘤,具有特殊的多元难治性分子生物学机制。肝细胞癌的病理表现与病变细胞的分化程度有关,因此抑制肝癌细胞的分化、增殖是治疗该病的重要手段。中医药可以通过调控体内蛋白激酶(RaF)、丝原活化蛋白激酶(MEK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)及精准干预RaF/MEK/ERK通路来影响肝癌的发生进展,从而发挥治疗HCC的作用。该文主要针对RaF/MEK/ERK信号通路调控HCC发生发展的机制,以及中药单体及复方靶向干预RaF/MEK/ERK信号通路进行综述。

盐酸安罗替尼联合化疗对宫颈癌患者癌组织血管新生能力及MEK/ERK通路的影响

目的研究盐酸安罗替尼联合化疗对宫颈癌患者癌组织血管新生能力及MEK/ERK通路的影响。方法选取苏州大学附属第二医院2020年8月—2022年8月收治的68例宫颈癌患者为研究对象,采用随机数字表法分为试验组(n=34)和对照组(n=34)。对照组接受常规化疗治疗,试验组在此基础上联合安罗替尼抗血管生成治疗。对比两组患者临床疗效,治疗前后血管新生能力[血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤微血管密度(MVD)],治疗后MEK/ERK通路分子水平。结果与对照组总有效率58.82%(20/34)相比,试验组88.23%(30/34)更高(χ^(2)=7.555,P<0.05);治疗后,两组患者VEGF、MVD水平均降低,且相比于对照组,试验组更低[对照组分别为(63.98±5.14)ng·g^(-1)、(13.02±1.65)个·mm^(-2),试验组分别为(48.06±5.35)ng·g^(-1)、(6.68±1.62)个·mm^(-2)](t=12.512、15.987,均P<0.05);与对照组患者相比,试验组患者MEK1、MEK2以及ERK1/2水平更低[对照组分别为(2.06±0.19)ng·mL^(-1)、(2.28±0.14)ng·mL^(-1)、(1.48±0.12)ng·mL^(-1),试验组分别为(1.23±0.21)ng·mL^(-1)、(1.06±0.15)ng·mL^(-1)、(0.84±0.11)ng·mL^(-1)](t=17.089、34.670、22.924,均P<0.05)。结论盐酸安罗替尼联合化疗能够有效抑制宫颈癌患者癌组织血管新生能力以及MEK/ERK通路分子水平,临床疗效较高。

赤凤迎源针刺法对面神经损伤模型大鼠Ras/MEK/ERK信号通路的影响

目的探讨赤凤迎源针刺法对面神经超微结构、丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase,MEK)、细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及血清KRas蛋白表达的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、常规针刺组、赤凤迎源针刺组,每组8只。除空白对照组大鼠正常饲养外,其他各组大鼠用面神经颊支压榨法诱导面神经损伤模型。造模成功后,予以干预2周。干预结束后,行电镜检查观察大鼠的面神经超微结构;通过HE染色观察面神经组织形态组织学变化;ELISA法检测血清KRas的表达水平;Western blot检测面神经组织MEK、ERK蛋白的表达水平。结果造模后,与空白对照组比较,另外3组大鼠动物行为学评分均明显升高(P<0.01)。针刺2周后,常规针刺组及赤凤迎源针刺组大鼠评分明显低于模型组(P<0.01),且赤凤迎源针刺组评分低于常规针刺组(P<0.01)。针刺2周后,与模型组对比,常规针刺组及赤凤迎源针刺组面神经轴突纤维排列较紧密,内质网较多,KRas蛋白表达明显升高(P<0.05),面神经MEK蛋白、ERK蛋白表达升高(P<0.05),且赤凤迎源针刺组均高于常规针刺组(P<0.05)。结论赤凤迎源针刺法可改善面神经损伤模型大鼠动物行为学,上调KRas、MEK及ERK表达水平,可能与激活Ras/MEK/ERK信号通路有关,从而修复面神经损伤。

雷公藤红素通过FAK/MEK/ERK信号通路对肝癌细胞耐药性的影响

目的探究雷公藤红素(CSL)对肝癌细胞耐药性的影响。方法采用仑伐替尼(Len)构建耐药人肝癌细胞Huh7/Len,分为对照组,CSL低、中、高浓度组(1、2.5、5μmol/L),CSL高浓度+Zn27[黏着斑激酶(FAK)激活剂]组(5μmol/L CSL+2 nmol/L Zn27),每组设置6个复孔。检测细胞增殖(以吸光度计)和克隆能力、凋亡率、侵袭数、迁移数,以及细胞中活性氧(ROS)水平和磷酸化FAK(p-FAK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(p-MEK)、磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,CSL低、中、高浓度组细胞的吸光度、克隆数、侵袭数、迁移数和p-FAK、p-MEK、p-ERK、Bcl-2蛋白相对表达量均显著降低,细胞凋亡率、ROS水平和Bax、caspase-3蛋白相对表达量均显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与CSL高浓度组比较,CSL高浓度+Zn27组细胞中上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论CSL能增强氧化应激,促进细胞凋亡,抑制肝癌细胞恶性进展和化疗耐药性,其机制可能与抑制FAK/MEK/ERK信号通路有关。

连翘脂素调节Ras/Raf/MEK/ERK信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究连翘脂素(PG)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡以及上皮间质转化的影响及机制。方法 培养HCT116结直肠癌细胞,采用10~200μmol/L的连翘脂素处理细胞,检测细胞存活率,筛选最佳实验浓度。将细胞分为对照组(Control组),连翘脂素低、中、高浓度组(PG-L组、PG-M组、PG-H组),连翘脂素高浓度+转染慢病毒阴性对照组(PG-H+NC组),连翘脂素高浓度+Ras慢病毒组(PG-H+Ras组)。平板克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;流式细胞术以及Hoechst33258染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测上皮间质转化(EMT)标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及信号通路相关蛋白p-Raf、p-MEK、p-ERK表达;建立荷瘤小鼠模型评价连翘脂素对结直肠癌肿瘤生长的影响。结果 10~200μmol/L的连翘脂素处理HCT116结直肠癌细胞,可以显著抑制细胞存活率,经计算IC50值为(140.4±2.147)μmol/L,选择10、50、100μmol/L连翘脂素进行后续实验;与Control组比较,PG-L组、PG-M组、PG-H组HCT116细胞克隆形成率、划痕愈合率、细胞侵袭个数以及Vimentin、p-Raf、p-MEK、p-ERK表达显著降低,细胞凋亡率以及E-cadherin表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PG-H+NC组比较,PG-H+Ras组HCT116细胞克隆形成率、划痕愈合率、细胞侵袭个数以及Vimentin、p-Raf、p-MEK、p-ERK表达显著升高,细胞凋亡率以及E-cadherin表达显著降低(P<0.05);连翘脂素可以显著抑制结直肠癌移植瘤的生长。结论 连翘脂素可以抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡以及上皮间质转化,其作用机制可能与抑制Ras/Raf/MEK/ERK信号通路激活有关。

miR-485-5p调控MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡的机制研究

目的探讨miR-485-5p调控MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡的机制研究。方法选择2021年1月-2022年12月在我院行根治性肝癌切除术的肝癌患者50例,切除肝癌组织及癌旁组织后迅速液氮冷冻,RT-PCR检测组织及细胞中miR-485-5p相对表达量。将肝癌Hep3B细胞随机分为miR-NC组、miR-485-5p组和miR-485-5p+ML099组。CCK-8检测肝癌细胞增殖能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,检测细胞中p-MEK、MEK、p-ERK、ERK蛋白表达(蛋白质印迹法)。结果与癌旁组织中miR-485-5p相对表达量(1.18±0.23)相比,肝癌组织(0.19±0.14)明显降低(P<0.01)。与人正常肝细胞株LO2 miR-485-5p相对表达量(1.26±0.23)相比,人肝癌细胞株Huh7(0.36±0.09)、Hep3B(0.17±0.06)和HepG2(0.31±0.07)明显降低(P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-485-5p组Hep3B细胞中miR-485-5p相对表达量(1.25±0.18)和细胞凋亡率(18.62%±2.11%)明显升高,细胞活力(24 h:0.23±0.03,48 h:0.39±0.06,72 h:0.57±0.08)、细胞侵袭数目(71.06±8.92)和细胞中p-MEK/MEK比值(0.31±0.04)、p-ERK/ERK比值(0.42±0.05)明显降低(P<0.01);和miR-485-5p组相比,miR-485-5p+ML099组Hep3B细胞中miR-485-5p相对表达量(0.31±0.08)和细胞凋亡率(5.18%±0.64%)明显降低,细胞活力(24 h:0.24±0.04,48 h:0.61±0.08,72 h:0.98±0.10)、细胞侵袭数目(164.11±17.18)和细胞中p-MEK/MEK比值(0.69±0.08)、p-ERK/ERK比值(0.89±0.10)明显升高(P<0.01)。结论miR-485-5p在肝癌中呈低表达,过表达miR-485-5p可能通过抑制MEK/ERK信号通路抑制肝癌细胞增殖和侵袭,并诱导肝癌细胞凋亡。

MEK1-ERKs级联激活方式是调控单纯疱疹病毒Ⅱ型复制的重要机制

本研究通过阐明MEK1和MEK2亚型在单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type 2,HSV2)复制中介导的Raf/MEK/ERK(简称ERK)通路活化中的作用,以期进一步阐明该通路调控病毒复制的机制.研究中应用了MEK抑制剂U0126、针对MEK1和MEK2的特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),以及用死、活病毒攻击易感细胞,分别检测细胞ERK通路的激活和病毒复制的水平.结果表明,HSV2活病毒感染能引起ERK通路双相激活,U0126则能有效地抑制该通路的活化以及病毒复制;而死病毒只能引起ERK通路早期时相激活;单独敲降(knockdown)MEK1可抑制死、活病毒引发的ERK通路早期时相激活及活病毒引发的晚期时相激活,而敲降MEK2未见对病毒引起的该通路双相激活产生显著影响.提示HSV2复制引起ERK通路双相激活是基于MEK1-ERKs方式调控的,这种信号蛋白激活传递模式在HSV2整个复制周期中具有重要的正调控作用.该结果进一步证明了本室的前期报道:MEK1和MEK2亚型在病毒复制时发挥的作用不同.这对揭示MEK激酶功能的复杂性和ERK通路调控HSV2复制的机制,具有重要的意义.

平喘宁对哮喘大鼠肺组织MEK1、MEK2、Ras mRNA表达的影响

目的观察平喘宁对寒性哮喘大鼠气道形态学及肺组织中丝裂原活化蛋白激酶的激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)1mRNA、MEK2mRNA及Ras mRNA表达水平的影响。方法将105只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,桂龙咳喘宁组,地塞米松组,平喘宁高、中、低剂量组,每组15只。以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠哮喘模型,模型复制21d后,分别给予地塞米松组,桂龙咳喘宁组,平喘宁高、中、低剂量组大鼠相应药物灌胃,给予正常组和模型组大鼠等容量蒸馏水灌胃。4周后取出肺组织,采用苏木精-伊红染色行病理形态学观察,采用逆转录-聚合酶链式反应半定量检测MEK1mRNA、MEK2mRNA及Ras mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组发生明显炎性细胞浸润,气道平滑肌增厚;MEK1mRNA、MEK2mRNA以及Ras mRNA表达水平显著増高(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、桂龙咳喘宁组、平喘宁组大鼠肺组织病理改变减轻;各治疗组MEK1mRNA、MEK2mRNA以及Ras mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论平喘宁可明显减轻哮喘大鼠的气道炎性反应,抑制哮喘大鼠肺组织中MEK1mRNA、MEK2mRNA以及Ras mRNA的表达,延缓气道重塑而治疗哮喘。

Raf-1、MEK-2、ERK-1在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨Raf-1、MEK-2、ERK-1在胃癌组织中的表达形式及其意义,并分析此种信号途径与胃癌的临床病理特征之间是否存在联系,并为胃癌抗EGFR靶向治疗的分子标志物筛选提供依据。方法通过免疫组化中SP法检测60例胃癌患者标本胃癌组织和正常的胃组织中Raf-1、MEK-2、ERK-1的表达水平并进行比对。结果经统计60例胃癌组织当中Raf-1、MEK-2、ERK-1的表达率分别为88.33%(53/60)、85.00%(51/60)、78.33%(47/60)。而正常的胃组织当中Raf-1、MEK-2、ERK-1均未见到阳性表达。被胃癌细胞转移的淋巴结组织中Raf-1、MEK-2、ERK-1的阳性表达率更为显著,分别高达95.12%(39/41),90.24%(37/41),87.80%(36/41)。未见癌细胞转移的淋巴结中Raf-1、MEK-2、ERK-1均无表达。实验证实Raf-1、MEK-2、ERK-1的表达水平与胃癌的临床特征中的肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期有明显相关性(P<0.05)。结论 (1)人体胃癌组织当中存在Raf/MEK/ERK信号通路的激活;(2)人体胃癌组织中Raf/MEK/ERK信号通路的活化程度与胃癌组织的临床病理特征相关,此信号通路活化程度越高的胃癌组织,其分化的程度越低,TNM分期越高。三者联合检测可为研究胃癌的生物学行为乃至对靶向治疗胃癌提供十分重要的参考依据及指标。

自分泌IL-6经Ras/MEK/ERK、PI3K/Akt通路促进卵巢癌细胞黏附和侵袭功能的研究

目的探讨内源性IL-6表达改变对卵巢癌细胞黏附和侵袭功能的影响及相关信号转导通路。方法利用以往构建的内源性过表达IL-6的人卵巢癌A2780细胞系和内源性抑制IL-6表达的人卵巢癌SKOV-3细胞,分别采用细胞体外黏附实验、Transwell小室体外侵袭实验、免疫印迹技术等观察IL-6对卵巢癌细胞黏附、侵袭能力的影响,并对其可能的信号通路进行研究。结果与对照组相比,内源性过表达IL-6可促进卵巢癌细胞的体外黏附和侵袭功能;抑制IL-6表达则可抑制卵巢癌细胞的上述功能。过表达或抑制表达IL-6可增加或减少卵巢癌细胞磷酸化ERK、Akt的表达水平,应用ERK或Akt特异性信号阻断剂可显著抑制高表达IL-6的卵巢癌细胞黏附和侵袭作用,提示可能与其活化Ras/MEK/ERK、PI3K/Akt通路有关。结论卵巢癌细胞产生的IL-6可经Ras/MEK/ERK和PI3K/Akt通路增强自身的黏附和侵袭能力,调节IL-6表达及相关信号转导通路可能是未来临床控制卵巢癌进展的一种良好策略。

ERK1/2、MEK1/2在盆腔器官脱垂患者子宫骶韧带组织中的表达

目的:研究ERK1/2、MEK1/2在盆腔器官脱垂(POP)患者子宫骶韧带组织中的表达及意义。方法:选择30例因POP行子宫切除术或盆底重建术的患者为POP组,POP定量分期评分均为Ⅲ~Ⅳ度;选择同时期33例因非盆底功能障碍性疾病行子宫切除术的患者为对照组,POP定量分期评分均为0~Ⅰ度。收集患者术中废弃的近宫颈处子宫骶韧带组织,采用HE及Masson染色评估其组织学表现,采用免疫组化法和Western blot法检测ERK1/2、p-ERK1/2、MEK1/2、p-MEK1/2的表达情况。结果:POP组子宫骶韧带组织学结构明显区别于对照组,且ERK1/2、p-ERK1/2、MEK1/2、p-MEK1/2的相对表达量及p-ERK/ERK、p-MEK/MEK比值均低于对照组(P<0.05)。结论:ERK1/2与MEK1/2在POP患者子宫骶韧带组织中表达减少以及p-ERK/ERK和p-MEK/MEK比值降低可能与POP的发生有关。