中药毛稔对伤口愈合的治疗效果与机制预测

目的探究中药毛稔对伤口的愈合的治疗效果并探讨其潜在的作用机制。方法采取药物水煎法获取中药毛稔原液,按50倍、100倍、200倍、400倍稀释后作用于体外培养的人角质形成细胞HaCaT,研究分为对照(CON)组、实验(M50,M100,M200,M400)组,CCK8法检测细胞活力,划痕模型检验伤口愈合效果;液相色谱-质谱联用分析毛稔的代谢产物并构建药物-疾病-靶点相互作用网络预测中药毛稔干预伤口愈合的机制。结果与CON组相比,M50、M100、M200、M400组HaCaT细胞相对增殖率[(112.59±2.04)%、(119.04±2.15)%、(128.40±1.10)%、(133.72±2.83)%]增加(P<0.05)。M400组划痕愈合率在12 h和24 h[(86.93±4.90)%、(95.13±3.70)%]高于CON组[(36.29±2.97)%、(85.01±2.10)%],差异具有统计学意义(P<0.05)。非靶向代谢组学筛选中药毛稔有效活性成分539个,活性成分作用靶点与伤口愈合相交靶点592个。富集分析结果显示,交集靶点主要参与2655个生物过程,富集于92个细胞组分,主要涉及164个分子功能,并涉及180条信号通路。结论中药毛稔能够促进HaCaT细胞增殖和划痕损伤后愈合,可能通过亚麻酸甘油酯、白桦脂醇、L-色氨酸、桑黄素等活性成分作用于TNF、SRC、TP53等靶点达到治疗创伤的作用,其潜在机制可能与PI3K-Akt等信号通路有关,有望成为治疗创伤的有效药物。

毛稔叶片离体培养及植株再生研究

以毛稔叶片作为外植体,MS为基本培养基,研究不同种类激素的浓度配比对毛稔叶片离体再生的影响。结果表明,黑暗条件与光照12 h·d-1有利于毛稔愈伤组织形成,毛稔叶片愈伤组织最佳诱导培养基为MS+0.5 mg·L-16-BA+2.0 mg·L-12,4-D+0.1 mg·L-1NAA,光照12 h·d-1诱导40 d,愈伤诱导率为96%;叶片形成的愈伤组织分化率极低,分化率随6-BA浓度升高而升高,愈伤组织分化最适培养基为MS+0.1 mg·L-1NAA+2.0 mg·L-16-BA,分化率为10%;最适生根培养基为1/2 MS+0.1 mg·L-1NAA,生根率为88.89%。

毛菍传粉生物学研究

为探讨毛菍(Melastoma sanguineum Sims)传粉生物学特性,对海南霸王岭国家级自然保护区林缘、林内和林隙3个生境内毛菍的花期、花部形态、访花昆虫等进行观察,同时对其繁育系统相关指标进行了测定。结果表明:毛菍无花蜜分泌;花瓣对访花昆虫有吸引作用;访花昆虫主要有蜂类、食蚜蝇类和丽金龟类;主要传粉昆虫有木蜂、熊蜂,其中木蜂传粉活动最为活跃,为最有效传粉昆虫。毛菍具典型的异型雄蕊,长、短雄蕊在传粉过程中具有明确的功能分化,推测这是毛菍保证传粉成功的策略。毛菍为自交亲和的异交种,需要昆虫传粉;人工自交和异交均具有较高的坐果率;不存在无融合生殖、主动自花授粉和滞后自交的生殖保障现象;其繁育系统是兼性自交。昼夜温差较小和相对湿度较高的林内和林隙生境有利于延长群体花期;光照充足、温度相对较高的林缘生境,花朵发育较快,柱头可授性的时间稍早。花粉、传粉者和环境条件是制约毛菍野外传粉效率的主要因素。

毛菍茎段离体培养

为加速优良母株的无性繁殖，以嫩梢茎段为材料，进行了毛惹快繁技术的研究。结果表明：离体培养的毛葱茎段腋芽萌发后可以形成丛生芽，MS培养基添加6-BA013～2．0mg／L时芽增殖系数达到3．6～6．5倍；在培养基1／2MS＋NAA0．1～0．5mg／L中试管苗生根率均达到100％；在水帘温室内只需常规管理，试管苗移栽成活率超过95．0％。培养基添加300mg／L活性炭对毛慈芽的增殖和根的诱导均产生不利影响。