MT2受体介导褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用

目的探讨褪黑素(MLT)通过褪黑素膜受体MT2抑制小鼠前胃癌(MFC)细胞增殖及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)-Akt信号通路的关系。方法应用siRNA技术沉默MT2表达,观察褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用及ERK1/2、Akt的磷酸化的影响。结果 1.siRNA介导的MT2沉默能明显拮抗褪黑素对胃癌细胞增殖的抑制作用;2.沉默MT2可部分阻断褪黑素抑制ERK1/2、Akt磷酸化的作用。结论褪黑素可通过MT2受体抑制ERK1/2、Akt的磷酸化从而抑制胃癌细胞增殖。

褪黑素在小鼠脊髓背角神经元发挥镇痛效应的受体机制研究

目的研究神经病理性痛状态下,褪黑素(MLT)是否在脊髓水平参与镇痛效应的调节及其可能的受体机制。方法采用雄性C57BL/6小鼠,进行坐骨神经部分损伤(SNI)模型及假手术(Sham)造模,7 d后鞘内分别给予MLT以及MLT不同受体激动剂和/或拮抗剂,运用von Frey丝测试比较SNI组及Sham组给药前后小鼠机械刺激缩足反应阈值,即机械痛阈值的变化。以雄性C57BL/6和转基因小鼠为研究对象,采用免疫荧光染色技术明确不同类型脊髓背角神经元上MLT受体的表达情况。通过膜片钳技术比较SNI造模及Sham术药物干预前后,脊髓背角神经元兴奋性的改变。结果与Sham组相比,SNI组小鼠的机械痛阈值明显降低(P<0.05);鞘内给予MLT和Ramelteon(MT1/MT2受体激动剂)均能显著恢复SNI组小鼠的机械痛阈值(P<0.05),但同时给予Ramelteon+4PP(MT2受体拮抗剂)后SNI组小鼠的机械痛阈值未恢复。免疫荧光结果表明,MT2广泛分布于小鼠脊髓背角的兴奋性神经元。膜片钳实验发现,与Sham组相比,SNI组脊髓背角兴奋性神经元的动作电位基强度明显降低(P<0.05),静息电位绝对值减小(P<0.05),并且MT2受体激动剂(8MP)可以逆转上述变化(P<0.01)。结论神经病理性痛状态下,MLT在脊髓水平显著缓解SNI小鼠的机械性痛敏,且其镇痛效应是通过MT2介导的。

褪黑素受体信号通路在2型糖尿病中的作用

褪黑素是松果体分泌的激素,能调节包括睡眠在内的诸多生理过程。褪黑素通过与其受体特异性结合而在中枢和外周都发挥功能。胰腺β细胞中,褪黑素受体介导的信号通路可影响胰岛素的分泌以及β细胞的功能,并可通过提高5-羟色胺-N-乙酰基转移酶的活性来促进褪黑素的生成,而上调的褪黑素可抑制胰岛素的分泌,升高血糖。

人HUT78细胞褪黑素受体的基因与蛋白表达的研究

为了检测人HUT78细胞是否存在褪黑素受体(melatoninreceptor,MR)及其亚细胞分布特点 ,采用异硫氢酸胍 苯酚 氯仿一步法抽提总RNA ,进一步通过RT PCR方法检测MR亚型mt1和MT2 的mRNA ,并将RT PCR的阳性产物通过自动测序仪测序 ;同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2 受体亚型蛋白在HUT78细胞内的分布特点。RT PCR方法则得到了 3 68bpmt1cDNA片段 ,无 3 2 1bpMT2 cDNA片段 ,同时将mt1阳性条带通过胶回收、测序 ,结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合 ;免疫组化结果显示 ,人HUT78细胞存在mt1受体蛋白 ,主要分布于细胞膜和细胞浆 ,呈棕褐色阳性颗粒 ,而细胞核上未见阳性颗粒 ,MT2 受体蛋白则未检出。提示褪黑素 (melatonin,Mel)对T淋巴细胞具有直接调节作用 。

下丘脑褪黑素受体亚型基因及蛋白表达的研究(英文)

目的 :应用 PT- PCR技术和免疫组织化学染色显示人胚胎下丘脑褪黑素受体及其亚型的分布。方法 :取人胚胎下丘脑组织 ,抽提总 RNA并应用 RT- PCR方法检测其 m RNA,扩增所得阳性产物用自动测序仪测序 ;石蜡包埋下丘脑组织 ,应用鼠抗人 m t1 和 MT2 受体单克隆抗体分别检测褪黑素 mt1 和 MT2 受体亚型 m RNA及其蛋白的表达。结果和结论 :人胚胎下丘脑组织中存在 m t1 和 MT2 受体亚型 m RNA的表达及其蛋白的翻译 ,提示在该组织中有 m t1 和 MT2

褪黑素及其受体与2型糖尿病

褪黑素的分泌呈现昼低夜高的模式，而胰岛素分泌则与之相反。褪黑素对胰岛素的释放具有抑制作用，这主要是通过胰岛G细胞的褪黑素膜受体和胞内第二信使来实现的。在2型糖尿病患者和大鼠模型中，其血清褪黑索水平降低，且大鼠松果体内的5-羟色胺-N-乙酰基转换酶（AA—NAT）活性也降低。有关褪黑素受体基因多态性研究发现，褪黑素受体1B基因突变的个体发生2型糖尿病的风险增加。因此，阻断褪黑素对胰岛素的抑制作用可能为防治2型糖尿病开辟新的途径。

电针通过褪黑素受体2抑制脊髓背角星形胶质细胞分泌IL-17对神经病理性痛大鼠产生镇痛作用

目的:观察褪黑素(Mel)受体2(MT2)是否参与电针对神经病理性痛大鼠的镇痛作用,以脊髓背角星形胶质细胞分泌白细胞介素17(IL-17)为研究切入点,探讨其可能机制。方法:先将18只大鼠分为假手术组、模型组、电针组,每组6只。采用坐骨神经慢性压迫法(CCI)制备大鼠神经病理性疼痛模型。电针组在造模后第7天电针"足三里""三阴交"。在造模前、造模后第7天和电针后60 min时检测大鼠患肢机械痛阈值(MWT)和热敏痛阈值(TPT);采用Western blot法检测脊髓背角MT2表达量,ELISA法检测Mel和IL-17含量,Western blot法和免疫组织化学法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达量。再将30只大鼠分成假手术组、模型组、电针组、MT2拮抗剂(4-P-PDOT)组、二甲亚砜(DMSO)组,每组6只。4-P-PDOT组和DMSO组大鼠在电针前30 min分别鞘内注射10μL MT2拮抗剂4-P-PDOT(100μg)和10μL DMSO。检测大鼠患肢MWT和TPT;Western blot法和免疫组织化学法检测脊髓背角GFAP表达量,ELISA法检测IL-17含量。最后将30只大鼠分成假手术组、模型组、电针组、重组IL-17组、生理盐水组,每组6只。在电针前30 min,重组IL-17组和生理盐水组大鼠分别鞘内注射10μL重组IL-17蛋白(100 ng)和10μL 0.9%氯化钠溶液。检测各组大鼠患肢MWT和TPT。结果:造模后第7天,模型组及电针组大鼠MWT较造模前明显升高(P<0.05),TPT较造模前明显下降(P<0.05)。在电针后60 min时,与模型组比较,电针组MWT明显下降(P<0.05),TPT明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠脊髓背角GFAP表达量和IL-17含量明显增加,Mel含量和MT2表达量明显减少(P<0.05)。与模型组比较,电针组大鼠脊髓背角GFAP表达量和IL-17含量明显减少(P<0.05),Mel含量和MT2表达量明显增加(P<0.05)。与电针组和DMSO组比较,4-P-PDOT组大鼠MWT明显升高(P<0.05),TPT明显下降(P<0.05),GFAP表达量和IL-17含量也明显增加(P<0.05)。与电针组和生理盐水比较,重组IL-17组大鼠MWT明显升高(P<0.04),TPT明显下降(P<0.05)。结论:电针可增加CCI大鼠脊髓背角Mel含量和MT2表达量,抑制脊髓背角星形胶质细胞激活和IL-17释放。4-P-PDOT可逆转电针抑制CCI大鼠脊髓背角星形胶质细胞激活和IL-17释放,同时4-P-PDOT和重组IL-17可逆转电针对CCI大鼠的镇痛作用。推测电针可能是通过MT2抑制星形胶质细胞释放IL-17,从而对CCI大鼠产生镇痛作用。