蜂毒素抗骨肉瘤裸鼠移植瘤的作用及对肿瘤血管生成拟态的影响

目的:探讨蜂毒素抗裸鼠骨肉瘤的作用及对肿瘤血管生成拟态的影响。方法:体外建立matrigel胶三维培养系统,观察蜂毒素对骨肉瘤UMR-106细胞血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)形成的影响;建立裸鼠骨肉瘤胫骨移植瘤模型,分为0.9%氯化钠溶液组、蜂毒素组(320μg/kg)、顺铂组(2mg/kg),瘤内注射给药10d,观察小鼠的肿瘤抑制率和瘤体质量抑制率;用CD34与PAS双重染色观察骨肉瘤VM密度;免疫组织化学法和Western印迹法检测肿瘤组织中缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)蛋白的表达。结果:蜂毒素在体外可以破坏骨肉瘤细胞的血管状结构;体内对骨肉瘤的瘤体质量抑制率为38.92%,体积抑制率为43.04%。蜂毒素组VM密度、HIF-1α、MMP-2蛋白的表达水平均明显低于0.9%氯化钠溶液组(P<0.01)。结论:蜂毒素能明显抑制UMR-106骨肉瘤裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与下调HIF-1α、MMP-2蛋白的表达、抑制骨肉瘤VM有关。

三种抗肿瘤中药有效成分对人脐静脉内皮细胞生长的影响

目的探讨蜂毒素、去甲斑蝥素、蟾毒灵3种抗肿瘤中药提取物的抗血管生成作用,并检测其量效关系,比较其抑制血管生成所需浓度与抑瘤浓度的关系。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3种药物在不同浓度、时间对人肝癌细胞ECV304生长的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50),观察量效、时效关系。结果 3种药物对ECV304细胞的生长有不同程度抑制作用(P<0.05或P<0.01),且呈浓度和时间的依赖性。蜂毒素在24、48和72h抑制ECV304细胞的IC50分别为7.64、4.25和2.64μg/ml,去甲斑蝥素为271.52、108.83和80.76μg/ml,蟾毒灵为1.104、0.355和0.0905μg/ml。结论蜂毒素、去甲斑蝥素、蟾毒灵有明确的抑制血管内皮细胞增殖、抗血管生成的作用。

蜂毒素的体内外抗肿瘤研究

目的研究蜂毒素(melittin)在体内、外对H22细胞的增殖抑制作用,初步探讨其机制。方法通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测melittin对H22细胞的增殖抑制情况;腹腔注射浓度为1、2、4 mg/(kg.d)的melittin,给药10d,观察melittin对荷瘤小鼠的肿瘤抑制以及机体免疫变化情况。结果melittin在体外对H22细胞有明显的抑制作用;体内实验表明浓度为2、4 mg/(kg.d)的melittin能够增强机体免疫力,对荷瘤小鼠肿瘤有着较强的抑制作用,且效果随剂量的增大而增强。结论melittin在体外、体内均对H22细胞有着较强的抑制作用,可能通过增强机体免疫而产生作用。

携蜂毒素基因重组腺病毒对HepG2细胞甲胎蛋白和基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的观察以甲胎蛋白转录调控序列(transcription regulatory element of-αfetoprotein,rAFP)驱动蜂毒素基因转录的重组腺病毒对肝癌细胞生物学性状的影响。方法将蜂毒素基因置于rAFP之后,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病毒质粒中,重组质粒在293细胞中进行腺病毒的包装。携有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌细胞后,逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)观察蜂毒素基因的转录;甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定蜂毒素基因转染对肝癌细胞增殖的影响;酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法定量检测甲胎蛋白(-αfetoprotein,AFP);流式细胞术检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotein-ase-2,MMP-2)分子表达情况。结果重组腺病毒载体构建成功,体外转染HepG2肝癌细胞后,蜂毒素基因在rAFP的控制下,可以抑制AFP阳性肝癌细胞的增殖,明显降低其AFP的生成量,但MMP-2分子的表达却是升高的。结论蜂毒素基因转染肝癌细胞后,可改变肿瘤细胞的部分生物学行为,使其表达谱发生改变。

携蜂毒素基因重组腺病毒载体的构建

目的构建含巨细胞病毒 (cytomegalovirus ,CMV)启动子或甲胎蛋白 (α fetoprotein ,AFP)调控序列驱动下的蜂毒素基因的重组腺病毒 ,进行体外抗肿瘤效果的比较。方法人工合成蜂毒素基因时 ,用Kozak序列优化翻译起始区 ,并进行人类最适密码子的转换 ,然后置于CMV启动子或AFP调控序列之后 ,用细菌内高效同源重组法构建腺病毒质粒 ,脂质体转染 2 93细胞进行包装。结果目的基因成功地重组人腺病毒质粒。结论上述蜂毒素 腺病毒载体构建时的几个特点 ,有助于载体的顺利构建 。

蜂毒素对大鼠血小板内钙浓度的影响

应用Ｆｕｒａ－２作为荧光试剂，测定大鼠血小板细胞内Ｃａ^（２＋）浓度变化。蜂毒素１．５ｍｇ／Ｌ使血小板细胞内Ｃａ^（２＋）浓度增加；悬液中加入ＣａＣｌ＿２１ｍｍｏｌ／Ｌ，血小板细胞内Ｃａ^（２＋）继续增加。维拉帕米３．１２５ｍｇ／Ｌ作用５ｍｉｎ后，蜂毒素仍可使血小板内Ｃａ^（２＋）增加．但加入ＣａＣｌ２血小板Ｃａ^（２＋）的浓度不再增加。提示蜂毒素促进大鼠血小板细胞内Ｃａ^（２＋）的释放和细胞外Ｃａ^（２＋）进入细胞内。

蜂毒肽MP-1对内毒素血症小鼠急性肺损伤保护作用的研究

目的探讨蜂毒肽MP-1对内毒素血症（ETM）小鼠急性肺损伤的保护作用。方法尾静脉注射内毒素（LPS）5mg/kg制备ETM小鼠模型。动物随机分为正常对照组（n=8）、ETM组（n=48）和MP-1治疗组（n=48,注射LPS的同时注射MP-1 3mg/kg）。ETM组和MP-1组分别于注射LPS后2、6、12、24、48、72h处死动物,采集血浆和肺组织标本,动态比浊法鲎试验检测各时相点血浆LPS水平,ELISA法检测血浆TNF-α和IL-6水平,real-ti me RT-PCR检测肺组织Toll样受体4（TLR4）、TNF-α和IL-6 mRNA表达,分光光度法检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性,并观察伤后12h肺组织的病理变化。结果ETM小鼠伤后2-48h血浆LPS、TNF-α和IL-6水平显著增高（P〈0.01）,肺组织TLR4、TNF-α、IL-6 mRNA表达和MPO活性也明显增强（P〈0.05或P〈0.01）。MP-1治疗可不同程度降低血浆LPS和各细胞因子水平（P〈0.05或P〈0.01）,抑制肺组织相关基因表达及减低MPO活性（P〈0.05或P〈0.01）,并可减轻肺组织的病理损伤。结论MP-1可能通过中和LPS,减少LPS诱导的炎症介质的合成与释放,进而减轻炎症介质对肺组织的损伤。

杂合肽CAME^m诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用

目的研究杂合肽(cecropinA-melittinhybridpeptidemutant,CAMEm)对鼻咽肿瘤细胞的诱导调亡作用。方法选取鼻咽癌CNE2细胞株为靶细胞,3T3细胞为正常细胞,以MTT比色法和Hoechest33342染色法,应用流式细胞仪和DNA凝胶电泳观察CAMEm对CNE2细胞的诱导调亡作用,检测杂合肽对CNE2细胞和3T3细胞生长抑制作用的时效和量效关系。结果与对照组相比,当5mg/LCAMEm作用12h时,抑制率升高,P<0·05;125mg/LCAMEm作用12h时,抑制率显著升高,P<0·01。0·5mg/L的CAMEm作用12h时,可以观察到调亡小体的产生;0·5、5、10和25mg/LCAMEm诱导CNE2细胞的调亡率分别达14·60%、17·42%、21·80%和36·10%,诱导调亡作用与剂量和时间呈明显正相关。CAMEm对3T3细胞没有显著影响。结论杂合肽CAMEm对CNE2细胞株具有明显诱导调亡作用,而且对正常细胞没有显著杀伤作用。

蜂蜇伤战士血清相关蛋白分析

目的分析蜂蜇伤战士与正常人血清中蛋白质图谱之间表达差异。方法分别收集来源于解放军181医院于2008年10月—2010年2月收集的11例蜂蜇伤国防战士标本和8例健康人的血清标本进行双向凝胶电泳(2-DE)检测。通过基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定蜂蜇伤患者的血清蛋白质中存在显著差异的蛋白质点。结果在蜂蜇伤战士的血清中存在5个新增蛋白质点,3个蛋白点上调,7个蛋白点下调,其中包括KRT10角蛋白Ⅰ型、KRT1角蛋白Ⅱ型、触珠蛋白相关蛋白、触珠蛋白HP、HPR蛋白、α2-巨球蛋白、β血影蛋白brain1。结论采用固相pH梯度2-DE分离鉴定血清蛋质组能够获得很好的实验重复性。蜂蜇伤患者与正常人血清存在差异表达蛋白,为进一步研究蜂蜇伤相关生物标记提供理论基础及指导。

纯化蜂毒肽对兔免疫性关节炎的抑制作用

目的 观察纯化的蜂毒肽对兔免疫性关节炎的病理过程是否有抑制作用。方法 采用柱层析方法纯化粗制蜂毒 ,以除去具有溶血及化学刺激作用的杂质。纯化物经CD光谱法和荧光光谱法 ,高压液相色谱分析及氨基酸序列分析。造成家兔卵蛋白性关节炎模型 ,给予蜂毒肽肌肉注射 ,观察组织炎症反应的变化。并测定兔血红蛋白水平 ,进行了体外溶血实验。结果 高压液相色谱分析显示单峰 ,CD光谱法和荧光光谱法、高压液相色谱分析氨基酸序列分析显示纯化物氨基酸序列与文献报道峰毒肽一致。实验组应用纯化蜂毒肽后 ,滑膜炎症明显减轻。溶血实验显示 ,纯化蜂毒肽只有较弱的溶血作用。结论 纯化蜂毒肽对兔免疫性关节炎具有良好的抗炎作用 ,并且溶血作用较弱。

蜂毒素对大鼠离体心房的作用

目的：研究蜂毒素（Ｍｅｌ）对大鼠心脏的作用．方法：采用大鼠离体心房，测定给药前后心房率，心收缩力，左房休息后加强及阶梯现象．结果：Ｍｅｌ２００ｍｇ·Ｌ－１对大鼠右心房产生正性频率作用，可被Ｖｅｒ０１μｍｏｌ·Ｌ－１拮抗．Ｍｅｌ２５ｍｇ·Ｌ－１抑制左心房休息后加强，并使正性阶梯现象产生翻转．Ｍｅｌ抑制左右心房收缩力．结论：Ｍｅｌ具正性频率作用和负性肌力作用．

蜂毒肽对前列腺癌PC-3细胞凋亡诱导的影响

目的：研究蜂毒肽（Melittin）对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及可能机制。方法实验设立空白对照组和蜂毒肽不同浓度组，用MTT方法检测细胞增殖，Hoechst 33258染色检测细胞凋亡，RT-PCR检测p27、p53 mRNA表达，Western blot检测蛋白表达。结果与对照组比较，蜂毒肽作用24、48、72 h后，4、8、16、32μg/mL组MTT检测OD值明显降低，细胞凋亡率明显增高（P＜0.05），作用48h后，p27、p53 mRNA表达明显升高（P＜0.05），p53和 Caspase3蛋白含量增高。结论蜂毒肽对PC-3细胞有凋亡诱导作用，其作用机制可能与增高p27、p53、Caspase3表达相关。

蜂毒注射液在结核性渗出性胸膜炎中的应用

目的探讨蜂毒注射液在结核性胸膜炎中的治疗作用。方法选择结核性渗出性胸膜炎患者60例,随机分为对照组和治疗组,对照组应用2HRZE/4HR方案抗痨治疗,治疗组在上述抗痨基础上,胸腔注入蜂毒注射液。结果两组有效率均为100%,治疗组显效率90%,对照组显效率为63%,两组对比,疗效差异有统计学意义(P<0·05),胸水吸收时间治疗组明显短于对照组(P<0·01)。结论蜂毒注射液在结核性胸膜炎的治疗中不失为一种有效的治疗方法。