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Protein transduction domain of membrane penetrating peptide can efficiently deliver DNA and protein into mouse liver for gene therapy 被引量:4
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作者 Jun Xie, Bao-Feng Yu, Jun Xu, Yue-Hong Zhang, Niu-Liang Cheng, Bo Niu, Xiao-Nian Hu, Qian Xiang and Zheng-Guo Zhang Taiyuan, China Department of Biochemistry and Molecular Biology, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001 , China Peking Union Medical College, Chi- nese Academy of Medical Sciences, Beijing 100005, China 《Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International》 SCIE CAS 2005年第1期90-93,共4页
BACKGROUND: The development of a harmless and effi- cient nonviral gene delivery system that can facilitate the penetration of nucleic acids through the plasma membrane is a key to successful gene therapy. The aim of ... BACKGROUND: The development of a harmless and effi- cient nonviral gene delivery system that can facilitate the penetration of nucleic acids through the plasma membrane is a key to successful gene therapy. The aim of this study was to test a nonviral gene transferring vector's function of delivering DNA into liver cells to provide an important clue for gene transfer in liver gene therapy. METHODS: The complex of DNA and DNA delivering protein was injected into mice through their tail veins. Then the mice were killed and their liver tissue was sec- tioned. The gene transferring results were detected using a confocal laser scanning microscope. RESULTS: Fluorescence analysis indicated that both DNA- membrane penetrating peptide (MPP) complex and DNA- hepatocyte specific receptor binding domain ( HSRBD) - MPP complex could go into liver cells. The fluorescence value of liver cells in the DNA-HSRBD-MPP group was higher than that in the DNA-MPP group. CONCLUSIONS; MPP can successfully deliver DNA and protein into cells, and MPP with a HSRBD can specifically deliver DNA into liver cells. These have laid a foundation for further study on the nonviral liver cell gene delivering system. 展开更多
关键词 membrane penetrating peptide gene therapy gene delivering
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利用1型糖尿病小鼠模型分析犬成纤维生长因子21的长效降糖效果
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作者 郭云鹏 牛顿 +4 位作者 李爽 姜兴昊 张立夏 任桂萍 尹杰超 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期770-784,共15页
本研究分别将Fc片段、穿膜肽R11和穿膜肽TAT与犬成纤维生长因子21(canine fibroblast growth factor 21,cFGF-21)相连构建了3种融合蛋白,旨在探讨cFGF-21对1型糖尿病的长效降糖作用。用链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,随后分别用... 本研究分别将Fc片段、穿膜肽R11和穿膜肽TAT与犬成纤维生长因子21(canine fibroblast growth factor 21,cFGF-21)相连构建了3种融合蛋白,旨在探讨cFGF-21对1型糖尿病的长效降糖作用。用链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,随后分别用cFGF-21、R11-cFGF-21、Fc-cFGF-21和TAT-cFGF-21治疗。治疗分为3个阶段:1)每天给药一次(第1~14天);2)每3 d给药一次(第15~29天);3)每5 d给药一次(第30~44天)。在治疗过程中,每隔3 d检测一次小鼠血糖,在每阶段结束时检测试验小鼠12 h内血糖波动。试验结束前,对所有小鼠进行口服葡萄糖耐量试验。通过ELISA法检测小鼠血清中炎症相关因子IL-10、IL-1β、IL-17A和抗炎因子IL-10表达水平。通过Real-time PCR检测肝、脂肪、肠和肾等组织中的糖代谢相关因子的转录水平。试验结束后,对所有小鼠进行糖基化血红蛋白(HbA1c)、血脂四项和肝功能、血清胰岛素和HbA1c检测并对小鼠胰腺组织进行病理分析。结果显示:在治疗的第一阶段,与cFGF-21组相比,TAT-cFGF-21降糖效果明显降低,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组没有显著差异;在治疗的第二、三阶段,与cFGF-21组相比,TAT-cFGF-21组血糖明显上升,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组可在给药3~5 d内能将血糖控制在更低的水平。治疗8周后,与cFGF-21组相比,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组口服葡萄糖耐量(OGTT)和血脂紊乱明显改善,糖化血红蛋白(HbA1c)接近正常水平,肝损伤明显修复,而TAT-cFGF-21组与cFGF-21组没有明显差距。此外,ELISA检测和HE染色结果显示,相较cFGF-21和TAT-cFGF-21组,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组氧化应激和炎症反应得到显著改善且胰岛β细胞修复效果明显。经R11和Fc修饰的cFGF-21长效降糖能力的显著增加,而TAT-cFGF-21长期的降血糖能力较弱。此外,经R11和Fc修饰的cFGF21能显著改善氧化应激、胰腺炎症和脂质代谢,修复肝损伤和胰岛β细胞,治疗效果明显优于cFGF21。 展开更多
关键词 犬糖尿病 成纤维细胞生长因子-21 cFGF-21 Fc 穿膜肽 长效性
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hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白的制备、穿膜效应及其抗氧化、抗炎症功效
3
作者 张洁 姚君妍 +4 位作者 杨英桂 王飞 郑清友 李欣 柳长柏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1059-1069,共11页
目的 探究人源性细胞膜穿透肽hPP10携带人源性抗氧化蛋白Cu,Zn-SOD的穿膜效应并观察其抗氧化、抗炎功效。方法利用RT-PCR技术扩增人源性SOD基因片段、酶切连接法构建重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD;利用镍柱亲和层析... 目的 探究人源性细胞膜穿透肽hPP10携带人源性抗氧化蛋白Cu,Zn-SOD的穿膜效应并观察其抗氧化、抗炎功效。方法利用RT-PCR技术扩增人源性SOD基因片段、酶切连接法构建重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD;利用镍柱亲和层析法、分子筛方法纯化Cu,Zn-SOD、hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白并利用Western blotting法鉴定其正确性;利用免疫荧光法、荧光共定位实验、Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD在细胞中的穿膜效应;利用Western blotting法鉴定hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白穿膜时间梯度和浓度梯度效应;利用SOD酶活性测定试剂盒检测hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后的SOD酶活性;利用MTT法检测hPP10对细胞活性的影响。利用H2O2建立HEK293氧化应激细胞模型,通过流式细胞分析术(FCM)分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后细胞凋亡情况;并RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后凋亡相关因子的表达情况;通过ROS检测分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后抗氧化能力。TPA诱导建立小鼠耳部炎症模型(5只/组,共4组),然后RT-qPCR分析hPP10-Cu,Zn-SOD穿膜后,NFκB,IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录情况;Western blotting检测NFκB p65、p-NFκB p65、IL-1β、TNFα基因的表达;免疫组化分析炎性因子p-NFκB p65、TNFα基因的表达。结果 成功构建了重组质粒pET15b-Cu,Zn-SOD,pET15b-hPP10-Cu,Zn-SOD,并获得Cu,Zn-SOD蛋白和hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白;免疫荧光试验结果表明5μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD转导HEK293细胞具有明显的穿膜效应;荧光共定位实验显示融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD入胞后定位在细胞膜内,部分蛋白定位在细胞核内;Western blotting实验结果表明hPP10-Cu,Zn-SOD转导Hela(P<0.05),HEK293(P<0.01)细胞具有浓度依赖性,细胞内hPP10-Cu,Zn-SOD存在可持续24 h;5μmol/L的hPP10-Cu,Zn-SOD转导细胞具有较好的抗氧化活性(P<0.01);MTT结果显示高达10μmol/L浓度的hPP10-Cu,Zn-SOD对于细胞活力的影响小。在氧化应激模型中,FCM结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞降低了细胞的早期凋亡(P<0.01)和晚期凋亡(P<0.05);RT-qPCR结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞使Bcl2、Mcl1、Deptor等抗凋亡因子升高(P<0.05),降低了Bad、P21、P27等促凋亡因子的表达(P<0.05);ROS结果显示hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白孵育细胞显著降低了细胞内的活性氧含量(P<0.01)。在炎症模型中,hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白可显著降低IL-1β、IL-6、TNFα因子的转录(P<0.05);p-NFκB p65、IL-1β及TNFα的表达都呈现了抑制作用(P<0.05);hPP10-Cu,Zn-SOD融合蛋白处理组较Cu,Zn-SOD蛋白处理组,降低了炎性因子p-NFκB p65及TNFα基因的表达(P<0.05)。结论 融合蛋白hPP10-Cu,Zn-SOD具有明显的穿膜入胞、抗氧化、抗炎功效,且对细胞毒副作用很小。这些结果为hPP10作为新的递送载体奠定基础,也为hPP10-Cu,Zn-SOD应用于护肤品等提供了理论依据。 展开更多
关键词 人源性细胞膜穿透肽hPP10 铜锌超氧化物歧化酶Cu Zn-SOD 抗氧化 抗炎 酶活力测定
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非内吞依赖型生物大分子药物胞质递送策略研究进展
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作者 袁静静 郑宇钊 +1 位作者 徐晨枫 殷婷婕 《广西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第1期1-8,共8页
生物大分子药物由于具有高效、高特异性等优点,已成为新一代治疗药物的重要组成部分,但其分子稳定性差、易被酶解、难以跨越生物膜。传统的生物大分子药物纳米递送策略的有效性主要受限于溶酶体逃逸效率低,针对性开发非内吞依赖型的胞... 生物大分子药物由于具有高效、高特异性等优点,已成为新一代治疗药物的重要组成部分,但其分子稳定性差、易被酶解、难以跨越生物膜。传统的生物大分子药物纳米递送策略的有效性主要受限于溶酶体逃逸效率低,针对性开发非内吞依赖型的胞质直接递送策略具有重要意义。本文综述细胞穿透肽、低pH插入肽、清道夫受体介导的非内吞作用、膜融合、内质网途径、硫醇介导、基于液-液相分离技术的非内体捕获型生物大分子药物胞内递送策略的效应机制和研究进展,并分析了技术转化难点。 展开更多
关键词 生物大分子药物 细胞穿透肽 巯醇 入胞 内质网途径 膜融合
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铜绿假单胞菌噬菌体vB_PaeM-YQ78生物学与基因组特征及其裂解酶的改造 被引量:1
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作者 孙素越 于姣阳 +6 位作者 王卫晓 董慧 卢晓亮 韩丽梅 王世伟 胡春梅 陈伟 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1037-1047,共11页
目的从医院废水中筛选并鉴定铜绿假单胞菌烈性噬菌体,表达和优化其裂解酶。方法以收集的临床铜绿假单胞菌为宿主菌,分离纯化烈性噬菌体,并深入鉴定其中一株裂解能力强的广谱噬菌体的生物学特性,分析其基因组特征和进化特征,表达和改造... 目的从医院废水中筛选并鉴定铜绿假单胞菌烈性噬菌体,表达和优化其裂解酶。方法以收集的临床铜绿假单胞菌为宿主菌,分离纯化烈性噬菌体,并深入鉴定其中一株裂解能力强的广谱噬菌体的生物学特性,分析其基因组特征和进化特征,表达和改造噬菌体裂解酶,测定噬菌体与抗生素的协同杀菌作用以及不同穿膜辅助剂对于裂解酶杀菌活性的影响。结果噬菌体vB_PaeM-YQ78是一株新的铜绿假单胞菌肌尾噬菌体,潜伏期为10 min,裂解量为43;最佳感染复数为0.00001;在40℃以下和pH 5~10范围内保持稳定。噬菌体与环丙沙星具有较强的协同作用,在24 h内无突变菌株生长。不使用穿膜辅助剂时,裂解酶LysYQ78在1 h内能将多重耐药铜绿假单胞菌降低1个log单位,在添加5 mmol/L EDTA时,LysYQ78可以将细菌浓度降低6个log单位。将ApoE蛋白N端穿膜肽融合到LysYQ78的N端后,Lys1410-YQ78的杀菌活性得到显著提高,可以在1 h内将宿主菌浓度降低2个log单位。结论本实验分离鉴定了一株新的铜绿假单胞菌烈性噬菌体,其具有较宽的宿主谱,与环丙沙星具有较强的协同作用。并且,其裂解酶本身就可以穿透细胞外膜,展现杀菌活性,而与穿膜肽融合后,杀菌活性得到显著增强。本实验的裂解酶改造为进一步优化提供了思路,为将来铜绿假单胞菌的噬菌体治疗提供新的选项。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 协同作用 裂解酶 穿膜肽
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抗菌肽对细菌杀伤作用的分子机制 被引量:17
6
作者 吴希 张双全 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1109-1113,共5页
抗菌肽是一类新型的抗菌物质,从最低等的生物病毒、细菌到高等的动植物都有广泛分布.以往的研究主要集中于抗菌肽对细菌细胞膜的作用机制,已经构建了三种作用模式.但近几年的研究表明,很多抗菌肽都能有效地穿过细菌的细胞膜,直接与胞内... 抗菌肽是一类新型的抗菌物质,从最低等的生物病毒、细菌到高等的动植物都有广泛分布.以往的研究主要集中于抗菌肽对细菌细胞膜的作用机制,已经构建了三种作用模式.但近几年的研究表明,很多抗菌肽都能有效地穿过细菌的细胞膜,直接与胞内分子相互作用,并不引起膜的破裂.抗菌肽根据其结构特点有着多种杀菌穿膜的机制,其后分别与胞内的靶分子如核酸,蛋白质,信号转导通路等互相作用,最终实现对细菌的杀伤作用. 展开更多
关键词 抗菌肽 杀菌穿膜机制 生物分子
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纳米多孔质子传导膜中钒离子和水分子迁移行为研究 被引量:6
7
作者 宋士强 陈晓 +2 位作者 郭伟男 范永生 王保国 《膜科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期9-14,共6页
研究全钒液流电池充电/放电过程,电解液中不同价态水合钒离子、氢离子、水分子在纳米孔径的质子传导膜中的渗透迁移行为,为膜材料性能改进以及电解液系统管理提供依据.通过测定全钒液流电池开路状态下的自放电、恒电流模式下的充电/放... 研究全钒液流电池充电/放电过程,电解液中不同价态水合钒离子、氢离子、水分子在纳米孔径的质子传导膜中的渗透迁移行为,为膜材料性能改进以及电解液系统管理提供依据.通过测定全钒液流电池开路状态下的自放电、恒电流模式下的充电/放电循环过程,分析钒离子渗透和水迁移影响因素,揭示电池运行过程纳米多孔质子传导膜中钒离子渗透及水迁移规律.结果表明:自放电过程主要发生钒离子浓度差作为推动力的传质扩散,水分子的跨膜净迁移量可忽略;在恒流模式下的充电/放电循环过程中,隔膜两侧阴极、阳极电解液中水合离子迁移、浓差扩散、渗透压效应均发生作用,导致阳极侧电解液向阴极侧发生净的水迁移,需要通过电解液管理保持电池系统正常运行. 展开更多
关键词 全钒液流电池 纳米多孔质子传导膜 钒离子渗透 水迁移
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细胞穿透肽介导外源物质入胞转运研究进度 被引量:3
8
作者 付爱玲 赵宝全 +1 位作者 陈亨宇 战丽萍 《国际药学研究杂志》 CAS 2012年第2期108-113,共6页
细胞穿透肽(cell-penetrating peptides,CPP)是一类能够携带外源物质进入细胞的多肽,因其结构和功能的独特性和实用性,近20年里在生物医学领域得到了长足的发展。目前CPP向体内和体外输送物质的方法逐渐成熟。在基础研究领域,已成为研... 细胞穿透肽(cell-penetrating peptides,CPP)是一类能够携带外源物质进入细胞的多肽,因其结构和功能的独特性和实用性,近20年里在生物医学领域得到了长足的发展。目前CPP向体内和体外输送物质的方法逐渐成熟。在基础研究领域,已成为研究细胞内分子相互作用的有用工具;在应用方面,CPP药物已进入临床前、临床Ⅰ和Ⅱ期试验,在肿瘤、中枢神经系统疾病和心血管疾病的治疗中显示出明显优势。本文对CPP的发展历程、分类、入胞机制和应用等做一综述。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 药物载体 跨膜转运 分类法
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肝细胞特异性基因治疗载体的构建及活性研究 被引量:2
9
作者 解军 张悦红 +6 位作者 于保锋 陈显久 徐钧 胡晓年 胥显民 程牛亮 牛勃 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第8期63-67,共5页
以细胞膜穿透肽 (Penetratin)基因为主要模板序列 ,融合肝细胞膜受体结合蛋白的DNA序列 ,设计一段肝细胞基因治疗载体的特异基因序列 ,构建并表达了肝细胞特异性载体体系及 3种对照体系。然后进行肝细胞的穿膜实验 ,细胞荧光显色结果提... 以细胞膜穿透肽 (Penetratin)基因为主要模板序列 ,融合肝细胞膜受体结合蛋白的DNA序列 ,设计一段肝细胞基因治疗载体的特异基因序列 ,构建并表达了肝细胞特异性载体体系及 3种对照体系。然后进行肝细胞的穿膜实验 ,细胞荧光显色结果提示肝细胞特异性载体体系可以有效地介导外源蛋白EGFP的基因进入肝细胞 ,并在肝细胞内表达。结论提示 ,所构建的载体体系有可能为肝细胞基因治疗提供一种新型的非病毒基因治疗载体。 展开更多
关键词 细胞膜穿透肽 肝细胞 基因治疗载体 活性 外源蛋白
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细胞穿透肽穿膜机制的研究进展 被引量:9
10
作者 陈茜 刘亚伟 +2 位作者 黄邵 杨勤 姜勇 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2009年第2期115-120,共6页
细胞穿透肽是一类少于30个氨基酸的短肽,它们能穿过细胞膜并携带各种"货物"包括小分子、蛋白、肽、核酸等进入细胞,而发挥"货物"的生物学作用。其转导机制一直是研究的热点,至今仍不明确。本文讨论直接入胞、转导... 细胞穿透肽是一类少于30个氨基酸的短肽,它们能穿过细胞膜并携带各种"货物"包括小分子、蛋白、肽、核酸等进入细胞,而发挥"货物"的生物学作用。其转导机制一直是研究的热点,至今仍不明确。本文讨论直接入胞、转导、内吞3种可能的穿膜机制及其特点。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 跨膜转运机制 内吞
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一种用于穿透多肽筛选的随机文库的构建及筛选 被引量:2
11
作者 刘瑜 刘亚伟 +3 位作者 李海玉 刘靖华 邓鹏 姜勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期491-497,共7页
以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)为示踪物,在pET-14b载体上构建编码12个氨基酸的随机多肽表达文库.建立一种简便、经济、有效的文库筛选方法,从所构建的文库中筛选出细胞穿透多肽(cell-penetratingpeptide... 以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)为示踪物,在pET-14b载体上构建编码12个氨基酸的随机多肽表达文库.建立一种简便、经济、有效的文库筛选方法,从所构建的文库中筛选出细胞穿透多肽(cell-penetratingpeptide,CPP).采用点突变技术,首先在pET-14b载体多克隆位点NdeⅠ和XhoⅠ之间加入4个限制性内切酶位点,随后在BamHⅠ位点后加入三联终止密码子,接着再利用亚克隆的方法在KpnⅠ和XhoⅠ之间插入EGFP,形成一个新的用于原核表达示踪蛋白的载体pET-14bMCStop/EGFP.最后再利用点突变技术在上述构建的示踪载体的多克隆位点XhoⅠ和BamHⅠ之间插入36个随机碱基序列.以His-Tat-EGFP作为工具建立有效的筛选方法,利用这种方法对文库进行筛选.酶切和测序表明,示踪载体的构建是正确的,且在大肠杆菌中可有效地表达出His标记的EGFP.在示踪载体的基础上构建的随机多肽文库至少包含了105个独立克隆,其中90%以上的克隆插入的随机片段都是36个碱基.建立的筛选方法是可行的,并用此方法进行了初步的筛选. 展开更多
关键词 细胞穿透多肽 随机多肽文库 跨膜转运 内化
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hPER1-NLS:一种新型穿膜多肽的研究 被引量:1
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作者 郭勇 程牛亮 +2 位作者 王晓霞 刘志贞 解军 《山西医科大学学报》 CAS 2002年第3期197-198,共2页
目的 研究hPER1-NLS多肽的穿膜特性。方法 用固相法化学合成hPER1-NLS多肽及对照多肽 ,用免疫组化方法观察hPER1-NLS的穿膜能力及在细胞中的定位 ,并对其穿膜的特性做初步研究。结果 hPER1-NLS对细胞膜有穿透作用 ,主要定位在细胞核... 目的 研究hPER1-NLS多肽的穿膜特性。方法 用固相法化学合成hPER1-NLS多肽及对照多肽 ,用免疫组化方法观察hPER1-NLS的穿膜能力及在细胞中的定位 ,并对其穿膜的特性做初步研究。结果 hPER1-NLS对细胞膜有穿透作用 ,主要定位在细胞核中。且在不同作用环境条件下 ,都具有穿膜能力。结论 hPER1-NLS也是一种MPP 。 展开更多
关键词 hPER1-NLS 膜穿透肽 跨膜转运 免疫组织化学 研究
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新穿膜融合蛋白His-T1-绿色荧光蛋白的跨膜效率及其对细胞存活的影响 被引量:1
13
作者 王怡 林海环 +2 位作者 杨静 姜丽娟 李校堃 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期129-135,共7页
目的研究穿膜融合蛋白His-T1-绿色荧光蛋白(GFP)的跨膜效率及其对细胞存活的影响。方法以浓度为500mg·L^-1的His-T1-GFP与人鼻咽癌CNE2或大鼠肾小管上皮NRK52E细胞孵育6h,应用荧光显微镜观察His-T1-GFP跨膜进入细胞的情况。应... 目的研究穿膜融合蛋白His-T1-绿色荧光蛋白(GFP)的跨膜效率及其对细胞存活的影响。方法以浓度为500mg·L^-1的His-T1-GFP与人鼻咽癌CNE2或大鼠肾小管上皮NRK52E细胞孵育6h,应用荧光显微镜观察His-T1-GFP跨膜进入细胞的情况。应用多功能酶标仪检测细胞荧光强度,研究His-T1-GFP跨膜的动力学因素:以浓度为500mg·L-1的His-T1-GFP与CNE2或NRK52E细胞孵育10min至24h,观察孵育时间对穿膜作用的影响;以浓度为25mg·L^-1至1.0g·L^-1的His-T1-GFP与两种细胞孵育6h,观察蛋白浓度对跨膜效率的影响;以浓度为500mg·L^-1的His-T1-GFP与两种细胞分别在4℃和37℃的条件下孵育6h,观察温度对蛋白跨膜效率的影响。用细胞乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和MTr法来评价5.0g·L^-1浓度的His-T1-GFP对细胞存活的影响。结果在一定浓度范围内,His-T1-GFP能够有效穿透CNE2和NRK52E细胞膜,且对NRK52E细胞的跨膜效率明显高于His-TAT-GFP。His-T1-GFP在10min内就能有效跨膜进入细胞,并且在6h内进入细胞的量与时间成正相关。在一定浓度范围(25mg·L^-1-1.0g·L^-1)内,该蛋白进入细胞的量与自身浓度成正相关,而在4℃时该蛋白仍具有跨膜能力。当其终浓度高达5.0g·L^-1时,对CNE2和NRK52E两种细胞几乎无毒性作用。结论His-T1-GFP蛋白是一种跨膜效率高且低毒的穿膜融合蛋白。 展开更多
关键词 穿膜肽 融合蛋白 His-T1-绿色荧光蛋白 细胞膜通透性 细胞毒性
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穿膜肽的研究进展 被引量:3
14
作者 熊维德 王攀 张迎庆 《海峡药学》 2008年第9期1-4,共4页
穿膜肽是一些具有细胞膜穿透能力的小分子多肽,可有效携带比其分子质量大100倍的外源性疏水大分子进入细胞,并对宿主细胞没有显著毒副作用。穿膜肽存在多种穿膜机制,诸如直接渗透到细胞膜,通过易位形成的一个暂时性的结构和内吞作用介... 穿膜肽是一些具有细胞膜穿透能力的小分子多肽,可有效携带比其分子质量大100倍的外源性疏水大分子进入细胞,并对宿主细胞没有显著毒副作用。穿膜肽存在多种穿膜机制,诸如直接渗透到细胞膜,通过易位形成的一个暂时性的结构和内吞作用介导入膜等。具体的穿膜机制还不清楚,但普遍认为穿膜肽与细胞表面负电荷物质的直接接触是必不可少的。由于穿膜肽的穿膜性质,其在分子生物学、药学、细胞生物学、疫苗学甚至影像学上有广泛的应用前景。本文对近年来穿膜肽的结构、穿膜机制和应用方面的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 穿膜肤 结构 穿膜机制 应用
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细胞穿透肽在肿瘤治疗中的研究进展 被引量:1
15
作者 周洲 朱金水 《现代肿瘤医学》 CAS 2010年第12期2497-2500,共4页
生物技术的发展使人们意识到生物大分子物质在疾病治疗中的重要作用,如DNA,RNA,肽,蛋白质等。但是,这些生物大分子的治疗效果在很大程度上取决于它们穿过细胞膜的效率。因此,人们迫切需要找到一种可以跨越细胞膜,直接将治疗性生物大分... 生物技术的发展使人们意识到生物大分子物质在疾病治疗中的重要作用,如DNA,RNA,肽,蛋白质等。但是,这些生物大分子的治疗效果在很大程度上取决于它们穿过细胞膜的效率。因此,人们迫切需要找到一种可以跨越细胞膜,直接将治疗性生物大分子物质运输到细胞内相应位置的手段。在过去几十年,人们发现一种小于30个氨基酸的短肽,能够将与之相连的生物分子在体内或体外的环境下带入细胞,称为细胞穿透肽(cell penetrating peptides,CPPs)。本文主要讨论CPPs跨膜转运体系的分类和机制,以及它在肿瘤治疗中的作用。 展开更多
关键词 细胞穿透肽 肿瘤 跨膜转运机制
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穿膜肽mCLOCK’s DNA-BIND作为药物载体的生物安全性初步评价
16
作者 甘露 薛建新 +3 位作者 刘延友 汪宇辉 鲁芳 王正荣 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期106-109,共4页
目的研究一种新的来源于节律蛋白mCLOCK's DNA结合域的穿膜肽mCLOCK's DNA-BIND(CDB)作为药物携带载体的生物安全性。方法化学合成穿膜肽CDB。体外采用Phorbol12-Myristate13-acetate(PMA)诱导NIH3T3细胞的近日节律。于诱导后... 目的研究一种新的来源于节律蛋白mCLOCK's DNA结合域的穿膜肽mCLOCK's DNA-BIND(CDB)作为药物携带载体的生物安全性。方法化学合成穿膜肽CDB。体外采用Phorbol12-Myristate13-acetate(PMA)诱导NIH3T3细胞的近日节律。于诱导后不同时间点,CDB与小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞共孵育,RT-PCR检测其对近日节律核心分子mPeriod1(mPer1)基因表达的影响。此外,培养的NIH3T3直接与CDB共孵育12h和24h后,MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期和凋亡的作用。结果CDB没有明显影响PMA诱导的mPer1节律基因表达。此外,CDB不干扰NIH3T3细胞增殖及生长周期,亦无明显的诱导凋亡作用。结论CDB对细胞近日节律、细胞增殖、生长周期及细胞凋亡均无明显毒副效应,可望作为一种安全有效药物载体,并具有广泛的临床应用前景。 展开更多
关键词 近日节律 穿膜肽 CLOCK基因 增殖 细胞周期 凋亡
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一种合成多肽——PLNG自由穿膜现象初探
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作者 解军 牛勃 +2 位作者 刘红林 张悦红 郭勇 《山西医科大学学报》 CAS 2001年第4期289-291,共3页
目的 研究人工设计合成的多肽PLNG在不同作用环境条件下的跨膜运动现象。方法 体外培养不同组织来源的鼠细胞及CHO细胞、BEL细胞 ,用免疫荧光法观察不同浓度、不同温度、不同反应时间条件下 ,PLNG的穿膜能力及PLNG对不同类型的细胞 (... 目的 研究人工设计合成的多肽PLNG在不同作用环境条件下的跨膜运动现象。方法 体外培养不同组织来源的鼠细胞及CHO细胞、BEL细胞 ,用免疫荧光法观察不同浓度、不同温度、不同反应时间条件下 ,PLNG的穿膜能力及PLNG对不同类型的细胞 (CHO细胞、BEL细胞、成年大鼠肝细胞、幼大鼠肝细胞、成年大鼠心肌细胞、幼大鼠心肌细胞、成年大鼠神经细胞、幼大鼠神经细胞 )的穿膜特性。结果 PLNG在不同作用环境条件下对细胞膜都有穿透作用 ,且进入细胞的量近乎相同。结论 实验观察到PLNG具有广谱的穿膜能力 ,这种穿膜能力在一定范围内对温度、时间及PLNG浓度不敏感 ;而且这种穿膜能力不受组织特异性的限制。 展开更多
关键词 肽合成 穿膜肽 跨膜转运 PLNG
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生物无毒性高分子膜的紫外光透过性能研究
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作者 余立新 沈子威 《光子学报》 EI CAS CSCD 1995年第2期103-106,共4页
本文对PVA、PAN等几种高分子膜的紫外光透过性能进行了实验研究,为高分子膜在生物领域找到了新的应用,在选择透紫外光膜时,一方面要考虑高分子的分子结构,另一方面要考虑膜孔、膜厚等膜结构参数.
关键词 高分子膜 紫外光 透过性 生物 无毒性
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lncRNA XIST在胶质瘤中的表达及生物学功能
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作者 陈刚 唐海涛 +4 位作者 王玉春 王凯 张磊 王晶 曹艳菲 《中国卫生标准管理》 2021年第10期74-77,共4页
目的研究探讨lnc RNA XIST在胶质瘤中的表达水平及其生物学功能。方法选取2018年6月—2019年5月的35例胶质瘤患者为观察组,同时期的35例脑外伤患者为对照组。比较两组、观察组中不同分级者的组织lnc RNA XIST表达情况,同时检测转染siRNA... 目的研究探讨lnc RNA XIST在胶质瘤中的表达水平及其生物学功能。方法选取2018年6月—2019年5月的35例胶质瘤患者为观察组,同时期的35例脑外伤患者为对照组。比较两组、观察组中不同分级者的组织lnc RNA XIST表达情况,同时检测转染siRNA XIST与siRNA-NC的U87及U251细胞克隆数、凋亡细胞比率及细胞穿膜数。结果观察组的lnc RNA XIST表达高于对照组,观察组中不同分级者的组织lnc RNA XIST表达比较,差异具有统计学意义(P<0.05),siRNA XIST的U87及U251细胞克隆数及细胞穿膜数低于siRNA-NC,凋亡细胞比率高于siRNA-NC,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论lnc RNA XIST在胶质瘤中的表达水平较高,lnc RNA XIST的高表达状态提升了胶质瘤细胞的增殖及侵袭能力。 展开更多
关键词 lnc RNA XIST 胶质瘤 生物学功能 细胞克隆数 凋亡细胞比率 细胞穿膜数
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MPP-hPER1融合蛋白穿膜的实验研究
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作者 解军 牛勃 +4 位作者 刘红林 郭勇 乔健天 向前 于滨 《医学研究通讯》 2001年第9期8-10,共3页
本课题研究了MPP-hPER1融合蛋白对多种细胞的穿膜性。在分析MPPs家族分子组成特点的基础上,合成了PLNG活性肽。并且应用重组技术构建了MPP-hPER1融合蛋白表达体系,通过细胞培养、转染、免疫荧光染色等手段,观察了不同作用时间、不同温... 本课题研究了MPP-hPER1融合蛋白对多种细胞的穿膜性。在分析MPPs家族分子组成特点的基础上,合成了PLNG活性肽。并且应用重组技术构建了MPP-hPER1融合蛋白表达体系,通过细胞培养、转染、免疫荧光染色等手段,观察了不同作用时间、不同温度、不同细胞系的条件下,PLNG及MPP-hPER1融合蛋白对细胞膜的穿透能力。结果显示:PLNG及MPP-hPER1融合蛋白穿透细胞膜是非能量依赖型、非时间依赖型和非细胞种系依赖型。提示生物体中有一类特殊的生物大分子,按照非经典途径进入细胞发挥生物学活性作用。实验结果提示,PLNG可以作为一种特殊的生物分子载体,介导功能分子进入细胞,在基因治疗及细胞治疗领域发挥作用。 展开更多
关键词 细胞膜穿透肽 生物膜 穿膜运动 MPP-hPER融合蛋白 实验研究
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