多重聚合酶链反应快速检测脑膜炎中的病原体

目的 建立脑膜炎多重 PCR检测系统 ,以在一次扩增中快速、特异地同时检出新型隐球菌、结核杆菌、脑膜炎双球菌 ,用于脑膜炎病原体感染的快速诊断 .方法 根据新型隐球菌 URA保守序列、脑膜炎双球菌基因组中特定的 H.8外膜蛋白基因序列、结核分枝杆菌基因组中的 IS986插入基因序列片段 ,分别设计出 3对特异性寡聚核苷酸引物 ,采用多重PCR技术 ,同时检出脑脊液中的新型隐球菌、结核杆菌、脑膜炎双球菌 .结果 应用多重 PCR反应体系 ,对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果 ;多重 PCR扩增的预期结果为 :单一菌感染出现一条特异性扩增区带 ;混合感染应出现 2条或 3条特异性扩增区带 ,经实验达到预期的扩增结果 ;对 15份已明确诊断的脑脊液标本 ,分别采用常规 PCR和多重 PCR进行同步扩增 ,结果两种扩增方法均能扩增出预期的目的片段 ,符合率达 10 0 % .对 2 0例临床脑脊液标本的 PCR扩增结果分别为 :新型隐球菌 15 % (3/2 0 )、结核杆菌 2 5 % (5 / 2 0 )、脑膜炎双球菌 10 % (2 / 2 0 ) .结论 多重 PCR有效地为临床病原体的混合感染 ,以及原因不明的脑膜炎患者的快速诊断 ,提供了快速、准确的诊断手段 .有效地减少了脑膜炎的误诊和漏诊 。

A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的研制A+C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗。方法A群和C群脑膜炎球菌多糖在溴化氰(CNBr)的活化下,以1,6己二酰肼(ADH)作为连接子,与精制破伤风类毒素(TT)在碳二亚胺(EDAC)作用下结合,再按一定的比例将两者混合,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液,加保护剂冻干后,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果经检定,A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗各项指标均达到了质控标准。该疫苗安全性及免疫原性良好。结论已成功研制出冻干A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗,该制备工艺是可行的。

A群脑膜炎球菌多糖菌苗婴幼儿免疫程序的研究

采用不同针次、不同间隔、不同剂量对1,600名6月龄至2岁婴幼儿进行了A群脑膜炎球菌多糖菌苗免疫。结果表明:应用50μg菌苗接种2针,间隔3个月,一年后再加强免疫1针,可获得良好的免疫效果。

我国脑膜炎奈瑟氏菌不同血清群菌株DNA G+Cmo1％含量的测定

本文采用热变性温度法Tm测定了我国自行分离和建立的脑膜炎奈瑟氏菌10个血清群菌株的DNAG+Cmol％,其含量范围在50.3～52.4之间。结果表明10个血清群菌株的DNAG+Cmol％含量符合脑膜炎奈瑟氏菌种的特性。数据的建立为进一步脑膜炎奈瑟氏菌的标准化提供了可靠的依据。

A群脑膜炎球菌多糖—精破类偶联抗原的制备及其主要特性

参照生物制品质量要求,连续制备3批脑膜炎球菌多糖-精破类偶联抗原,其多糖含量为19.8～24.4%(w/w),该种拟糖蛋白具有波长为245nm特征性的紫外光吸收谱,在Sepharose-CL 4B柱层析上Kd为0。偶联抗原中多糖的抗原性在火箭电泳上虽与单纯多糖相似,但其免疫原性则明显增强。偶联抗原在4℃存放3年或在37℃存放8周,其免疫原性无明显改变。加温处理过的偶联抗原经Sepharose-CL4B和SDSPAGE检查表明,多糖与蛋白共价结合是相当稳定的。