基于马立克病病毒Meq蛋白单克隆抗体的免疫组化诊断方法的建立

为了对临床上马立克病(MD)准确诊断,研究利用杆状病毒表达系统表达马立克病病毒(MDV)强毒株Meq重组蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术研制MDV Meq蛋白特异性单克隆抗体,并以此为基础建立MD诊断方法。结果显示:试验成功制备了4株Meq蛋白特异性单克隆抗体,分别命名为MDV-Meq-1D6、MDV-Meq-1D10、MDV-Meq-6B3、MDV-Meq-6D10;Western blot结果证明这些单克隆抗体不仅能与体外表达的Meq蛋白反应,而且能识别MD肿瘤细胞系MSB-1中的Meq蛋白和MD肿瘤组织细胞中的Meq蛋白;以Meq蛋白单克隆抗体成功建立免疫组化诊断MD的方法,该方法特异性强,结果稳定,易观察判定。研究表明,试验制备了4株Meq蛋白单克隆抗体(MDV-Meq-1D6、MDV-Meq-1D10、MDV-Meq-6B3、MDV-Meq-6D10),基于此建立的免疫组化MD诊断方法为临床MD鉴别诊断提供技术支撑。

马立克氏病病毒MEQ蛋白对MDV增殖影响的研究

在马立克氏病病毒 MDV致病机理的研究中 ,弄清致病基因 meq与病毒增殖之间的关系及其分子机制是十分重要的基础。以重组反转录病毒 (RCAS meq)感染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,使源于 MDV强毒参考株 (v MDV) GA株的 meq基因表达于宿主细胞内 ,然后再用 GA株感染这些细胞。通过利用 MDV强毒株特异的抗 pp3 8单克隆抗体所进行的“黑斑”试验以确定 MDV的增殖水平 ,并与未接种 RCAS meq的CEF进行比较。研究结果发现 ,细胞内表达的 meq基因产物可促进 GA株于体外培养细胞中的感染与增殖(病毒斑数增多 )。根据试验的结果 ,作者认为 meq基因在感染细胞内的表达水平是 MDV增殖以及进而能致病。

马立克病病毒致瘤蛋白Meq转录调节鸡p21基因的表达

为研究马立克病病毒（Marek＇s disease virus,MDV）致瘤蛋白Meq对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21表达的调节作用,采用RTPCR、Western blot方法检测Meq蛋白表达在鸡胚成纤维细胞（Chicken embryo fibroblasts,CEF）中对p21 mRNA和蛋白水平的影响。然后,构建p21启动子的荧光素酶报告载体,检测Meq蛋白对p21的启动子活性的影响。最后,分别用MDV Md5强毒株和CVI988/Rispens疫苗毒株感染CEF细胞,利用Western blot检测MDV感染后p21蛋白水平的变化。结果：过表达Meq上调p21的mRNA和蛋白表达水平,Meq能够激活p21基因启动子活性,MDV感染细胞中p21蛋白的表达水平也有明显升高。这些发现为了解Meq在MDV感染中的作用机理奠定了基础。