文蛤属(Meretrix)16S rRNA基因及ITS1序列的系统学分析

利用线粒体16SrRNA基因片段及核糖体DNA转录间隔区ITS1序列分析的方法,以近缘属的青蛤(Cyclinasinensis)为外群,对文蛤属的文蛤(M.meretrix)、丽文蛤(M.lusoria)、帘文蛤(M.lyrata)和斧文蛤(M.lamarckii)4种贝类进行了系统学研究。经ClustalX多重比对及DNAsp软件分析后,用PAUP4.0分析软件,计算出种间序列的碱基转换/颠换频率,利用邻接法NJ构建系统发育树。结果表明,帘文蛤与该属其他三种的分歧时间较早,两类序列与其他种类间的相对遗传距离分别在0.25866—0.28218和0.15644—0.20104之间。文蛤与丽文蛤间的16SrDNA及ITS1序列间的遗传距离仅为0.04805和0.04201,拓扑结构图显示关系很近,并且二者的分布区大面积重叠,其序列间的转换/颠换频率接近种内单元型(haplotype)间的序列变化,鉴于它们的贝壳形态有一定差别,应归为同一个种内的不同地理亚种比较恰当。

文蛤属2种贝类多变量形态分析及日本文蛤的物种有效性

为探讨日本文蛤与中国文蛤属2种贝类的形态差异及日本文蛤的物种有效性,采用多变量形态度量,结合传统分类方法,获得日本文蛤和中国大陆文蛤属2种贝类8个形态比例性状,并做单因素方差分析、聚类分析、主成分分析、判别分析及Mantel检验。结果表明,(1)单因子方差分析显示,日本文蛤与中国大陆文蛤属2种贝类,在8个比例性状中存在着5～8个显著差异(P<0.05);(2)聚类分析表明,6个文蛤地理种群距离相近,且呈现南北分别聚为一类,而日本文蛤与长乐丽文蛤相近;(3)主成分分析构建了3个主成分,其贡献率分别为34.88%、18.61%、16.89%,累积贡献率为70.38%,三维主成分散布图进一步表明日本文蛤与丽文蛤均独立于文蛤不同地理种群重叠区之外;(4)判别分析构建了8个判别函数,判别准确率P1为39.09%～100%,P2为47.06%～100%,日本文蛤与中国大陆文蛤属2种贝类的综合判别率为70.60%,其中日本文蛤判别准确率为100%,丽文蛤判别准确率高于91.67%;(5)Mantel检验结果表明,各种群间的地理距离与欧氏距离之间存在显著相关性(r=0.623 7,P<0.01)。研究认为,日本文蛤属于丽文蛤,与长乐丽文蛤属于同一种不同地理种群;根据MAYR等提出的75%规则,8个比例性状中有5个性状大于1.28,两个丽文蛤群体已达到亚种水平。

丽文蛤与文蛤4个地理群体的形态差异分析

对丽文蛤和文蛤的可量性状进行了单因子方差分析、主成分分析、聚类分析和判别分析，比较了两者的形态差异。单因子方差分析结果显示，丽文蛤与文蛤在10个比例性状中存在着7—8个显著差异（P〈0．05）。主成分分析和聚类分析结果显示，文蛤不同地理群体为一组，丽文蛤为另一组。主成分分析构建了4个主成分，其贡献率分别为26．70％、17．04％、13．82％和10．40％，累计贡献率为67．95％。第一主成分主要受檐面长／壳长、小月面长／壳长的影响。判别分析结果显示，丽文蛤与文蛤4个地理群体的形态差异显著（P〈0．05）。建立了5个判别函数，其判别准确率P1为69．51％一98．75％，P2为76．67％～95．18％，综合判别率为82．80％。

文蛤蛋白质组成分析及其分子量分布研究

为合理利用文蛤蛋白质资源,本文对其进行了蛋白质组分分离,得到了水溶性蛋白、盐溶性蛋白、不溶性蛋白及非蛋白氮4个组分,并分别对其中3个组分进行了一般成分、氨基酸组成、SDS-PAGE电泳及热稳定性分析。结果表明：新鲜文蛤含水量为84.9%、粗蛋白质含量为10.65%、灰分含量为1.20%、总糖含量为1.90%、粗脂肪含量为0.31%;4个蛋白组分占总蛋白含量分别为：盐溶性蛋白32.94%,水溶性蛋白44.69%,不溶性蛋白16.49%,非蛋白氮0.81%;文蛤蛋白氨基酸种类齐全,必需氨基酸比列均衡,必需氨基酸和呈味氨基酸含量高;SDS-PAGE电泳显示,文蛤蛋白质分子量分布广泛,但各组分之间存在一定差异性。盐溶性蛋白的分子量主要分布在200~66.4 ku和44.3~29.0 ku之间;水溶性蛋白的分子量主要集中在66.4~25 ku之间;不溶性蛋白主要集中在200~44.3 ku。DSC曲线显示：文蛤蛋白的变性温度在49.5℃,分离得到的盐溶性蛋白组分、水溶性蛋白组分及不溶性蛋白组分的热变性温度依次为：41.7、38.8和43.2℃。

丽文蛤血清中外源凝集素的凝集性能

Hemagglutinin in serum of Meretrix lusoira can agglutinate erythrocyte of Mus albula, Coturnix japonica, Gollus domestica, Carduelis spinus, Pycnonotus sinensis, Amyda sinensis, Bufo gararizans and Carassium auratus. It can also agglutinate bacteria such as Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, B. cereus var mycoides, Coynebacterium pekinense, Sarcina ventriculi, Streptococcus pernyi et al.. The activity of the hemagglutinin can be inhibited by D mannose, D maltose and Cordyceps militaris polysaccharide. The experiment shows that the hemagglutinin has activity in pH range of 2～12, temperature range of -20 ℃～80 ℃.

基于三元二次正交设计的文蛤水解肽制备工艺优化及ACE抑制活性分析

本文以文蛤蛋白为原料,选用复合蛋白酶进行酶解并以水解度作为测定指标,在单因素实验基础上进行三元二次正交设计,对获得最优工艺参数进行验证,并对文蛤ACE抑制肽的活性及氨基酸组分进行分析。实验得出文蛤ACE抑制肽酶解最优工艺参数为底物浓度10%,酶解p H8.7,加酶量4.5%和酶解温度51℃,酶解时间3 h,此酶解工艺条件下对应的水解度为33%,酶解液离心所得上清液经HPLC测定其ACE抑制率为35%。

丽文哈贝壳螺旋微结构研究

对丽文哈贝壳的微结构进行了扫描电镜(SEM)观察,观察显示它是由无机霰石层和有机胶原蛋白组成的一种生物陶瓷复合材料,其中无机霰石层平行于贝壳表面整齐排列。观察也显示这些霰石层是由长而薄的霰石片所组成,不同霰石层中的霰石片具有不同的方向,构成螺旋等铺层形式。更仔细的观察显示每一霰石片又是由长而细的霰石纤维所组成,最细的霰石纤维具有纳米的尺度。根据在贝壳中观察到的螺旋结构,进行了螺旋结构和平行结构最大拔出力的比较实验研究,结果显示螺旋结构的最大拔出力大于平行结构的最大拔出力,它使贝壳具有高的强韧性。研究结果对高性能仿生陶瓷复合材料设计提供了有益指导。

蛋白酶复合水解文蛤肉制备海鲜香料的工艺

以感官评分为指标,比较了不同种类蛋白酶和用酶量对文蛤肉水解液风味的影响,并采用正交实验优化了文蛤肉二段法复合酶解工艺条件:复合蛋白酶75 U/g,中性蛋白酶75 U/g,在45℃、自然pH下水解3 h;然后加入风味蛋白酶50 U/g,在50℃、自然pH下水解1 h。最终获得的水解液色泽为棕黄色,具有咸鲜滋味和明显蛤类特征香气,感官评分为5.5分,味精当量EUC高达53.25 g/L,氨基氮含量为4.16 g/L,水解度为35.3%,水解得率为36.4%,多肽含量为21.8 g/L。

利玛原甲藻对湛江港多种鱼虾贝的毒性研究

2010年3月采集在湛江港爆发的利玛原甲藻赤潮海水,测定了湛江港利玛原甲藻赤潮海水对凡纳滨对虾虾苗、斑节对虾虾苗、菲律宾蛤仔、丽文蛤和乌塘鳢的毒性。结果表明,利玛原甲藻对2种虾苗有一定的毒性影响,其中对凡纳滨对虾虾苗的96 h半致死浓度为1.990×106个/L,对斑节对虾虾苗的96 h半致死浓度为1.214×106个/L;利玛原甲藻毒物含量较低,因此赤潮海水对菲律宾蛤仔、丽文蛤和乌塘鳢未产生明显的毒性影响。

基于线粒体COI基因序列的丽文蛤群体遗传多样性和遗传结构分析

为了评估丽文蛤的遗传多样性,为丽文蛤的保护与开发提供基础遗传信息,本研究利用线粒体COI基因片段序列比较分析了我国沿海丽文蛤4个地理群体(漳州、珠海、海口和北海)的遗传多样性和遗传结构。4个群体共54个样本的线粒体COI基因部分序列经处理得到长度均为623 bp的核苷酸片段,检测到19个单倍型。群体遗传多样性分析显示,4个群体的单倍型多样性为0.464~0.889,核苷酸多样性为0.000 80~0.011 04。单倍型多样性较高的是漳州群体和海口群体,北海群体单倍型多样性相对较低。核苷酸多样性中漳州群体最高,而北海群体同样显示最低,北海群体多样性较低的原因可能是样本量小。分子变异分析(AMOVA)结果显示96.20%的变异来自群体内。群体间遗传分化指数显示漳州与珠海和北海群体之间存在较大的遗传分化(FST值分别为0.162 49和0.117 31),且均达到显著水平;而漳州与海口群体之间遗传分化小且分化不显著。珠海、海口和北海群体之间遗传分化小(FST值0.070 99~0.094 30)且分化不显著。聚类分析和单倍型网络图均显示丽文蛤漳州群体与珠海和北海群体分化明显,而珠海、海口和北海群体之间分化不明显,其结果与FST值相一致。