鼻腔免疫淋病奈瑟球菌疫苗候选蛋白MetQ的免疫保护效果初步评估

目的原核表达淋病奈瑟球菌MetQ蛋白,采用鼻腔免疫途径初步评估MetQ蛋白的免疫保护效果。方法利用基因重组技术构建pCold TF-metQ-E.coli BL21表达菌株,并进行MetQ蛋白的表达纯化。将6~8周龄BALB/c雌性小鼠随机分两组,每组6只,MetQ组:MetQ蛋白+霍乱毒素B亚单位(CTB)佐剂等比例混匀后对小鼠进行鼻腔滴注,10μg/只;磷酸盐缓冲液(PBS)组:鼻腔滴注等比例、等剂量的PBS+CTB佐剂。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MetQ组末次免疫后3只小鼠的血清及阴道分泌物中的抗体效价。免疫印迹分析MetQ在不同淋病奈瑟球菌中的表达情况。间接ELISA分析MetQ抗血清与全菌抗原的结合能力。评估MetQ抗血清对淋病奈瑟球菌的杀菌活性以及对ME-180细胞的黏附抑制作用。计量资料以x[±]s表示,不同处理组间比较采用t检验。结果成功表达去除信号肽的MetQ蛋白。MetQ组小鼠经鼻腔免疫后血清能检测到特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgA抗体,抗体滴度分别达1×10^(7)、1×10^(5)、2×10^(4)、1×10^(2),阴道分泌物能检测到特异性IgG、IgA抗体,抗体滴度分别达1×10^(3)和1×10^(2)。免疫印迹结果显示,MetQ蛋白在8株淋病奈瑟球菌中均有表达。间接ELISA结果显示,MetQ抗血清与淋病奈瑟球菌全菌抗原结合能力为20。血清杀菌力实验结果显示,与无血清对照组(100%)相比,MetQ抗血清的有效杀菌滴度可达1∶320(淋病奈瑟球菌存活率:46.33%±6.67%,t=8.05,P=0.001),MetQ抗血清稀释1∶160、1∶640时,淋病奈瑟球菌存活率分别为22.01%±6.80%(t=11.47,P<0.001)、84.55%±6.99%(t=2.21,P>0.05)。黏附抑制实验结果显示,与无血清对照组(100%)相比,MetQ抗血清稀释1∶20、1∶40、1∶80能抑制淋病奈瑟球菌对ME-180细胞的黏附作用(淋病奈瑟球菌黏附率=17.25%、28.23%、54.51%,t=48.44、31.88、7.29,均P<0.05)。结论MetQ蛋白在不同淋病奈瑟球菌中均有表达,经鼻腔免疫小鼠后能在血清及阴道分泌物中检测到高效价的特异性抗体。MetQ抗血清与淋病奈瑟球菌有较好的亲和性,并具有较好的血清杀菌活性及抗体黏附抑制作用,是一种有潜力的淋病奈瑟球菌疫苗候选蛋白。