代谢型谷氨酸受体阻断剂α-methyl-(4-tetrazolyl-phenyl)glycine对大鼠海马脑缺血耐受诱导的影响

实验采用大鼠四血管闭塞全脑缺血模型 ,用硫堇染色法和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组化法 ,观察右侧脑室内注射Ⅱ型代谢型谷氨酸受体 (metabotropicglutamatereceptor 2 / 3 ,mGluR2 / 3 )阻断剂α methyl ( 4 tetrazolyl phenyl)glycine (MTPG)对海马CA1区神经元缺血耐受 (BIT)诱导的影响 ,以探讨mGluR2 / 3在BIT诱导中的作用。 5 4只大鼠椎动脉凝闭后分为 5组 :( 1)假手术组 (n =8) :游离双侧颈总动脉 ,但不夹闭 ;( 2 )单纯缺血组 (n =8) :夹闭双侧颈总动脉 8min ;( 3 )缺血预处理组 (n =8) :夹闭双侧颈总动脉 3min作为脑缺血预处理 (CIP) ,再灌注 2 4h后再行夹闭 8min ;( 4)MTPG +缺血预处理组 (n =2 2 ) :CIP前 2 0min右侧脑室注射MTPG ,其余步骤同缺血预处理组 ;MTPG的剂量分别为 0 4、0 2、0 0 4和 0 0 0 8mg ,以观察其剂量效应关系 ;( 5 )MTPG +单纯缺血组 (n =8) :右侧脑室注射MTPG0 2mg 2 4h后 ,夹闭双侧颈总动脉 8min。所有动物均在手术后或末次缺血后 7d处死 ,取材观察。结果如下 :( 1)与假手术组相比 ,单纯 8min缺血组海马CA1区组织学分级升高、锥体神经元密度降低 ,GFAP阳性表达增加 (P <0 0 5 ) ;( 2 )缺血预处理组的组织学分级、神经元密度及GFAP表达与假手术组相似 ,未见单纯缺?

代谢性谷氨酸受体配体(s)-4C3HPG对大鼠脑缺血耐受性诱导的影响

目的 :观察侧脑室注射代谢型谷氨酸受体 1 /5亚型 (mGluR1 /5)配体 (s) 4C3HPG对海马脑缺血耐受 (BIT)诱导的影响 ,以探讨mGluR1 /5在BIT诱导中的作用。方法 :采用大鼠四血管闭塞全脑缺血模型 (4 vesselocclusion ,4VO) ,应用硫堇染色和GFAP免疫组化法。 36只大鼠椎动脉凝闭后分为sham组、单纯缺血组、BIT组和 (s) 4C3HPG组 ,其中 (s) 4C3HPG组又按所给药物剂量不同 ,分为 0 .2、0 .0 4和 0 .0 0 8mg三个亚组。所有动物均在手术后或末次缺血后 7d处死取材观察。结果 :①单纯 8min缺血可使海马CA1区组织学分级升高、锥体神经元密度降低和胶质纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)阳性表达增加 (P <0 .0 5vssham)。②BIT组未见单纯缺血组的上述变化 ,表明CIP可防止后续 8min缺血造成的神经元损伤。③CIP的这种保护作用可被 (s) 4C3HPG阻断 ,表现为海马CA1区组织学分级升高和锥体神经元密度降低 (P <0 .0 5vssham)。这种变化与 (s) 4C3HPG的剂量呈现明显的相关性 ,即剂量越大 ,上述改变越明显。结论 :(s) 4C3HPG可阻断CIP诱导BIT的作用 ,提示mGluR1

Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗剂对吗啡耐受大鼠热痛阈的影响

目的观察鞘内注射Ⅰ组代谢型谷氨酸受体(mGluRs)拮抗剂对吗啡耐受大鼠热痛阈的影响。方法 36只雄性Spague-Dawley大鼠随机均分为6组,鞘内置管后第4天开始给药。0.9%氯化钠溶液组(C组)予0.9%氯化钠溶液10μL。吗啡耐受组(M组)予吗啡10μg。吗啡+1-胺塞茚满-1,5-二羟酸(AIDA)组(MA组)予吗啡10μg+AIDA60nmol。吗啡+2-甲基-6-苯基苯乙炔-吡啶(MPEP)组(MM组)予吗啡10μg+MPEP60nmol。AIDA组予AIDA60nmol。MPEP组予MPEP60nmol。连续给药7d,每天2次。给药前和给药后30min测定大鼠甩尾潜伏期(TFL)以观察各组热痛阈的变化。结果 M组在第1、2天的TFL显著高于C组(P值均<0.05),随着用药天数增加,M组TFL逐渐缩短,到第7天与C组的差异无统计学意义(P>0.05)。MA组和MM组的TFL也呈下降趋势,但明显缓于M组。MA组第3～7天的TFL高于MM组,但差异均无统计学意义(P值均>0.05)。AIDA组和MPEP组TFL的变化不大,与C组的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论Ⅰ组mGluRs拮抗剂有抑制吗啡耐受的作用。

组代谢型谷氨酸受体通过抑制凋亡参与脑缺血耐受的诱导

目的观察组代谢型谷氨酸受体阻断剂α-methyl-(4-tetrazolyl-phenyl)glycine(MTPG)对脑缺血预处理(cerebralischemicpreconditioning,CIP)抗损伤性缺血所致海马神经元凋亡作用的影响。方法24只SD大鼠采用四血管闭塞法制造大鼠全脑缺血模型。采用Tunel法检测海马CA1区锥体细胞凋亡情况。结果假手术组几乎无阳性细胞表达;损伤性缺血组可见明显的阳性细胞表达和核固缩,阳性细胞数、总面积、平均光密度明显增加(P<0.05);CIP+损伤性缺血组阳性染色细胞数、总面积、平均光密度较损伤性缺血组明显降低(P<0.05);MTPG+CIP+损伤性缺血组阳性染色细胞数、总面积、平均光密度与CIP+损伤性缺血组相比明显增加(P<0.05)。结论mGluR2/3通过抑制凋亡,参与BIT的诱导。

Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗药AIDA对吗啡耐受大鼠脊髓pCREB表达的影响

目的观察I组代谢型谷氨酸受体拮抗药AIDA对吗啡耐受大鼠脊髓背角磷酸化环腺苷酸反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响。方法24只雄性SD大鼠,随机均分为四组:吗啡耐受组(M组)、AIDA组(A组)、吗啡加AIDA组(MA组)和对照组(C组)。每组连续给药8d,每天2次。行为学上测定大鼠甩尾潜伏期(TFL)观察大鼠吗啡耐受情况,根据公式计算最大镇痛效应百分比(MPE%)。8d后处死动物,采用Westernblot方法测定并比较每组脊髓背角蛋白pCREB表达量。结果第1、2天M组和MA组MPE%明显高于C组(P<0·01),但随着用药天数增加,M组的MPE%逐渐下降,第7天后与C组比较差异无统计学意义。用药后第3至第8天MA组MPE%显著高于M组(P<0·01)。MA组各时点MPE%均显著高于A组和C组(P<0·01)。M组脊髓背角pCREB表达量明显高于其他三组(P<0·01)。MA组pCREB表达量亦较C组和A组升高(P<0·05)。结论吗啡耐受时pCREB表达上调。AIDA可以延缓吗啡耐受形成,其机制与抑制pCREB表达有关。

脊髓G蛋白表达在代谢型谷氨酸5受体参与吗啡耐受形成中的作用

目的：研究鞘内注射代谢型谷氨酸5受体（metabotropic glutamate receptor 5,mGluR5）反义寡聚脱氧核苷酸（oligodeoxynucleotide,ODN）时大鼠吗啡耐受发生情况及其对脊髓内G蛋白各亚型表达的影响。方法：将48只雄性SD大鼠随机分为6组：对照组（S组,n=14）,反义链组（ANT组,n=6）,错义链组（MIS组,n=6）,吗啡耐受组（M组,n=6）,反义链吗啡合用组（AM组,n=8）和错义链吗啡合用组（MM组,n=8）。采用鞘内给药方式注射寡聚核苷酸、吗啡和生理盐水。以5μl含30 nM的寡聚核苷酸（ANT组,MIS组,AM组和MM组）或0.9%生理盐水（S组和M组）每日给药2次,连续5天。于第6天取6只S组及ANT组和MIS组大鼠L4/5脊髓行real-time PCR,观察其mGluR5的mRNA表达。其余大鼠于第6天起连续3天每日给吗啡2次,每次15μg,S组以5μl0.9%生理盐水代替。给药后以热板试验测定其热痛阈,以缩爪阈值作为机械痛阈指标,并计算最大效应分数（maximum percent effect,MPE）进行比较。采用免疫印迹（western blot）方法检测并比较各组L4/5脊髓中G蛋白各亚型（Gαi,Gαo,Gαq和Gβ）的表达。结果：ANT组中mGluR5含量比S组下降48.2%（P〈0.05）,MIS组无此效果。M组和MM组大鼠MPE%在第8天与S组比较无统计学差异（P〉0.05）,AM组大鼠MPE%在第8天仍高于S组,有统计学意义（P〈0.05）。AM组大鼠MPE%在第7~8天即显著高于M组（P〈0.05）。第9天M组和MM组大鼠Gαi,Gαo,Gαq和Gβ的蛋白表达量显著高于S组（P〈0.05）。而AM组大鼠G蛋白各亚型表达量均与S组无显著性差异（P〉0.05）,与M组相比显著下调（P〈0.05）。结论：大鼠吗啡耐受发生时,大鼠腰段脊髓G蛋白各亚型表达均明显升高。鞘内注射mGluR5反义寡聚脱氧核苷酸能显著抑制大鼠吗啡耐受的发生并抑制G蛋白各亚型的表达升高。

MrgC受体激活翻转慢性应用吗啡诱发的谷氨酸转运体和nNOS改变

本研究旨在探讨激活MrgC受体(Mas-related gene C receptors)调制吗啡耐受的细胞学机制。对大鼠连续6天鞘内注射10μL生理盐水、吗啡(20μg)、吗啡+牛肾上腺髓质8-22(bovine adrenal medulla 8-22,BAM8-22,1 nmol,隔天注射)或(Tyr6)-2-MSH-6-12(MSH,5 nmol,隔天注射);用Western blot、免疫组织化学和实时荧光定量PCR的方法检测脊髓和背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中与吗啡耐受相关分子的表达。结果显示:鞘内给予选择性MrgC受体激动剂BAM8-22或MSH,能抑制慢性应用吗啡所诱发的脊髓背角和/或DRG中谷氨酸转运体(GLAST、GLT-1、EAAC1)的减少和神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)的增加。此外,检测到MrgC受体样免疫活性表达于脊髓背角浅层;慢性应用吗啡使脊髓背角MrgC受体样免疫活性和DRG中MrgC受体mRNA水平都增加。这些结果提示,MrgC受体通过抑制慢性应用吗啡所诱发的脊髓和DRG中的痛介质增加,而抑制吗啡耐受。

吗啡耐受大鼠脊髓NR2B与mGluR5的相互作用

目的评价吗啡耐受大鼠脊髓含2B亚基的NMDA受体（NR2B）和代谢型谷氨酸受体5（mGluR5）的相互作用。方法雄性SD大鼠，体重220～280g，取鞘内置管成功的大鼠16只，随机分为2组（n=8），对照组（C组）鞘内注射生理盐水10μl；吗啡组（M组）鞘内注射吗啡10μg（10μl）。每日给药2次，连续7d。于给药前和给药后30min采用热水缩尾法测定痛阈，计算最大镇痛效应百分比（MPE）。最后1次痛阈测定结束后第2天，处死大鼠，取4-5，脊髓背角，采用Westernblot法测定NR2B和mGluR5蛋白表达水平；应用免疫共沉淀技术，NR2B抗体沉淀提取蛋白，Western blot法检测沉淀物。结果与C组比较，给药1～5d时M组MPE升高（P〈0．01），给药7d时差异无统计学意义（P〉0．05）。与C组比较，M组NR2B蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05），mGluR5蛋白表达上调（P〈0．01）。免疫共沉淀法证实NR2B与mGluR5存在相互作用。结论吗啡耐受大鼠脊髓NR2B与mGluR5存在相互作用。

脊髓蛋白激酶C表达在代谢型谷氨酸受体5参与大鼠吗啡耐受形成中的作用

目的 评价脊髓蛋白激酶C（PKC）表达在代谢型谷氨酸受体5（mGluR5）参与大鼠吗啡耐受形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠32只,体重180～240 g,随机分为4组（n=8）：对照组（C组）、吗啡耐受组（M组）、反义链组（ANT组）和错义链组（MIS组）.M组鞘内注射0.9%生理盐水5μl、ANT组和MIC组分别鞘内注射30 nmol反义、错义寡聚脱氧核苷酸（溶于5μl0.9%生理盐水）,2次/d,连续8 d,于第6～8天鞘内注射吗啡15μg,2次/d,C组注射等容量生理盐水.于鞘内注射寡聚脱氧核苷酸6、7、8 d（T1～3）时测定大鼠的热痛阈和机械痛阈,第9天（T4）时处死大鼠取L4.5脊髓,采用RT-PCR法测定mGluR5、PKCα、PKCγ的mRNA表达,采用Western blot法测定PKCα、PKCγ的表达.结果 与C组比较,M组和MIS组T1.2时、ANT组T1～3时大鼠热痛阈和机械痛阈升高,T4时M组和MIS组脊髓mGluR5 mRNA、PKCα、PKCγ的表达上调,ANT组脊髓mGluR5 mRNA表达下调（P＜0.05）;与M组比较,ANT组T2.3时大鼠热痛阈和机械痛阈升高,脊髓mGluR5 mRNA、PKCα、PKCγ的表达下调（P＜0.05）,MIS组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 脊髓PKC表达在mGluR5参与大鼠吗啡耐受形成中起重要作用.

代谢型谷氨酸受体与吗啡耐受和依赖

谷氨酸通过离子型和代谢型谷氨酸受体（metabotropic glutamate receptors，mGluRs）发挥作用，其中mGluRs是G蛋白耦联受体，分为3组共8个亚型，通过突触前和突触后作用参与离子通道活动调节、神经递质释放、突触传递和突触可塑性等生理病理过程。研究表明mGluRs与吗啡耐受和依赖密切有关。现就近年来各种类型的mGluRs参与吗啡耐受和依赖的研究进展作一综述。