Expression of metallothionein-3 gene associated with lung adenocarci-noma

Objective:To explore the role of metallothionein-3 gene in lung adenocarcinoma. Methods:cDNA microarray and northern blots analysis were used to study the expression of metallothionein-3 in lung adenocarcinoma. Results: The results of cDNA microarray showed that metallothionein-3 gene was expressed highly to normal lung tissues at the average ratio of 7.8 (Cy5/Cy3) in lung adenocarcinoma tissues. Northern blots confirmed the ratio changes detected from the microarray. Conclusion: Metallothionein-3 may play an important role in the lung adenocarcinoma development.

食管癌新鲜肿瘤组织中MT-3基因CpG岛甲基化的临床意义

目的:金属硫蛋白(metallothionein,MT)-3不仅具有其它MT共有的细胞解毒功能,还有很强的生长抑制活性,是目前所知唯一一个具有独特生理功能的MT亚型。本研究旨在明确MT-3基因CpG岛在食管癌组织中的甲基化状况及其临床意义。方法:选取2005年5月至7月河北医科大学第四医院胸外科食管癌手术治疗患者68例,其中男49例,女19例;年龄42～76岁;其中食管上段癌6例,中段癌46例,下段癌16例。国际TNM分期:Ⅰ期3例,ⅡA期13例,ⅡB期29例,Ⅲ期22例,Ⅳ期1例。组织学分级:高分化癌8例,中分化癌54例,低分化癌6例。全组患者均为鳞状细胞癌,且随访满30个月。取其新鲜手术标本及切缘正常组织,提取组织DNA及RNA,应用重亚硫酸钠处理限制性酶切图谱分析研究其MT-3基因的甲基化情况;应用实时RT-PCR技术,研究其MT-3mRNA的表达情况,然后与各临床病理参数及随访资料进行比较。结果:全组患者共11例(16.2%)肿瘤组织发现MT-3基因甲基化,而所有患者的上或下切缘的正常组织均未检测到甲基化。存在和不存在甲基化的肿瘤组织中MT-3mRNA的表达水平分别为2.54±1.11和5.13±1.86(P=0.027)。MT-3基因甲基化与TNM分期(P=0.031)、淋巴结转移情况(P=0.001)及术后生存时间(P=0.037)有关,而与患者的性别、肿瘤部位、组织分化程度及肿瘤侵犯深度均无关(P均>0.05)。结论:食管癌组织MT-3基因的甲基化影响该基因的表达水平,此事件易发生于肿瘤晚期患者,与淋巴结转移及预后较差相关。

金属硫蛋白3在食管癌组织中的表达及其与金属硫蛋白1和2表达的关系

背景与目的:金属硫蛋白(metallothionein,MT)-3具有细胞生长抑制活性,是目前所知唯一具有独特生理功能的MT亚型。本研究旨在明确MT-3在食管癌组织中的表达特性及其与MT-1和MT-2表达的关系。方法:应用免疫组化SP法检测76例食管癌手术标本和10例食管憩室标本中MT-1、MT-2和MT-3的表达情况,并对MT-3表达及其与MT-1和MT-2表达的关系进行分析。结果:MT-3在食管癌组织中表达水平明显高于切缘"正常"组织及食管良性病变组织(χ2=74.696,P<0.001)。在肿瘤组织中,MT-3主要在胞浆中表达。MT-3的表达水平与肿瘤分化程度(P=0.004)、TNM分期(P=0.033)、淋巴结转移情况(P=0.017)及术后生存时间(P=0.035)有关,而且与MT-1和-2的表达呈负相关(r=0.247,P=0.032)。结论:MT-3在食管癌中呈高表达状态,其表达水平与食管癌的组织分化、进展及预后密切相关,而且其作用明显不同于占MT主体的MT-1和MT-2。

金属硫蛋白-3与肝细胞肝癌TACE治疗近、远期疗效的关系

目的探究肝细胞癌(HCC)患者癌组织中金属硫蛋白-3(metallothionein-3,MT-3)水平与TACE治疗疗效的关系。方法选择2013年3月至2015年1月104例确诊的HCC患者作为研究对象。采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测HCC组织中MT-3水平,并分析其评价TACE治疗近、远期疗效的价值。结果有效组HCC组织中MT-3水平高于无效组,差异有统计学意义(P<0.05)。MT-3评价接受TACE治疗的HCC患者近期疗效的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)、灵敏度和特异度分别为0.825、76.5%和78.6%。MT-3评价接受TACE治疗的HCC患者远期疗效的ROC曲线AUC、灵敏度和特异度分别为0.913、88.10%和83.87%。Cox回归分析结果显示肿瘤分期、Child-Pugh分级和肿瘤直径是HCC患者5年生存预后的独立危险因素(P<0.05),MT-3是HCC患者5年生存预后的独立保护因素(P<0.05)。结论MT-3评价接受TACE治疗的HCC患者近、远期疗效的价值均较高,可辅助判断生存预后。

食管鳞癌细胞株金属硫蛋白3基因CpG岛超甲基化的临床意义

目的探讨金属硫蛋白3(MT-3)基因CpG岛超甲基化与食管鳞状细胞癌的关系。方法选取TE-1、TE-13、TTN和ECA-109四种食管鳞癌细胞株,用甲基化特异性聚合酶链反应和逆转录聚合酶链反应技术,在5-氮2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理前后,对各细胞株的MT3基因CpG岛超甲基化及mRNA表达进行比较。结果四种食管鳞状细胞癌细胞株的MT3基因均存在不同程度的CpG岛超甲基化。5-aza-CdR处理后超甲基化状态解除,mRNA表达明显提高(P均<0.05)。结论食管鳞状细胞癌细胞株中MT3基因CpG岛超甲基化可抑制其mR-NA表达;超甲基化解除后MT3基因的mRNA表达相应升高。

人食管鳞状细胞癌细胞株MT-3 mRNA的表达

目的研究人食管鳞状细胞癌细胞金属硫蛋白-3(MT-3)mRNA的表达。方法选取5种人食管癌细胞株,其中TE-1、TE-13、TTN和ECA-109为食管鳞状细胞癌细胞株,OE33为食管腺癌细胞株。应用RT-PCR技术检测各细胞株中MT-3 mRNA的表达。以正常人外周血单核细胞作为正常对照。结果RT-PCR产物回收经DNA序列测定表明为目的基因MT-3 mRNA。凝胶电泳图像显示所有被测样本均有MT-3 mRNA表达;数据分析显示,人食管癌细胞株TE-1、TE-13、TTN、ECA-109和OE33中MT-3 mRNA的相对表达量分别为0.230±0.023、0.516±0.020、0.140±0.009、0.176±0.015和0.085±0.011,明显低于正常对照的0.762±0.026,经比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论人食管鳞状细胞癌细胞株中广泛存在MT-3 mRNA表达水平下降。提示食管鳞状细胞癌的发生可能与MT-3 mRNA的异常低表达有关。

亲和柱色谱原位酶切法纯化重金属镉结合的金属硫蛋白-3

按照人金属硫蛋白-3(hMT-3)的基因序列,选用大肠杆菌偏爱的密码子合成了全长hMT-3基因,并将其插入大肠杆菌融合表达质粒pALEX的多克隆位点中,在谷胱甘肽-硫-转移酶(G ST)下游与G ST融合表达。通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)LysS中表达了与重金属离子镉结合的融合蛋白G ST-C d2+-hMT-3。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SD S-PAGE)分析表明融合蛋白主要在超声上清液中。分别通过“先纯化、后酶切”和“亲和柱色谱原位酶切”两种方法纯化了C d2+-hMT-3,比较了两种方法的纯化效率和得率,表明原位酶切法操作简便,较之“先纯化、后酶切”法减少了洗脱、透析、冻干等步骤,从而也减少了样品的损失,提高了样品的纯度和得率。从摇瓶培养菌液中纯化获得了结合有C d2+的完整的人金属硫蛋白-3,得率为1.8%。氨基酸组成分析结果表明所获得的C d2+-hMT-3不含芳香族氨基酸和组氨酸,符合金属硫蛋白的特征;直读电感耦合等离子体发射光谱分析其硫镉原子比为21∶(7.5±0.1),与理论值21∶7基本吻合。

快速老化鼠脑MT1和MT3 cDNA克隆及mRNA定量条件的建立

金属硫蛋白 (Metallothionein ,MT)基因家族的三种亚型MT1、MT2和MT3在脑组织中均有表达 ,它们在脑组织中具有重要的神经生理和神经调节功能 ,其中MT3可能是老年性痴呆 (Alzheimer′sdisease ,AD)潜在的病因学因子。本研究以快速老化鼠SAMP10脑组织总RNA为模板 ,通过RT PCR扩增出MT1的编码区序列和MT33′非翻译区序列的cDNA片段。将两个片段克隆到pGEM○R TEasy载体上 ,经测序分析确定两个cDNA片段分别为MT1编码区序列和MT33′非翻译区序列。Northern杂交结果表明 ,MT1和MT3mRNA在 2、4、6、8四个月龄的SAMP10和SAMR1脑组织中均有表达。同时建立了MTmRNA的定量条件 。

食管癌细胞系中MT-3基因CpG岛甲基化的意义

目的研究食管癌细胞系中MT-3基因CpG岛甲基化与其mRNA表达的关系。方法选取4种食管癌细胞系OE21,OE19,OE33和TE7,经重亚硫酸钠处理后,采用限制性酶切图谱分析(COBRA)和逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术,在DNA甲基转移酶抑制剂5氮2’脱氧胞苷(5azaCdR)处理前后,对其MT-3基因CpG岛的甲基化情况及mRNA的表达情况进行对比研究。结果4种食管癌细胞系的MT-3基因均存在不同程度的CpG岛超甲基化。经5azaCdR处理后,超甲基化状态解除,mRNA的表达水平也较处理前明显提高(P=0.002)。结论食管癌细胞系中MT-3基因CpG岛的超甲基化可抑制其mRNA表达。当其超甲基化解除后,MT3基因的mRNA表达水平也会相应升高。

金属硫蛋白-3研究进展

金属硫蛋白－３（ＭＴ－３）是近年来发现的一种脑特异性金属硫蛋白。本文综述了其在分布、蛋白结构及基因调控方面的特点；着重介绍了其在中枢神经系统中的功能及结构与功能关系的研究进展；总结了国外对其与老年性痴呆症的可能关系的研究。

新疆哈萨克族和汉族食管癌患者金属硫蛋白-3CpG岛甲基化的研究

目的:检测分析和比较新疆哈萨克族和汉族食管癌及癌旁组织中金属硫蛋白-3(metallothionein-3,MT-3)基因启动区CpG岛的甲基化情况,为寻找新疆哈萨克族食管癌诊断治疗的分子标记物提供线索。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)的方法,检测33例哈萨克族和30例汉族食管癌患者食管癌组织和癌旁组织中MT-3基因启动子区CpG岛的甲基化发生状况。结果:33例哈萨克族食管癌组织和癌旁组织标本中MT-3基因启动子区甲基化发生率分别2为66.7%(22/33)和27.3%(9/33),差异有统计学意义(χ=10.280,P=0.001);30例汉族食管癌组织和癌旁组织标本中MT-3基因启动子2区甲基化发生率分别为56.7%(17/30)和26.7%(8/30),差异亦有统计学意义(χ=5.554,P=0.018)。哈、汉民族之间癌组织和癌旁组2 2织MT-3基因启动子区甲基化率的差异均无统计学意义(χ=0.666,P=0.414;χ=0.003,P=0.957)。结论:MT-3基因启动子区CpG岛的甲基化可能与食管癌的发生与发展有关,但不是哈族食管癌患者的特异性致病因素。

新疆哈萨克族食管癌患者金属硫蛋白3CpG岛甲基化的研究

目的探讨分析新疆哈萨克族食管癌患者食管癌组织及癌旁组织中金属硫蛋白3(metallothionein-3,MT-3)基因CpG岛的甲基化状态及其与食管癌发生的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)的方法,检测33例哈萨克族食管癌患者食管癌组织和癌旁组织中金属硫蛋白3(MT-3)基因启动子区CpG岛的甲基化发生状况。结果 33例哈萨克族食管癌患者癌组织和癌旁组织标本中MT-3基因启动子区CpG岛甲基化的发生率分别为66.7%(22/33)和27.3%(9/33);癌组织与癌旁组织甲基化率差异有统计学意义(χ2=10.28,P=0.001)。结论 MT-3基因的甲基化可能与食管癌的发生与发展有关。

基于MT3、SOD2 mRNA表达调控的醒脑再造胶囊抗脑缺血再灌注损伤作用

目的观察醒脑再造胶囊的抗脑缺血再灌注损伤作用并探讨其作用机制。方法灌胃给药醒脑再造胶囊1周后,建立SD大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注24 h模型,进行大鼠神经功能评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法观察脑组织梗死范围,实时荧光定量PCR检测脑组织缺血半暗带区域金属硫蛋白3(MT_3)和超氧化物歧化酶2(SOD_2)mRNA的表达。结果醒脑再造胶囊预处理可明显降低大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能评分,缩小脑组织梗死范围,并使脑组织缺血半暗带区域MT_3和SOD_2 mRNA的表达显著增加。结论醒脑再造胶囊抗大鼠脑缺血再灌注损伤作用与上调脑组织抗氧化损伤基因MT_3和SOD_2 mRNA的表达有关。

人脑金属硫蛋白3(MT-3)原核载体的构建、表达及纯化

为探讨采用基因工程技术构建小分子人MT-3蛋白原核表达载体的可能性,以MT-3 c DNA序列为模板,采用聚合酶链式反应引入双酶切位点,定向亚克隆至pho A分泌型原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞构建重组工程菌,经0.05 mmol/L低磷培养基培养诱导重组MT-3表达,利用金属螯合柱分离纯化后,利用SDS-PAGE、Western blot、紫外光谱扫描及金属结合能力分析对其进行鉴定。结果成功构建了pho A-MT-3原核表达载体,重组工程菌经诱导后以可溶形式表达重组MT-3蛋白。SDS-PAGE、Western blot和紫外光谱扫描分析证实重组MT-3表达成功。金属结合能力分析结果显示目的蛋白仍具有结合金属离子的生物学功能,实现了小分子MT-3的体外分泌重组表达。本研究成功实现了小分子人MT-3蛋白的重组制备,为MT-3的规模化应用奠定基础。

镉诱导PC-3细胞金属硫蛋白和锌转运体的基因表达

[目的]研究镉对前列腺癌PC-3细胞中金属硫蛋白(Metalllothionein,MT)和锌转运体(Zinctransporter,ZnT)基因表达的影响。[方法]0、10、20、40、80和100μmol/L氯化镉处理PC-3细胞,细胞存活率用噻唑蓝(MTT)方法检测;MT-1F、MT-1X、MT-2A和ZnT-1基因的mRNA表达用RT-PCR进行检测。[结果]氯化镉(≥40μmol/L)对PC-3细胞具有明显的抑制生长作用(P<0.05)。MT-1F和MT-2A的mRNA水平在5μmol/L氯化镉诱导时表达水平达最高,随着氯化镉浓度的增高mRNA的表达呈下降趋势。MT-1X的mRNA表达水平随氯化镉浓度增加呈不断上升趋势,在40μmol/L表达水平为最高。ZnT-1的mRNA在10μmol/L氯化镉诱导表达水平为最高,随着氯化镉浓度的增高mRNA表达呈下降趋势。[结论]镉可诱导PC-3细胞MT-1F、MT-1X、MT-2A和ZnT-1基因mRNA表达增高。

人金属硫蛋白-3的α结构域的表达及其性质研究

参考E .coli偏爱密码子 ,设计并合成人MT 3α结构域 (α MT 3)的DNA片段 ,克隆到表达载体pGEX 4T 1中。经IPTG诱导 ,在E .coli中高效表达出谷胱甘肽 S 转移酶 (GST) α融合蛋白。凝血酶酶切融合蛋白 (用CdCl2 或ZnSO4辅助 )后 ,得到纯化的结合镉或锌的α MT 3蛋白。质谱分子量检测及氨基酸组成分析证明得到了目的蛋白。紫外吸收光谱及圆二色性光谱研究重组α MT 3的结构。MT 3的与其余MT的α结构域不同 ,α MT 3的圆二色性光谱在 2 2 0nm左右为负峰 ,说明α MT 3可能包含一个α 螺旋的二级结构。

酵母双杂交系统检测金属硫蛋白(MT)间的相互作用

金属硫蛋白 3(MT 3) ,又称神经生长抑制因子 ,为金属硫蛋白家族中惟一具有生物活性的成员。为了验证其在细胞内是否形成二聚或多聚体 ,构建酵母双杂交系统用于检测。结果表明 :MT 3与MT 3之间在酵母细胞内能发生相互作用 ,进一步用酵母双杂交实验还表明MT 3与MT 1间也存在弱相互作用。由此提示 ,在机体细胞中 ,MT 3可以以同源或异源二聚体的形式存在。

激素对皮瓣金属硫蛋白表达及存活的影响

目的探讨地塞米松对随意皮瓣术后皮瓣组织中金属硫蛋白（MT）表达及皮瓣成活率的影响。方法雄性健康SD大鼠40只．体重300～350g（60～80日龄），随机分组。实验组术前24h和12h腹腔注射地塞米松（0．8mg·kg^-1·次^-1），对照组使用0.9％氯化钠注射液。在大鼠背部肉膜下形成超长随意皮瓣。测激光多谱勒血流相对值（LDF）。术后第3天取材进行HE染色光镜检查，Western blot法检测皮瓣组织中MT的表达，免疫组化法测定半胱天冬酶-3（caspase-3）的水平。术后第9天统计皮瓣存活率。结果实验组（MT）表达水平（3．19±0.97）显著高于对照组（1．87±0．14）（P〈0．01）。实验组caspase-3表达水平（1．19±0．23）显著低于对照组（2．17±0．43）（P〈0．01）。实验组皮瓣的存活比率（69．08％±3．62％）显著高于对照组（60．15％±2．99％）（P〈0．01）。实验组LDF下降少，恢复快（P〈0．01）。结论地塞米松可促进大鼠随意皮瓣成活，上调MT的表达水平及抑制皮瓣组织细胞凋亡可能是其机制之一。

注射用鼠神经生长因子联合重复经颅磁刺激对自闭症患儿金属硫蛋白-2A金属硫蛋白3水平的影响

目的探讨对自闭症患儿通过注射用鼠神经生长因子与重复经颅磁刺激联合对金属硫蛋白-2A、金属硫蛋白3(MT3蛋白)水平的影响。方法采集106例台州市第一人民医院2019年3月—2021年3月诊治的自闭症患儿为研究对象,分为对照组、观察组各53例。对照组通过重复经颅磁刺激治疗,观察组给予注射用鼠神经生长因子与重复经颅磁刺激联合治疗。检测两组的金属硫蛋白-2A、MT3蛋白、脑源性神经营养因子(BDNF)、血清指标谷氨酸(Glu)、微量元素锌、铜、维生素D及维生素E水平,通过孤独症行为量表(ABC)和儿童孤独症评定量表(GARS)对临床疗效进行评估,统计两组头疼、恶心及嗜睡出现情况。结果治疗后观察组MT3蛋白(925.78±92.78 vs.811.98±80.98)ng/L、BDNF(172.34±17.56 vs.150.93±15.74)μg/L、微量元素锌(14.50±1.40 vs.12.02±1.21)μmol/L、维生素D(62.78±6.78 vs.56.89±5.69)nmol/L、维生素E(11.78±1.80 vs.9.14±0.91)μg/ml水平高于对照组(P<0.05),金属硫蛋白-2A(711.15±70.22 vs.800.12±80.25)ng/ul、Glu(15.47±1.48 vs.19.78±1.98)mmol/L、微量元素铜(16.24±1.67 vs.20.15±2.15)μmol/L水平、ABC评分(36.50±3.40 vs.42.02±3.21)分、GARS评分(30.24±3.07 vs.33.15±3.15)分低于对照组(P<0.05)。观察组治疗有效率高于对照组94.34 vs.69.81)%,差异有统计学意义(P<0.05),观察组治疗不良反应发生率略高于对照组(5.66 vs.3.77)%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论注射用鼠神经生长因子与重复经颅磁刺激联合治疗可提高自闭症患儿MT3蛋白水平,金属硫蛋白-2A水平下降,微量元素、维生素异常及临床症状改善。

血浆金属硫蛋白3及其基因多态性与儿童自闭症的相关性

目的探讨血浆金属硫蛋白3（MT3）及其基因多态性与儿童自闭症的相关性，为自闭症的病因学、分子诊断提供客观依据。方法收集2011年1月至2014年11月武汉地区自闭症特殊学校及湖北省妇幼保健院的自闭症病例132例，并收集同期于武汉大学中南医院就诊和体检的健康儿童316例作为健康对照组。酶联免疫吸附试验检测其中81例白闭症和80例健康儿童的血浆MT3蛋白水平；同时用Sequenom平台的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对132例自闭症和236例健康儿童M乃基因上的8个单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism，SNP）进行基因分型。结果病例组血浆MT3蛋白水平[（740．0±327．4）ng／L]显著低于健康对照组[（1007．1±554．3）ng／L]，差异有统计学意义（P〈0．001）；按性别分层分析发现差异集中于男童（P=0．005）；所有SNP等位基因及基因型分布在2组间差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论MT3蛋白在自闭症儿童血浆中存在表达异常，但此异常可能与其基因多态性无关。