金龟子绿僵菌对入侵性害虫椰子织蛾的致病力

椰子织蛾是危害棕榈科植物的一种入侵性害虫。为评价金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae(Metschnikoff))对椰子织蛾幼虫的致病情况,室内采用浸液法测定了5株绿僵菌菌株对椰子织蛾3龄幼虫的致病力,结果表明:以浓度(1.0±0.5)×10^(6)个孢子∙mL^(-1)的孢子悬液接菌7 d后,各菌株对椰子织蛾幼虫的致病力差异较大,校正死亡率范围在5.00~95.00%之间。其中,MaHA-01菌株对其致病力较强,校正死亡率和僵虫率分别为(95.00±0.00)%和(94.00±2.24)%,均极显著高于其它菌株处理,且LT50较短为4.20 d;其次是Ma1775。MaHA-01菌株接菌后5 d对椰子织蛾3龄幼虫的LC50为3.62×10^(4)个孢子∙mL^(-1)。通过时间-剂量-死亡率(TDM)模型参数估计,MaHA-01菌株对椰子织蛾幼虫的致死效应较强的时间在接菌后3~5 d。可见,MaHA-01菌株对椰子织蛾幼虫有较强的致病力,在该害虫生物防治中可以应用。

金龟子绿僵菌和球孢白僵菌对大黑鳃金龟二龄幼虫的致病力

为了筛选生物防治大黑鳃金龟(Holotrichia diomphalia Batesa)的高毒力生防虫生真菌,室内生物测定和比较了金龟子绿僵菌[Metarhizium anisopliae Metschnikoff(Sorokin)]KMa0107菌株、球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin]菌株Bb070610和Bb070917对大黑鳃金龟2龄幼虫的致病力。结果表明:接种后5~12 d,KMa0107,Bb070610和Bb070917菌株对大黑鳃金龟2龄幼虫的致死剂量对数值间差异显著(F=19.45,P<0.01),分别为(9.45±1.71)^(4.73±0.37)、(9.76±1.87)^(5.20±0.79)、(10.48±1.24)^(5.99±0.43)。用密度为1.15×108~1.15×105个/m L的孢子悬浮液接种后,对大黑鳃金龟2龄幼虫侵染致病的LT50估计值范围为5.7~8.7 d,6.4~9.2 d,6.3~8.6 d。接种孢子悬浮液后,随着病原菌的侵染及其在虫体内的繁殖,大黑鳃金龟2龄幼虫血淋巴中蛋白质质量浓度逐渐减少。接种后第4天,幼虫血淋巴中蛋白质质量浓度均明显下降,接种KMa0107及Bb070610的大黑鳃金龟2龄幼虫血淋巴蛋白质质量浓度下降速度显著大于Bb070917菌株处理。接种后第10天,菌株KMa0107及Bb070610处理的大黑鳃金龟2龄幼虫血淋巴蛋白质质量浓度显著低于对照及Bb070917菌株处理(F=17.36,P<0.01)。综合以上结果,金龟子绿僵菌KMa0107及球孢白僵菌Bb070610菌株对大黑鳃金龟2龄幼虫具有较强的致病力,具有良好的生防制剂开发潜力。

绿僵菌对小云斑鳃金龟毒力及在土壤中的宿存

室内测定了从棕色金龟子HolotrichiatitanisReitter幼虫体上分离的金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopliaeMetschnikoff(Sorokin)KMa0107对危害马铃薯的小云斑鳃金龟PolyphyllalaticollalaticollisLewis幼虫的毒力,并用时间-剂量-死亡率模型进行了分析。结果表明,该绿僵菌菌株对小云斑鳃金龟幼虫具有较强的毒力,剂量效应参数为0.74;在108～106孢子/mL下,接种后第10d小云斑金龟的累积死亡率达100%,在102孢子/mL下的累积死亡率为3.3%。在108孢子/mL下对小云斑金龟的LT50和LT90分别为4.6d和6.4d,在106孢子/mL下的LT50和LT90分别为5.6d和7.9d。绿僵菌菌株对小云斑鳃金龟第7d的LD50和LD90分别为5.5×106和2.3×108孢子/mL,第10dLD50和LD90分别为1.0×106和4.7×107孢子/mL。分生孢子在灭菌和未经灭菌的土壤中的宿存量随接种后时间的延续下降,在未经灭菌的土壤处理中分生孢子活力下降快于灭菌土处理,每g土壤中CFU的对数与处理后的天数x成线性相关关系,在未灭菌土和灭菌土中的半衰期分别为17和23d。

金龟子绿僵菌对椰心叶甲的致病力

采用喷菌法接菌,测定5株金龟子绿僵菌对不同龄期椰心叶甲的致病力。结果表明:浓度为(1±0.5)×10~7孢子·mL^(-1)的孢子悬液接菌10 d后,各绿僵菌菌株对该虫不同发育阶段均有一定致病力。其中,以Ma1775菌株对椰心叶甲致病力最强,成虫校正死亡率和僵虫率分别为(67.96±3.66)%和(60.59±1.31)%,LT_(50)为(7.11±0.52)d;5龄幼虫校正死亡率和僵虫率分别为(78.53±2.73)%和(73.55±3.22)%,LT_(50)为(5.77±0.38)d;4龄幼虫校正死亡率和僵虫率分别为(82.59±2.48)%和(77.86±3.44)%,LT_(50)为(5.80±0.14)d;2~3龄幼虫校正死亡率和僵虫率分别为(73.46±4.60)%和(69.50±3.87)%,LT_(50)为(6.49±0.12)d。Ma1775菌株对该虫各发育阶段6 d的LC50分别为:3.52×10~8、7.13×10~7、2.48×10~7、7.69×10~7孢子·mL^(-1)。时间-剂量-死亡率(time-dose-mortality,TDM)模型分析结果表明椰心叶甲各发育阶段幼虫死亡高峰期均为3~7 d。因此,Ma1775菌株在椰心叶甲生物防治中有较大的应用潜力。

6种杀菌剂对金龟子绿僵菌孢子萌发的影响

测定了6种杀菌剂对金龟子绿僵菌分生孢子萌发的抑制作用。结果表明,不同杀菌剂对金龟子绿僵菌的抑制作用不同,且随着杀菌剂浓度的下降而减小。其中以腈菌唑的抑制效果最弱,除Ma103菌株外,对其他菌株抑制率均低于35%。代森锌对Ma202,Ma201和Ma203菌株的平均抑制率都较小。其他几种杀菌剂都明显抑制绿僵菌大部分菌株分生孢子的萌发,特别是百菌清和甲基托布津对Ma103,Ma205,Ma207和Ma208菌株的平均抑制率都为100%。2种药剂也强烈抑制其他菌株分生孢子的萌发。因此,应该尽量避免百菌清和甲基托布津与金龟子绿僵菌同时同地使用,否则会明显影响金龟子绿僵菌制剂的应用效果。

病原细菌和绿僵菌对椰心叶甲的联合毒力与相容性

通过致病力和相容性评价病原细菌和绿僵菌对椰心叶甲的联合毒力。结果表明,分别以浓度(1±0.5)×1012cfu·m L^(-1)的细菌Ba-z菌悬液、(1±0.5)×107孢子·m L^(-1)的绿僵菌Ma1775孢悬液单剂及其两者混配菌液(V∶V=6∶94),喷菌法接菌后10 d,对椰心叶甲高龄幼虫与成虫,绿僵菌Ma1775单剂处理的校正死亡率极显著高于混配菌液处理,混配菌液处理校正死亡率极显著高于细菌单剂处理;但对于2～3龄低龄幼虫,绿僵菌Ma1775单剂处理的校正死亡率极显著低于混配菌液和细菌单剂处理,后两者间无显著差异。利用3株细菌,研究细菌挥发物和发酵液对绿僵菌Ma1775生长的影响发现,3株细菌挥发物对绿僵菌的孢子萌发、菌丝生长、产孢量具有极显著抑制作用;其发酵液前期对绿僵菌的孢子萌发、菌丝生长和产孢量具有显著抑制作用,且随发酵液浓度升高,抑制作用增强。可见,细菌Ba-z与绿僵菌Ma1775混配,其挥发物和发酵液对绿僵菌的生长和致病力均起抑制作用。

感染茶假眼小绿叶蝉的金龟子绿僵菌菌株筛选

采用喷雾法测定8株金龟子绿僵菌菌株对假眼小绿叶蝉的致病力。结果表明:以浓度(1±0.5)×107孢子·mL-1的绿僵菌孢子悬液接种12 d后,各菌株对假眼小绿叶蝉均有一定的致病力,校正死亡率和僵虫率分别为(43.08±0.76)%-(76.92±1.72)%和(40.67±1.25)%-(76.67±1.55)%,LT50为6.76-11.48 d。其中,Ma1775菌株对假眼小绿叶蝉致病力最强,校正死亡率和僵虫率分别为(76.92±1.72)%和(76.67±1.55)%,LT50为6.76 d,6 d的LC50为4.156 3×107孢子·mL-1。通过时间—剂量—死亡率模型参数估算,Ma1775菌株对该虫致死效应较强的时间段为3-5 d,该菌株在假眼小绿叶蝉的生物防治中有很大的应用潜力。

应用白僵菌和绿僵菌防治浙江双栉蝠蛾试验

应用高致病力球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Bals.)Vuill]B3和金龟子绿僵菌[Metarhizium anisopliae(Metsch.)Sorokin]Ma1291-2菌株,以不同的施菌方式防治浙江双栉蝠蛾(Bipectilus zhejiangensis Wang),统计分析2 a的防治效果。结果表明,2菌株均体现笋基灌施的防治效果较菌土撒施好,但以3月上旬进行撒施,3月中旬进行灌施(撒施+灌施)的防治效果最好。2菌株防治后第1年的退笋率无显著差异,而绿僵菌防治后第2年退笋率显著较低。以撒施+灌施防治后第1年和第2年,白僵菌B3菌株的防治效果分别为72.20%和36.76%,绿僵菌Ma1291-2菌株的防治效果分别为79.28%和48.70%。因此,2菌株均有林间应用价值,并以不同时间撒施+灌施的施菌方式防治,效果更佳。

金龟子绿僵菌(L8500)的分离及液体培养

通过液体发酵培养对定名为金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae(Metsch)Sorokin)(L8500)的培养基进行了考察,确定了该菌液体培养的最佳配方,并且制定了L8500菌液体培养的质量控制方案。

绿僵菌对马尾松毛虫的感染反应分析

通过以金龟子绿僵菌菌株M337和M104系列浓度的分生孢子悬液(1.0×1011-1.0×107个孢子.L-1)对马尾松毛虫幼虫的体表接种试验,测定马尾松毛虫对供试菌株的感染反应。运用时间—剂量—死亡率模型,对死亡率随时间和剂量的变化作了拟合,并与球孢白僵菌(Bb01和Bb02菌株)进行比较。接种后第10-12天绿僵菌M337菌株的LC50分别为1.86×109、1.52×108和1.67×107孢子.L-1,在浓度梯度为1.0×1011-1.0×108孢子.L-1下的LT50为7.69-11.18 d。结果表明M337菌株对马尾松毛虫具有较强的致死作用。

7株绿僵菌防治德国小蠊的毒力筛选

本文用7个绿僵菌(Metarhizium)菌株对德国小蠊Blattella germanica(Linnaeus)进行注射生测,筛选出了一个致病菌株进行五代复壮选育.该株绿僵菌Metarhizium anisopli-ae(Metsch)Sorokin复壮前对雌雄成虫注射生测LD50依次为13.2与8.9天;复壮后对雌雄成虫背部点滴生测12天的LD50值均为1.3×105孢子/虫.通过CP包埋剂制作石蜡切片对僵虫体内菌丝核和体表孢子堆进行了观察.

球孢白僵菌和金龟子绿僵菌对红火蚁工蚁的致病力测定

为了评价白僵菌和绿僵菌对红火蚁的致病力,寻找其生物防治菌株资源,采用浸液法测定了11株球孢白僵菌(Beauveria bassiana Balsamo)和9株金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae Metschnikoff)菌株对红火蚁工蚁的致病力。结果表明:以浓度1×10^7个孢子·mL-1接菌红火蚁工蚁,10 d后,白僵菌和绿僵菌对其校正死亡率范围分别为(6.47±0.98)%^(67.14±0.22)%和(35.13±1.25)%^(81.93±0.94)%;白僵菌BSX-PC和绿僵菌MaWys-01菌株对红火蚁的致病力较强,致死速度较快,致死中时(LT50)分别为(5.64±0.52)d和(4.78±0.46)d。测定不同浓度对红火蚁的致病力,白僵菌BSX-PC和绿僵菌MaWys-01菌株以浓度1×10^8个孢子·mL^-1接菌后10 d,其校正死亡率分别为(79.59±0.5)%和(99.20±0.80)%,僵虫率为(63.24±0.51)%和(81.92±1.39)%,两菌株对红火蚁6 d的致死中浓度(LC50)分别为1.01×10^6和2.42×10^5个孢子·mL^-1。通过时间-剂量-死亡率模型分析,两个菌株致死效应最强的时间均是接菌后3~5 d。综合分析,白僵菌BSX-PC和绿僵菌MaWys-01菌株在红火蚁生物防治中有较大应用潜力。

捕食螨对烟草育苗期蓟马防治效果研究

为明确捕食螨对烟草蓟马的防治效果,笔者调查了云南泸西中枢育苗期蓟马发生情况及种类,并对比研究了不同捕食螨释放数量、释放方式及携带微生物菌剂的防治差异。结果表明:蓟马种类主要为西花蓟马,其次为八节黄蓟马,发生高峰期在4月中旬左右;捕食螨投放100头/盘防治效果最好;均匀撒施捕食螨对蓟马防治效果显著优于开袋放置及空白对照(P<0.05);捕食螨搭载球孢白僵菌对蓟马控制效果最好,搭载金龟子绿僵菌与不带菌相差不大,但均显著高于空白对照(P<0.05)。

一株小阔胫绒金龟幼虫绿僵菌的分离鉴定及培养条件的优化研究

【目的】为了弄清从云南省昆明市寻甸县大河桥农场田间自然罹病的小阔胫绒金龟Maladera ovatula(Fairmaire)幼虫僵虫上分离纯化获得的1株绿僵菌Metarhizium sp.(编号MAXD170705)的种类及其培养条件,为蛴螬生防制剂开发提供依据。【方法】室内通过菌株的分离与纯化,并根据形态特征及ITS-5.8SDNA基因序列,对该菌株种类进行鉴定,同时采用正交旋转组合试验设计,测定该菌株在不同培养基上于不同温度、光照、pH值条件下的菌落生长速度及产孢特性。【结果】经形态学与分子鉴定,确定菌株MAXD170705为金龟子绿僵菌Metarhiziumanisopliae,该金龟子绿僵菌MAXD170705菌株在SMAY、PDA和SDAY 3种培养基上均能生长,但在SDAY培养基上孢子萌发率以及菌落生长、产孢时间与产孢量均优于其他2种培养基。在(25±1)℃、16 L︰8 D和pH=7.0条件下MAXD170705菌株生长最快,菌落直径日增量为0.38 cm/d;菌落直径最大,第8天达2.73 cm;产孢时间最早,从第3天开始产孢,并且产孢量最高,达6.68×10^6孢子/cm^2。【结论】营养成分对菌株发育过程中具有重要作用,只有丰富而且恰当的营养条件才有利于不同来源的绿僵菌菌丝生长以及产孢。除此之外,外界环境条件也是影响其生长发育的重要因素。综合以上结果,利用pH=7.0的SDAY培养基,于25℃、光照16L︰8D为金龟子绿僵菌MAXD170705的最适培养条件。