LncRNA MALAT1通过靶向miR-146a调节PI3K/Akt信号通路影响胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肺腺癌转移相关转录子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)通过调节miR-146a对胃癌(gastric cancer, GC)细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法 收集GC组织和配对正常胃上皮组织,将GC细胞MNK-45分为空白对照(blank control, BC)组(未转染)、MALAT1 siRNA-NC组(转染MALAT1 siRNA-NC)、MALAT1 siRNA组(转染MALAT1 siRNA)、miR-146a mimics-NC组(转染miR-146a mimics-NC)、miR-146a mimics组(转染miR-146a mimics)、MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor-NC组(共转染MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor-NC)、MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor组(共转染MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor)。定量荧光PCR(qRT-PCR)检测胃组织或细胞中MALAT1、miR-146a表达量;CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;RNA pull down实验、双荧光素酶报告实验分析MALAT1和miR-146a的结合情况;Western blot检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路蛋白及c-Myc、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)蛋白表达量。结果 转染MALAT1 siRNA可明显降低MNK-45细胞的MALAT1表达量,敲低MALAT1或过表达miR-146a可降低细胞活力、克隆能力、迁移和侵袭,增加miR-146a表达,降低PI3Kp85α、PI3Kp85β、c-Myc、MMP9蛋白表达量及p-Akt/Akt水平;MALAT1可结合并靶向下调miR-146a表达;低表达miR-146a可逆转敲低MALAT1对MNK-45细胞增殖、迁移和侵袭的抑制效应。结论 MALAT1可能作为ceRNA吸附并降解miR-146a,敲低MALAT1可上调miR-146a表达,并通过PI3K/Akt通路抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭。

溶酶体相关膜蛋白3通过VEGF/AKT通路抑制PC-3细胞增殖、转移及血管生成

目的探索LAMP3对PC-3细胞增殖、迁移及血管生成的影响。方法Western blot(WB)及RT-PCR检测LAMP3在正常前列腺上皮细胞及前列腺癌骨转移细胞中的表达。构建稳定沉默LAMP3的PC-3细胞,分别使用CCK8、划痕试验、Transwell试验检测LAMP3对PC-3细胞增殖、迁移与侵袭的影响。通过ELISA及血管生成试验检测血管内皮生长因子VEGF、基质金属酶MMP9的表达及HUVEC细胞的血管生成,最后使用WB及RT-PCR检测VEGF、AKT/p-AKT的表达。结果LAMP3在前列腺癌细胞中的表达较正常前列腺上皮细胞明显升高,以PC-3细胞最明显(P<0.05)。沉默LAMP3能抑制PC-3细胞的增殖、迁移与侵袭能力,同时能抑制VEGF、MMP9的表达及PC-3细胞诱导的血管生成,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,LAMP3能下调PC-3细胞中VEGF、AKT/p-AKT的表达。结论LAMP3能通过调控VEGF/AKT通路影响PC-3细胞的增殖、转移和血管生成,LAMP3可能是前列腺癌骨转移的潜在治疗靶点之一。

血清Irisin、PTX3及MALAT1水平与糖尿病视网膜病变病情程度的关系及联合诊断价值

目的研究血清鸢尾素(Irisin)、长正五聚蛋白3(PTX3)、人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)水平与糖尿病视网膜病变(DR)病情程度的关系及联合诊断的价值。方法选取2022年4月至2023年4月沧州市中心医院2型糖尿病(T2DM)合并DR患者85例设为DR组,85例单纯T2DM患者设为非DR组,同时期85例健康志愿者设为对照组。将DR组患者以是否处于增生型DR为标准分为增生型组(38例)与非增生型组(47例)。收集DR组患者病例临床资料,包括性别、舒张压、年龄、收缩压、病程、空腹血糖(FPG)、体质量指数、糖化血红蛋白(HbA1c)、吸烟史、甘油三酯(TG)、饮酒史、收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、阻力指数、空腹胰岛素(FINS)、糖尿病家族史、总胆固醇(TC)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。酶联免疫吸附法检测各组患者血清Irisin、PTX3水平,实时荧光定量PCR法检测血清MALAT1水平。采用Pearson相关性分析检测血清Irisin、PTX3及MALAT1水平与DR患者病情程度的相关性。Logistic回归分析DR患者病情程度的影响因素。受者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清Irisin、PTX3及MALAT1单独诊断DR的价值。ROC曲线、净重新分类指数(NRI)及综合判别改善指数(IDI)分析含与不含血清Irisin、PTX3及MALAT1方案诊断DR的价值。结果3组患者血清Irisin、PTX3、MALAT1水平比较,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。增生型组患者病程长于非增生型组,收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、血清Irisin水平均低于非增生型组,阻力指数、FPG、HbA1c、TG、FINS、HOMA-IR及血清PTX3、MALAT1水平均高于非增生型组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。DR患者血清Irisin水平与DR病情程度呈负相关(r=-0.512,P<0.001),PTX3、MALAT1水平与DR病情程度均呈正相关(r=0.497、0.573,均为P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,病程、FPG、HbA1c、TG、FINS、HOMA-IR、收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、阻力指数及血清Irisin、PTX3、MALAT1水平均为DR病情程度加重的影响因素(均为P<0.05)。血清Irisin、PTX3、MALAT1诊断DR的曲线下面积(AUC)分别为0.743、0.811、0.773。与常规诊断方案比较,含有血清Irisin、PTX3、MALAT1水平的新诊断方案的AUC明显增大(Z=2.708,P=0.007),NRI、IDI分别为0.039(95%CI:0.022~0.069)、0.026(95%CI:0.014~0.047)(均为P<0.05)。结论DR患者血清Irisin水平降低,PTX3、MALAT1水平升高,且与患者DR病情程度密切相关,含有血清Irisin、PTX3、MALAT1指标的诊断方案具有较高的诊断价值。

敲低结肠癌转移相关基因1促进RSL3诱导的结直肠癌细胞铁死亡

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)对RAS选择性致死化合物3(RSL3)诱导的结直肠癌细胞铁死亡的影响及其分子机制。方法体外培养结直肠癌细胞SW620,HCT116,LOVO及RKO细胞,Western blot实验检测细胞中MACC1表达;以SW620细胞为实验材料,MTT法检测不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol/L)铁死亡诱导剂RSL3以及不同浓度(0、5、10、20μmol/L)铁死亡抑制剂Fer-1对SW620细胞存活率的影响,分析单独使用10μmol/L RLS3以及10μmol/L RLS3和10μmol/LFer-1联合作用对SW620细胞存活率的影响,并检测干扰MACC1后不同浓度RSL3对SW620细胞存活率的影响;实时定量RT-PCR和Western blot法检测不同浓度RSL3(0、2.5、5、10μmol/L)对MACC1在mRNA和蛋白水平的影响,并检测干扰MACC1后GPX4在mRNA和蛋白水平的表达;流式细胞仪及激光共聚焦实验检测干扰MACC1后,SW620细胞中脂质过氧化Lipid ROS水平的变化。结果4种结直肠癌细胞中SW620细胞MACC1表达量最高;铁死亡诱导剂RSL3抑制SW620细胞的存活率,细胞存活率随RSL3浓度升高而降低,呈剂量依赖性;不同浓度的铁死亡抑制剂Fer-1对SW620细胞的存活率没有影响;与对照Ctrl组细胞存活率相比,单独使用RSL3细胞存活率降低了50%(P<0.01),而联合使用RSL3与Fer-1处理SW620细胞,细胞的存活率得到恢复(P>0.05);不同浓度的RSL3作用于SW620细胞后,细胞中MACC1基因在mRNA和蛋白水平被显著抑制(P<0.01),具有一定的药物浓度依赖性。siRNA干扰MACC1基因表达后,增强RSL3对SW620细胞毒作用,并抑制细胞中GPX4的表达(P<0.01),增加细胞中Lipid ROS水平(P<0.05)。结论MACC1通过调控GPX4影响RSL3诱导的结直肠癌细胞铁死亡。

甲状腺乳头状癌组织中肿瘤转移相关基因1、叉头翼螺旋转录因子3水平变化与临床病理特征及淋巴转移的关系

目的:探讨肿瘤转移相关基因1(MTA1)、叉头翼螺旋转录因子3(FOXP3)在甲状腺乳头状癌(PTC)淋巴转移患者中的作用及临床意义。方法:选取手术治疗的111例PTC患者为研究对象,收集患者的癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法观察组织中MTA1、FOXP3表达情况;采用多因素Logistic回归风险模型分析影响PTC淋巴转移的因素。结果:111例PTC组织标本中,MTA1的阳性表达率(MTA1阳性例数/癌组织总例数)为78.38%(87/111)高于癌旁组织17.12%(19/111),FOXP3在PTC组织中的阳性表达率(FOXP3阳性例数/癌组织总例数)为70.27%(78/111)高于癌旁组织13.51%(15/111),两组比较差异有统计学意义(均P<0.05);Spearman等级相关分析结果显示MTA1与FOXP3表达呈正相关(r=0.532,P=0.000);PTC患者癌组织中MTA1与FOXP3表达与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);单因素分析结果显示淋巴转移患者与未转移患者在性别、病灶数、包膜侵犯、TNM分期、脉管侵犯、MTA1及FOXP3等病理特征方面比较有统计学差异(均P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示性别、病灶、TNM分期、包膜侵犯及MTA1、FOXP3表达均是影响PTC淋巴转移的危险因素(均P<0.05)。结论:MTA1、FOXP3在PTC患者癌组织中表达均升高,其表达水平与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关,可作为评估PTC淋巴转移的有效指标。

乳腺癌组织转移相关蛋白-3表达与腋窝淋巴结转移的相关性

目的 研究乳腺癌组织转移相关蛋白(MTA)-3表达与腋窝淋巴结转移之间的关系。方法 采用回顾性分析方法,以2019年1月至2022年1月入廊坊市人民医院的120例乳腺癌患者为观察对象,将其设为研究组;同时,以同期入院的120例乳腺良性肿瘤患者为观察对象,设为对照组。测定两组患者乳腺组织内MTA-3水平,并比较两组患者MTA-3阳性表达率,分析乳腺癌临床病理特征与MTA-3之间的关系。参考研究组患者是否存在腋窝淋巴结转移划分为非转移组(n=66)与转移组(n=54),分析乳腺癌临床病理特征与腋窝淋巴结转移之间的关系,并分析腋窝淋巴结转移数目、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞增殖指数(Ki-67)与MTA-3的相关性。结果 研究组乳腺组织内MTA-3阳性表达率为35.00%,低于对照组(88.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。分子分型、腋窝淋巴结转移状态、肿瘤大小、临床分期、组织学分级与MTA-3阳性表达密切相关(P<0.05),年龄、月经状态与MTA-3阳性表达无显著相关性(P>0.05)。转移组与非转移组的分子分型、临床分期、组织学分级比较,差异有统计学意义(P<0.05);转移组与非转移组的年龄、月经状态、肿瘤大小比较,差异无统计学意义(P>0.05)。E-cadherin与MTA-3阳性表达呈正相关(r=0.238,P<0.05),腋窝淋巴结转移数目、Ki-67阳性与MTA-3阳性表达呈负相关(r=-0.194,-0.351,P<0.05)。结论 乳腺癌患者肿瘤组织内MTA-3阳性表达明显下降,与腋窝淋巴结转移有着密切联系,且于乳腺癌发生、转移中起着重要作用,其机制可能与MTA-3提高E-cadherin表达与下调Ki-67表达有关。

lncRNA MALAT1调节miR-22-3p/NLRP3轴对LPS诱导的急性肺损伤的影响

目的探究长链非编码RNA MALAT1通过miR-22-3p/NLRP3信号轴促进脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的分子机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、ALI组、sh-NC组、sh-MALAT1组,每组9只。通过气管内灌注LPS法建立ALI大鼠模型,假手术组气管内灌注等量的PBS作为阴性对照,sh-NC组、sh-MALAT1组在LPS诱导前48 h,通过静脉分别注射2×10^(7) TU/mL的sh-NC慢病毒或相同剂量的sh-MALAT1慢病毒。通过HE染色法观察肺组织的组织病理学改变;通过TUNEL染色法观察肺组织的细胞凋亡情况。通过双荧光素酶报告基因系统验证MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p的调控关系;通过实时荧光定量PCR技术和免疫印记技术检测肺组织和细胞中MALAT1、miR-22-3p、NLRP3、ASC、caspase-1的表达水平;通过酶联免疫吸附试验检测支气管肺泡灌洗液和细胞培养基中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌情况;通过CCK-8技术检测A549细胞增殖情况;通过流式细胞术检测A549细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,LPS诱导的ALI大鼠肺组织和A549细胞中MALAT1、NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA水平显著升高,miR-22-3p水平显著降低(P<0.05)。此外,与假手术组相比,LPS诱导的ALI大鼠肺组织的组织病理损伤水平、炎症反应和细胞凋亡率升高(P<0.05)。与ALI组、sh-NC组相比,抑制MALAT1表达可改善LPS诱导的ALI大鼠肺组织和细胞中的炎症反应和细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p存在相互调控关系。与ALI组、sh-NC组相比,sh-MALAT1组肺组织中MALAT1、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA水平降低(P<0.05),miR-22-3p水平升高(P<0.05)。同时,BALF上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α水平降低(P<0.05)。此外,下调MALAT1的同时抑制miR-22-3p表达后,细胞中miR-22-3p和Bcl-2表达水平显著降低,细胞增殖水平亦显著降低(P<0.05)。结论降低MALAT1的表达可通过促进miR-22-3p的表达,从而抑制NLRP3的蛋白水平,并最终抑制LPS诱导的ALI模型中的炎症反应和细胞凋亡。

乳腺癌组织转移相关蛋白-3表达与腋窝淋巴结转移的相关性

目的探讨乳腺癌患者转移相关蛋白(MTA)-3的表达情况及其与腋窝淋巴结转移的关系。方法收集122例乳腺癌(浸润性导管癌)患者的癌组织和20例乳腺增生症患者的乳腺组织(对照),采用免疫组化法检测组织样本中MTA-3的表达情况,并结合相关临床资料分析MTA-3与临床病理特征、Ki-67和上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的关系。按是否合并腋窝淋巴结转移将乳腺癌患者分为转移组(55例)和非转移组(67例)。结果乳腺癌组织中MTA-3的阳性表达率为32.8%,明显低于对照乳腺组织(85.0%)(P=0.000)。MTA-3阳性表达与组织学分级、临床分期、原发肿瘤大小、有无腋窝淋巴结转移及分子分型有关(P<0.05),与年龄、月经状态及体质量指数无关(P>0.05)。转移组组织学分级、临床分期及分子分型与非转移组比较差异均有统计学意义(P<0.05),而年龄、月经状态、体质量指数、原发肿瘤大小2个组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。Logistic多因素回归分析显示乳腺癌组织MTA-3阳性表达是乳腺癌患者合并腋窝淋巴结转移的保护性因素[比值比(OR)=0.662,95%可信区间(CI) 0.246～0.891]。MTA-3阳性表达与腋窝淋巴结转移数目、Ki-67阳性表达呈负相关(r=-0.197,P=0.030;r=-0.358,P=0.000),与E-cadherin阳性表达呈正相关(r=0.237,P=0.009)。结论乳腺癌组织中MTA-3表达显著降低,可能与乳腺癌的发生和腋窝淋巴结转移有关。

沉默MACC1的表达对卵巢癌细胞系SKOV-3顺铂化疗敏感性的影响

目的:探讨沉默结肠癌转移相关基因1(MACC1)对卵巢癌上皮性癌细胞SKOV-3顺铂化疗敏感性的影响。方法:SKOV-3细胞分为shRNA转染组(重组质粒psuper-EGFP-s3转染)、空质粒转染组(psuper-EGFP-neo转染)和对照组(未作转染),采用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞MACC1 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞对顺铂的耐药性。结果:3组SKOV-3细胞MACC1 mRNA和蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),shRNA转染组较未转染组和空质粒组下降。shRNA转染组对顺铂的IC50较对照组和空质粒转染组下降(P<0.05)。结论:沉默MACC1的表达能增加卵巢癌SKOV-3细胞对顺铂的敏感性。

MTA3和E-cadherin在宫颈癌转移中的作用研究

目的：研究MTA3及E-cadherin蛋白在宫颈癌中的表达,并分析两者间的相互关系。方法：利用免疫组化染色SABC法检测68例人体宫颈癌标本中MTA3和E-cadherin蛋白的表达。结果：MTA3蛋白的表达与宫颈癌的组织学分级有密切关系（字~2=4.484,P=0.034）,与患者的年龄、肿瘤的组织学分级、临床分期、是否有淋巴结或远处转移无关（P〉0.05）。肿瘤组E-cadherin存在表达减少或丢失的比率明显高于正常对照组（字~2=21.761,P=0.00003）,并与淋巴结转移有密切关系（字~2=14.686,P=0.0001）,而与患者的年龄、肿瘤的组织学分级、临床分期及远处转移等无关（P〉0.05）。在宫颈癌组织中,MTA3与E-cadherin的表达呈正相关（r=0.579,P=0.0002）。结论：E-cadherin蛋白表达减少或缺失与宫颈癌浸润转移具有良好的相关性,MTA3表达下调的宫颈癌细胞可能更具侵袭潜能,MTA3可能是宫颈癌EMT启动调控的因素之一。

肿瘤转移相关蛋白3与乳腺癌预后的相关性研究

目的探讨肿瘤转移相关蛋白3(MTA3)与乳腺癌预后的相关性。方法选择160例乳腺癌病例制成的组织芯片,带有表皮生长因子受体(EGFR)数据、雌激素受体(ER)数据和随访信息,采用免疫组织化学方法检测MTA3蛋白的表达,分析其与预后的相关性。结果在EGFR+/ER-乳腺癌中,癌组织MTA3表达高的患者有更长的总生存期(67.9%与41.2%,P=0.059);在EGFR-/ER+乳腺癌中,癌组织MTA3表达低的患者有更长的总生存期(100.0%与72.0%,P=0.039);在EGFR+/ER+乳腺癌组中,癌组织MTA3表达与患者预后无关(P=0.405)。结论 MTA3在乳腺癌中的功能可能受EGFR信号网络和ER信号网络的双向调控,最终影响患者预后。

MALAT1对Aβ1-42诱导PC12细胞损伤及PI3K/Akt通路的影响研究

目的探讨肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对β-淀粉样蛋白1-42片段(Aβ1-42)诱导肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响。方法体外培养PC12细胞,并随机分为正常对照组(正常生长PC细胞)、模型组(Aβ1-42诱导PC细胞损伤)、sh-MALAT1组(Aβ1-42组基础上转染MALAT1干扰序列)、sh-对照组(Aβ1-42组基础上转染MALAT1对照序列)。采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测各组PC12细胞MALAT1表达水平,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测PC12细胞增殖,采用流式细胞仪及AnnexinV-FITC/PI法体外检测PC12细胞凋亡,采用免疫印迹(WB)检测PC12细胞PI3K/Akt通路相关p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白及其下游凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3/caspase3、B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组、sh-对照组组PC12细胞存活率、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白水平低(均P<0.05),MALAT1表达水平、PC12细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase3/caspase3蛋白表达水平高(均P<0.05);与模型组、sh-对照组比较,sh-MALAT1组MALAT1表达水平、细胞存活率及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白水平高(均P<0.05),Bax、Cleaved-caspase3/caspase3蛋白表达水平低(均P<0.05)。结论下调MALAT1表达可能通过激活PI3K/Akt通路,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax、Cleaved-caspase3/caspase3蛋白表达抑制Aβ1-42诱导的PC12损伤,发挥保护作用。

lncRNA-MALAT1基于p-PI3K/p-AKT通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的探究血浆长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,lncRNA-MALAT1)基于磷酸化-磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)/磷酸化-苏氨酸蛋白激酶(phosphorylated threonine-protein kinase,p-AKT)通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法将培养的U87脑胶质瘤细胞分为脑胶质瘤组、空白组和转染组。采用PCR法检测lncRNA-MALAT1表达量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT检测细胞增殖率,Transwell检测细胞侵袭,Western blot法检测p-PI3K/p-AKT通路相关蛋白、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)蛋白水平。结果与脑胶质瘤组相比,空白组、转染组lncRNA-MALAT1表达量较低;与空白组相比,转染组lncRNA-MALAT1表达量较低。与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞凋亡率较高;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞增殖率较低;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞侵袭个数较少;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组p-PI3K/p-AKT通路相关蛋白表达量较低;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组MMP2、MMP9蛋白表达量较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA-MALAT1可有效降低p-PI3K/p-AKT信号通路相关蛋白的表达,继而有效抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭,促进胶质瘤细胞的凋亡,降低MMP2、MMP9蛋白的表达量。

CCL18-PITPNM3配体受体轴在头颈鳞状细胞癌侵袭转移中的作用及分子机制研究

目的探讨CCL18-PITPNM3(CC chemokine ligand 18-phosphatidylinositol transfer protein 3,CCL18-PITPNM3)配体受体轴在头颈鳞状细胞癌侵袭转移中的作用及其分子机制。方法采用人重组蛋白CCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞,siRNA下调PITPNM3的表达,通过CCK-8(cell counting kit-8)、平板克隆实验、流式周期检测生长增殖能力的变化,划痕愈合实验、Transwell侵袭小室实验检测体外迁移侵袭能力的改变,qRT-PCR、Western blot检测EMT分子标志物的表达情况。结果①rhCCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞后,细胞划痕愈合率增加,穿过Transwell聚碳酸酯膜的细胞明显增多,rhCCL18处理siRNA下调PITPNM3的Tu686、6-10B细胞,下调组细胞的迁移和侵袭能力较亲本细胞处理组明显减弱;②rhCCL18处理头颈鳞状细胞癌Tu686、6-10B细胞,mRNA水平E-cadherin表达降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin表达升高;蛋白质水平E-cadherin表达降低,Vimentin表达升高。下调两株细胞的PITPNM3表达后rhCCL18再次处理,E-cadherin下调和Vimentin、N-cadherin、Fibronectin上调均未显示出亲本细胞的明显趋势;③rhCCL18处理和下调PITPNM3对Tu686、6-10B 6组细胞的生存率、增殖及细胞周期无明显变化。结论CCL18-PITPNM3配体受体轴可促进头颈鳞状细胞癌的体外侵袭转移能力,可能与EMT转化相关。

MTA3在肺癌细胞中调控细胞凋亡机制的研究

背景与目的肿瘤转移基因(metastasis associated gene,MTA)是一个肿瘤候选基因家族,主要包括MTA1、MTA2、MTA3,已有的研究证实在不同肿瘤中MTA3发挥着相反的作用,本研究旨在探讨MTA3在肺癌细胞中调控细胞凋亡方面的影响。方法应用Western blot方法和Real-time PCR方法检测肺癌细胞系A549和H157中MTA3的转染效率,流式细胞仪方法检测上调/下调MTA3后肺癌细胞凋亡情况,Western blot方法检测下调MTA3后凋亡相关基因的表达。结果在肺癌细胞系A549和H157中干扰MTA3后则促进细胞凋亡,同时引起凋亡相关蛋白Bax、ClevedCaspase-3、p-PARP表达上调及Bcl-2表达下调。结论 MTA3在肺癌细胞系A549和H157细胞中通过抑制凋亡相关基因的表达抑制细胞凋亡。

卵巢上皮性肿瘤凋亡相关蛋白3和活化白细胞黏附分子的表达及临床意义

目的分析卵巢上皮性肿瘤凋亡相关蛋白3(apoptosis associated protein 3, APR3)和活化白细胞黏附分子(activated leukocyte cell adhesion molecule, ALCAM)的表达及临床意义。方法选取2014年10月—2017年4月收治的98例卵巢上皮性肿瘤患者,对其癌组织及癌旁组织进行染色。检测不同组织中APR3和ALCAM的表达水平,并结合卵巢上皮性肿瘤组织病理分期情况,分析APR3和ALCAM的表达与病理特征的相关性,对患者进行3年的随访,观察预后情况。结果 APR3和ALCAM在恶性上皮性肿瘤表达率明显高于良性及交界性上皮性肿瘤(P<0.05)。伴有脏器、淋巴结转移、TNMⅢ~Ⅳ期和组织低分化恶性卵巢上皮性肿瘤患者APR3和ALCAM蛋白表达水平更高(P<0.05);APR3和ALCAM蛋白高表达患者其3年总生存率均显著低于低表达患者(P<0.05)。APR3和ALCAM水平与TNM分期呈正相关,但与组织分化程度呈负相关(P<0.05)。结论 APR3与ALCAM表达在恶性卵巢上皮性肿瘤发生、发展及脏器、淋巴结转移等过程中发挥着重要作用,临床可根据APR3与ALCAM的表达情况评估病情并指导制订治疗方案。

LncRNA MALAT1调节miR-383-5p/SOCS3轴对人牙周膜干细胞的影响

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)调控微小RNA-383-5p(microRNA-383-5p,miR-383-5p)/细胞因子信号转导负调控因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)轴对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖、凋亡及成骨分化的影响。方法LPS处理hPDLSCs后用靶向MALAT1的小干扰RNA(small interfering RNA-MALAT1,si-MALAT1)或miR-383-5p抑制物(miR-383-5p inhibitor,in-miR-383-5p)或SOCS3过表达质粒(SOCS3)转染,ELISA检测炎症因子水平;RT-qPCR和Western blot检测转染效率;CCK-8和TUNEL检测细胞增殖、凋亡;使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和茜素红S(alizarin red S,ARS)染色分析成骨分化;Western blot对增殖、凋亡以及成骨分化相关蛋白进行检测。生物信息学与双荧光素酶实验分析miR-383-5p与MALAT1/SOCS3之间的关系。结果LPS可诱导hPDLSCs细胞炎症和凋亡,降低了细胞增殖能力和成骨分化程度;同时上调MALAT1和SOCS3表达,下调miR-383-5p表达(P<0.05)。敲低MALAT1可明显降低LPS诱导的hPDLSCs细胞炎症反应、凋亡能力,细胞增殖能力和成骨分化程度增加;同时还可上调miR-383-5p表达,下调SOCS3表达(P<0.05)。此外,回复实验表明,抑制miR-383-5p表达或上调SOCS3表达可部分逆转MALAT1敲低后对LPS诱导的hPDLSCs细胞的影响(P<0.05)。进一步分析验证,MALAT1海绵化miR-383-5p靶向调控SOCS3表达(P<0.05)。结论敲低MALAT1可通过调节miR-383-5p/SOCS3轴改善炎症状态下hPDLSCs的增殖、凋亡和成骨分化。

MALAT-1沉默对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡及Caspase-3通路的影响

目的探究RNA干扰技术(RNAi)沉默肺癌转移相关转录本-1(MALAT-1)基因对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡的影响并探讨其作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测MALAT-1在人正常口腔上皮细胞系HIOE和OSCC细胞系SCC25中的表达情况。实验分为四组:空白对照组不转染序列;阴性对照组采用对照序列进行转染;RNAi组采用MALAT-1SiRNA进行转染;inhibitor组在SiRNA转染SCC25细胞前30 min,向培养基中加入Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO进行预处理(终浓度为40μmol/L)。采用RNAi技术敲低SCC25细胞中MALAT-1表达,采用透射电子显微镜(TEM)观察SCC25细胞超微结构;采用CKK-8法检测细胞增殖情况;采用流式膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)法检测细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测Caspase-3 mRNA和蛋白表达情况。结果与正常细胞比较,MALAT-1在人OSCC细胞系SCC25中表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。转染MALAT-1 SiRNA可明显降低SCC25细胞中MALAT-1表达(P<0.05)。与阴性对照组和空白对照组比较,RNAi组SCC25细胞增殖抑制率明显升高,细胞凋亡明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞呈现出典型的凋亡特征;细胞中Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。加入Caspase-3抑制剂预处理,细胞凋亡明显减弱(P<0.05)。结论 MALAT-1沉默抑制人OSCC细胞系SCC25细胞增殖,促进凋亡,推测可能通过Caspase-3凋亡通路发挥作用。

MALAT1对神经病理性疼痛大鼠STAT3信号通路的影响

目的 探讨肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对神经病理性疼痛(NP)大鼠信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 选取置管成功的大鼠40只,随机分为对照组(注射生理盐水)、假手术组(仅暴露坐骨神经+注射生理盐水)、NP组(NP造模+注射生理盐水)、阴性慢病毒组(NP造模+注射阴性慢病毒干扰载体)和MALAT1 shRNA组(NP造模+注射MALAT1慢病毒干扰载体)。测定大鼠机械性缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测大鼠脊髓组织中MALAT1、STAT3 mRNA表达情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠脊髓组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠脊髓组织中磷酸化STAT3(p-STAT3)、STAT3蛋白表达情况。结果 与假手术组比较,造模后NP组大鼠MWT明显降低(P<0.05),TWL明显缩短(P<0.05),大鼠脊髓组织中MALAT1、STAT3 mRNA表达水平,IL-6、TNF-α、IL-1β表达水平及p-STAT3/STAT3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与阴性慢病毒组比较,MALAT1 shRNA组大鼠MWT明显升高(P<0.05),TWL明显延长(P<0.05),大鼠脊髓组织中MALAT1、STAT3 mRNA表达水平,IL-6、TNF-α、IL-1β表达水平及p-STAT3/STAT3蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论 干扰MALAT1能抑制炎症反应及STAT3信号通路的激活,缓解NP大鼠的机械痛觉过敏及热痛觉过敏症状。

MTA3基因的表达与软骨细胞增殖相关性探讨

目的 探讨转移相关蛋白3(MTA3)对在软骨细胞中的表达情况,对软骨细胞增殖的影响及其作用机制。方法 将C28/12软骨细胞随机分为MTA3过表达组(LV MTA3)和沉默MTA3组(siMTA3),并设空白对照组(BC)、阴性对照组(NC)。Western blot检测C28/12细胞MTA3、增殖细胞核抗原(PCNA)、Wnt/β-catenin、E钙黏蛋白(E-cadherin)水平。RT-PCR测定C28/12细胞MTA3 mRNA水平。CCK8测定C28/12细胞增殖情况。结果与BC组和NC组相比,LV-MTA3组细胞MTA3蛋白和mRNA水平提高(P<0.05),si-MTA3组细胞MTA3蛋白和mRNA水平降低(P<0.05),细胞增殖率、细胞PCNA、Wnt-catenin蛋白水平降低(P<0.05)。结论 MTA3在软骨细胞中表达,能够促进软骨细胞增殖、其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。