白术、酸枣仁提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果研究

试验旨在研究菊科植物白术干燥根茎切片提取物(白术提取物)、鼠李科植物酸枣的种子提取物(酸枣仁提取物)单独和联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。通过微量肉汤法测定抑菌浓度和抑制率;用酶标仪测定相应OD值以检测核酸和蛋白质含量、乳酸脱氢酶(LDH)活力及碱性磷酸酶(AKP)活力,以确定对细菌细胞膜和细胞壁的影响,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDSPAGE)凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌菌体总蛋白含量变化;用结晶紫染色法检测对细菌生物膜的抑制作用。结果表明:0.4 mg/mL白术、酸枣仁提取物单独及0.1 mg/mL二者联合作用对金黄色葡萄球菌均具有显著抑菌效果;与对照组相比,白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均使菌液上清液OD_(260)、OD_(280)数值和AKP活力显著增加,菌体LDH活力和总蛋白含量降低,抑制了生物膜的形成。说明白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均可显著抑制金黄色葡萄球菌,且联合作用抑菌效果显著强于各药物单独作用。

白术多糖提取分离、结构表征及生物活性研究进展

白术作为我国一味补虚中药材在临床上应用广泛,现代研究发现其主要含挥发油、多糖、内酯类、氨基酸等化学成分,其中白术多糖含量较高,具有广泛的药物开发和研究价值。近年来,针对白术多糖开展了大量研究,包括白术多糖提取、分离、结构鉴定以及药理作用等。目前,白术多糖含量测定方法主要有蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法,提取多糖的方法可采用煎煮法、超声辅助提取法、复合酶提取法、微波辅助提取法等;分离方法主要有柱色谱分离法、乙醇分步沉淀法、超滤法等。且发现其提取、分离、测定方法不同对白术多糖含量具有较大影响。此外,白术多糖结构研究尚处于起步阶段,仅解析了部分精制多糖结构,大部分结构尚未明确。目前发现的白术多糖的生物活性主要有抗肿瘤活性、免疫调节活性、神经保护作用、胃肠功能调节作用、肝脏保护作用以及生长促进等作用,这些研究只存在于简单的药效学评价,具体的作用机制和构效关系的研究还未广泛地展开。研究就近10年来有关白术多糖的提取分离方法、化学结构研究及其主要生物活性研究相关文献进行梳理总结,为其进一步的研究、开发、利用提供参考。

黄芪和白术提取物对IEC-6细胞迁移的影响

目的筛选益气健脾中药黄芪和白术促进小肠上皮细胞(IEC-6)迁移的有效提取部位。方法以系统溶剂分离法从黄芪、白术药材分别得到糖复合物、正丁醇萃取物、醇沉上清液以及大孔树脂吸附后70%乙醇洗脱部位作受试药。IEC-6细胞接种于6孔板并培养24 h,划痕法造细胞迁移模型,划痕后加入各受试药,24 h后观察细胞迁移情况;并进一步观察具有促进细胞迁移的有效部位对二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致细胞迁移抑制的影响。结果 50 mg.L-1的黄芪糖复合物或白术糖复合物能促进细胞迁移(P<0.01);黄芪、白术的正丁醇萃取物、醇沉上清液、大孔树脂吸附后醇洗脱部位对细胞迁移均无明显影响;2.5 mmol.L-1的DFMO能抑制细胞迁移(P<0.01),加入DFMO同时加入100 mg.L-1黄芪糖复合物或200 mg.L-1白术糖复合物能使细胞迁移恢复至接近正常水平。结论黄芪糖复合物和白术糖复合物能促进IEC-6细胞迁移,还能使DFMO所致的细胞迁移抑制恢复至接近正常水平。

白术和黄芪不同提取部位对小肠上皮细胞增殖的影响

目的观察白术和黄芪的不同提取部位对小肠上皮细胞(IEC-6)增殖的影响。方法以系统溶剂分离法分别提取白术和黄芪的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、醇沉上清液和多糖部位;另将白术和黄芪以乙醇提取,D101大孔树脂吸附法得到40%和70%乙醇洗脱部位。MTT法检测白术和黄芪正丁醇部位、醇沉上清液、多糖部位、40%和70%醇洗脱液对IEC-6细胞增殖的作用。结果初步发现黄芪正丁醇部位、醇沉上清部位、糖复合物、40%和70%醇洗脱部位加药24h能促进细胞增殖;白术40%乙醇洗脱液部位加药24h能促进细胞增殖,白术正丁醇部位、糖复合物、40%和70%乙醇洗脱液部位加药48h能促进细胞增殖。结论白术和黄芪正丁醇部位、多糖部位、40%和70%醇洗脱液在加药后不同时间对IEC-6细胞有不同程度的促进增殖作用;采用系统溶剂分离法和大孔树脂吸附法提取白术和黄芪不同部位,可以用于细胞增殖实验,为进一步开展白术和黄芪在细胞水平上的药理研究提供参考。

白术提取物对IEC-6细胞迁移过程Rho GTPaes及肌球蛋白II表达的影响

目的观察白术提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移多胺介导钾通道激活信号通路指标Rho GTPaes(Rho A、Rac1和Cdc42)表达的影响,对肌球蛋白II(myosinⅡ)分布和表达的影响,以探讨益气健脾中药白术对胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法荧光定量PCR法检测Rho A、Rac1和Cdc42 mRNA表达;Western blot法检测Rho A、Rac1和Cdc42蛋白表达;免疫荧光法检测myosinⅡ蛋白分布和表达。结果白术提取物能提高细胞迁移过程Rho A、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达,逆转多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致的Rho A、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达抑制;提高细胞迁移过程myosinⅡ表达,从而增加细胞骨架应力纤维形成,改善DFMO所致的myosinⅡ蛋白表达和分布的抑制。结论白术提取物促进IEC-6细胞迁移的作用机制,与其影响多胺介导钾通道激活信号通路有关。

白术挥发性成分的超临界流体萃取及其分析

采用超临界流体萃取白术挥发油成分 ,对萃取条件进行优化 ,并用气相色谱、气相色谱 -质谱分析鉴定出超临界流体萃取的挥发油中22个化合物。最佳的超临界流体萃取条件为压力22.0MPa ,温度60℃ ,0.5mL乙醇作改性剂 ,先静态萃取10min(CO2 用量2.0mL),再动态萃取40min(CO2 流速为0.3mL/min)。将超临界流体萃取与水蒸气蒸馏进行对比 ,水蒸气蒸馏5h的油收率仅为超临界流体萃取1h油收率的10.32 % ,证明超临界流体萃取替代传统萃取的必要性。

“白术-白芍”药对不同提取工艺对药效作用的影响

目的比较不同提取工艺对“白术-白芍”药对药效作用的影响。方法通过小鼠肠推进实验、抗急性胃黏膜损伤实验、扭体法、热板法等,评价“白术-白芍”药对水提、醇提、超临界提取等工艺对药效的影响。结果超临界联合水提或醇提的工艺最有利于“白术-白芍”药对药效作用的发挥。结论该研究为优选“白术-白芍”的提取工艺提供了科学依据。

多指标正交设计优选白术-白芍药对的提取工艺

[目的]优选出最佳的白术-白芍药对提取工艺。[方法]采用正交试验和多指标综合加权评分法,以白术中的白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术素和白芍中芍药苷、氧化芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸8个指标性成分为考察指标,对影响白术-白芍药对提取工艺的因素进行考察。[结果]最佳的白术-白芍药对提取工艺是将白术、白芍药材(3:2,w/w)均匀混合后加入10倍量的70%甲醇溶液,回流提取3次,每次1h。[结论]该提取工艺稳定可靠,可为白术-白芍药对的进一步研究提供参考。

莪术、白术挥发油提取及包合工艺考察

目的:研究莪术、白术挥发油提取及包合的最佳工艺条件。方法:采用单因素考察法,以挥发油得量为指标,考察药材粉碎度、加水量、浸泡时间、提取时间对挥发油的提取影响,优选提取工艺;采用正交试验法,以挥发油利用率、包合物含油率、包合物收率综合评分为指标,考察挥发油与β-环糊精的用量比、包合时间、包合温度对挥发油包合的影响,优选出最佳工艺。结果:最佳提取工艺为过20目筛粗粉,加6倍量水,不浸泡,提取6 h;最佳包合工艺为挥发油与β-环糊精的用量比1:6,包合120 min,包合温度为50℃。结论:该提取方法可较完全地提取莪术、白术挥发油,经β-环糊精包合后,性质稳定,包合工艺简单可行。

白术水提物对酵母朊病毒[PSI^+]治愈作用的定量研究

目的定量研究白术水提物对酵母朊病毒[PSI+]的治愈作用。方法首先用含白术水提物的培养基培养酵母朊病毒[PSI+]阳性菌株,初步评价白术的治愈作用。然后在细胞水平借助影印培养法和蛋白水平上使用半变性琼脂糖凝胶电泳结合蛋白免疫技术进一步验证白术水提物对酵母朊病毒[PSI+]的治愈作用。结果白术水提物作用酵母朊病毒[PSI+]5d后的治愈率为6%。结论白术水提物对酵母朊病毒[PSI+]有一定的治愈作用。

白术标准汤剂质量评价方法的建立

目的建立白术的白术内酯Ⅲ、绿原酸和果糖含量测定方法,建立白术标准汤剂的质量评价方法,为白术及其制剂的质量控制提供参考。方法收集不同产地的白术19批制备标准汤剂,计算出膏率和指标成分转移率,采用超高效液相色谱(UPLC)法建立白术及标准汤剂中白术内酯Ⅲ、绿原酸和果糖的含量测定方法。结果白术标准汤剂中白术内酯Ⅲ、绿原酸和果糖的含量分别为0.002%~0.059%,0.011%~0.131%和1.79%~30.7%。白术标准汤剂平均出膏率为(56.8±5.7)%,白术内酯Ⅲ、绿原酸和果糖的平均转移率分别为(30.7±12.5)%,(69.2±12.0)%和(84.5±9.0)%。结论与白术内酯Ⅲ和绿原酸比较,果糖在白术标准汤剂中含量高、转移率稳定,建议作为白术标准汤剂的质量控制标志物。建立白术标准汤剂的质量评价方法,为白术水提物制剂的质控方法提供参考。

白术总黄酮提取工艺研究

目的研究白术总黄酮的提取工艺。方法以提取次数、提取时间、料液比为因素运用L9(34)正交试验方法进行白术总黄酮提取工艺的研究。结果白术总黄酮提取工艺的最佳方案为:取次数为2次、提取时间为2 h、用的溶媒量为15倍体积的95%乙醇。结论该方法重现性好,简单易操作,适合大规模生产。

白术挥发油的超临界CO2萃取及化学成分分析

目的确定白术挥发油的超临界CO2萃取最佳工艺条件,分析其化学成分。方法采用正交试验法,以萃取物中苍术酮的相对含量与萃取物得率为指标进行综合评分,通过考察萃取压力、萃取温度和萃取时间,筛选出最佳萃取工艺条件。采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对萃取物化学成分进行分析。结果超临界CO2萃取白术挥发油的最佳工艺为:萃取压力25 MPa,萃取温度45℃,萃取时间1.5 h,该条件下萃取率可达2.53%,苍术酮的相对百分含量为48.48%。萃取物中鉴定出60个化合物,其中主要成分为苍术酮(45.53%)、δ-杜松烯(7.33%)、2-(2,5-二甲氧苯基)环已烯酮(6.98%)、双环吉马烯(5.78%)、γ-榄香烯(5.48%)等。结论本研究获得的萃取物组成及含量与文献报告有明显差别。

白术多糖在饲料中的应用

本文就白术多糖的提取、分离与纯化及其在饲料中的应用进行综述。

提取-共沸精馏耦合技术与水蒸气蒸馏法提取中药挥发油比较研究

目的:考察提取-共沸精馏耦合技术(WER)与水蒸气蒸馏法(SD)对白术、桂枝混合挥发油得率的影响,确定最佳方法和工艺条件。方法:分别以正交试验法优选WER与SD提取中药挥发油的最佳工艺,采用配对T检验法评价两种提取方法对混合挥发油得率是否有显著差异,并对两种方法所提挥发油进行GC、HPLC分析和比较。结果:WER最佳提取工艺为浸泡3 h、提取6 h、加水量10倍; SD最佳提取工艺为浸泡3 h、提取6 h、加水量8倍。WER比SD提取白术、桂枝混合挥发油得率显著提高,桂皮醛与白术内酯Ⅰ含量也明显提高。结论:WER提取挥发油显著优于SD。优选的提取方法及工艺可为葶苈生脉组方中白术、桂枝挥发油的提取提供依据。

白术提取工艺及抗氧化性能研究

为提高白术综合提取率,以蒸馏水为溶剂,采用直接蒸馏法收集白术水提物、挥发油、滤渣进一步醇提得白术醇提物。由正交实验法以黄酮得率为指标优化工艺参数:料液(水)比为1∶20(mL/g),蒸馏时间为5 h,料液(醇)比1∶20(mL/g),微波时间为4 min。此条件下,黄酮得率0.44%,多糖得率30.42%,水和醇总提取物得率35.21%。进一步,以最优工艺所得提取物进行抗自由基实验,结果表明,50μg/mL白术水提物对·OH清除率达21.96%,50 ug/mL白术醇提物清除率为18.89%;40 ug/mL白术水提物对DPPH·清除率达17.62%,40 ug/mL白术醇提物清除率为12.85%。

Caco-2细胞模型评价白术对人参皂苷Rg1肠吸收影响

目的:运用Caco-2细胞模型研究白术提取物对人参皂苷Rg1肠吸收的影响。方法:建立Caco-2细胞模型及使用高效液相色谱测定人参皂苷Rg1含量方法,考察在最适细胞生长浓度下,白术提取物对人参皂苷Rg1表观渗透系数(Papp)和转运量的影响。结果:本研究成功构建了Caco-2细胞模型及人参皂苷Rg1的高效液相色谱含量测定方法,研究显示,与正常对照组相比,模型对照组中200μg/mL白术提取物可显著促进400μg/mL人参皂苷Rg1在肠道的吸收,Papp增加超过3倍(P<0.01)。结论:提示白术提取物对人参皂苷Rg1肠吸收有较好的促进作用。

建昌帮蜜糠炒白术炮制工艺优化

目的优选建昌帮蜜糠炒白术的炮制工艺。方法以白术内酯I、白术内酯II、白术内酯III、苍术酮、醇浸出物质量分数为指标,HPLC法及《中国药典》2010年版中的醇浸出物法测定各个指标,采用L9(34)正交试验,确定其最佳炮制工艺参数:蜜糠用量、炒制温度和炒制时间。结果蜜糠炒白术的最佳工艺:辅料蜜糠用量为50%(占药材质量的百分比),炒制温度为200℃,炒制时间为5 min。结论最佳炮制工艺经验证,稳定可行。

白术甲醇提取物对小肠上皮细胞增殖、迁移及磷脂酶C-γ1表达的影响

目的观察白术甲醇提取物(以下简称白术提取物)对小肠上皮细胞(IEC-6)增殖、迁移及磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)表达的影响,旨在探讨益气健脾中药白术促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法细胞分为空白组,精脒(5μmol/L)组,白术提取物(50、100、200 mg/L)组;负荷实验设α-二氟甲基鸟氨酸[(α-difluoromethylornithine,DFMO)多胺合成抑制剂]组,精脒+DFMO组,白术提取物(50、100、200 mg/L)+DFMO组。细胞贴壁培养24 h,给予受试药培养相应时间后,采用实时细胞分析仪(Real-time Cell Analyzer,RTCA)观察白术提取物对IEC-6细胞增殖的影响;划痕法检测白术提取物对IEC-6细胞迁移数目的影响;采用荧光定量PCR法和Western blot法检测PLC-γ1 m RNA及其蛋白表达。结果与空白组比较,白术提取物对细胞增殖无明显影响(P>0.05),精脒和白术提取物(100、200 mg/L)对细胞迁移均有促进作用(P<0.01),并能增加细胞迁移过程PLC-γ1 m RNA和蛋白表达(P<0.01)。与DFMO组比较,精脒、白术提取物(100、200mg/L)能逆转DFMO所致的细胞迁移抑制及PLC-γ1 m RNA及其蛋白表达的抑制作用(均P<0.01)。结论白术提取物可通过促进多胺介导的上皮细胞迁移发挥修复胃肠黏膜损伤作用,细胞增殖不是其主要药效作用。

参葛颗粒中挥发油成分的提取及其包合工艺研究

目的:确定参葛颗粒中炒白术、片姜黄挥发油的提取及β-环糊精包合工艺。方法:以挥发油提取率为指标,采用正交试验设计,对水蒸气蒸馏法提取挥发油的工艺参数如浸泡时间、加水量、提取时间进行优化;以挥发油包合率为指标,用正交试验对挥发油研磨法包合工艺进行优选。结果:挥发油提取工艺为:浸泡时间为0 h,加6倍量水,提取8 h;挥发油包合的最佳工艺为:挥发油∶β-CD为1∶8,加3倍量水,研磨40 min。结论:该工艺可用于参葛颗粒中炒白术、片姜黄挥发油的提取及包合。