荚膜甲基球菌蛋白替代鱼粉对卵形鲳鲹生长和抗氧化能力的影响

实验旨在研究荚膜甲基球菌(Methylococcus capsulatus, Bath)蛋白(MBM,斐康?蛋白)替代鱼粉对卵形鲳鲹生长性能和抗氧化能力的影响。MBM添加量分别为0、3.5%、7%和10.5%,替代基础饲料中鱼粉(含量35%)0、10%、20%和30%,制得4组等氮等脂饲料,即MBM0、MBM10、MBM20和MBM30组,饲喂卵形鲳鲹幼鱼[初始均重(34.88±1.13) g]56d。实验结果显示,随着饲料中MBM含量的升高,各组间的末均重、增重率、特定生长率、存活率、肝体比、脏体比和饲料系数均无显著性差异(P>0.05)。MBM30组肥满度显著高于MBM0组(P<0.05)。各组全鱼粗蛋白含量无显著差异(P>0.05), MBM20组全鱼粗脂肪含量显著高于MBM0组和MBM10组(P<0.05)。MBM20组和MBM30组背肌粗脂肪含量显著高于MBM0组(P<0.05),背肌粗脂肪与MBM替代鱼粉的比例呈显著正相关关系(P<0.05)。MBM20和MBM30组血清甘油三酯显著低于MBM0组(P<0.05), MBM20组血清谷草转氨酶活性显著高于MBM0组(P<0.05), MBM10组血清白蛋白显著高于MBM0组(P<0.05)。MBM20组血清总抗氧化能力与MBM0无显著性差异(P>0.05),显著高于MBM10和MBM30组(P<0.05), MBM20组肠道超氧化物歧化酶活性显著高于其余各组(P<0.05), MBM20组和MBM30组肝脏HE染色切片中空泡面积显著高于MBM0组(P<0.05)。综上所述,在基础饲料鱼粉含量为35%时, MBM可以替代20%—30%的鱼粉且不会对卵形鲳鲹的生长性能、形态学指标、体成分和血清生化指标产生负面影响。

荚膜甲基球菌蛋白遗传毒性研究和被动皮肤过敏试验

荚膜甲基球菌蛋白(Methylococcus capsulatus bacteria meal,MBM)拟开发为新饲料原料。本研究旨在通过遗传毒性研究和被动过敏试验评价其毒理学安全性,为其未来的应用奠定基础。本研究包括四个试验:鼠伤寒沙门氏菌回复突变(Ames)试验采用平板掺入法,每皿剂量在0.625~10.000 mg范围内,采用TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535五种菌株进行回复突变试验;小鼠骨髓细胞微核试验和精子畸形试验均设2500、5000、10000 mg/kg三个MBM剂量组,微核试验采用30 h两次给药法,精子畸形试验连续染毒5 d,分别在既定的时间采样制片;大鼠被动皮肤过敏试验设250、500、1000 mg/kg三个MBM剂量组,制备抗血清后背部皮内注射致敏,24 h和/或48 h后进行抗原激发,考察蓝色反应斑直径。所有试验均根据要求设置阴性、阳性对照组。结果表明:在有或无代谢活化系统结果(S9)时,MBM的鼠伤寒沙门氏菌回复突变(Ames)试验结果均为阴性;小鼠骨髓细胞微核和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠皮肤被动过敏试验结果为阴性。说明在设置的试验系统和剂量下MBM未显示遗传毒性和潜在的致敏性。

荚膜甲基球菌蛋白的急性毒性和亚慢性毒性研究

为评价荚膜甲基球菌蛋白(MBM)急性与亚慢性毒性,进行在大、小鼠的急性经口毒性试验和大鼠的90 d亚慢性毒性试验。急性毒性试验将大、小鼠各40只,分别随机分为对照组和给药组,给药组剂量为10 g/kg·bw,对照组灌胃相等体积的溶媒。给药后连续观察14 d,于第15天进行大体剖检。亚慢性毒性试验将80只大鼠,随机分为高、中、低剂量组和对照组,分别饲喂添加5%、2.5%和1%MBM的饲料和空白饲料,连续90 d。试验期间每天进行观察,每周记录体重、摄食和饮水量,于试验第45天和90天每组随机采血10只大鼠后进行病理学检查并摘取指定脏器计算脏器系数,血液用于血液学和血液生化检查。结果显示:急性毒性试验中除因操作不当导致一只小鼠死亡外,观察期内未见中毒症状与动物死亡,大体剖检各脏器组织均无异常;亚慢性毒性试验期间除计划剖检外动物均存活且无中毒症状,虽有个别指标与对照组存在统计学差异,但与MBM毒性无关,病理学检查亦未见病变。结果表明MBM在大、小鼠LD50均≥10 g/kg·bw;添加5%MBM于饲料中未观察到明显的有害作用,无作用剂量至少达到3100 mg/kg·bw。

大口黑鲈对六种非粮蛋白源的表观消化率

实验以0.1%三氧化二钇(Y_(2)O_(3))为外源指示剂, 用“70%基础饲料+30%待测饲料原料”的方法配制实验饲料。测定初始体重为(19.28±0.10) g的大口黑鲈(Micropterus salmoides)对荚膜甲基球菌蛋白、乙醇梭菌蛋白、黄粉虫粉、酶解大豆、小球藻和棉籽浓缩蛋白的干物质、蛋白质、脂肪、能量和氨基酸的表观消化率。结果显示, 6种实验原料干物质的表观消化率在37.27%—86.43%(荚膜甲基球菌蛋白>乙醇梭菌蛋白>酶解大豆>黄粉虫粉>小球藻>棉籽浓缩蛋白), 其中荚膜甲基球菌蛋白干物质的表观消化率最高, 乙醇梭菌蛋白次之, 黄粉虫粉、酶解大豆和小球藻之间没有显著性差异, 均显著高于棉籽浓缩蛋白(P<0.05);蛋白质的表观消化率在79.97%—88.45%(荚膜甲基球菌蛋白>乙醇梭菌蛋白>黄粉虫粉>酶解大豆>小球藻>棉籽浓缩蛋白), 其中荚膜甲基球菌蛋白和乙醇梭菌蛋白均显著高于酶解大豆、小球藻和棉籽浓缩蛋白(P<0.05);脂肪的表观消化率在51.19%—97.48%(乙醇梭菌蛋白>荚膜甲基球菌蛋白>酶解大豆>小球藻>黄粉虫粉>棉籽浓缩蛋白);能量的表观消化率在43.25%—85.43%(荚膜甲基球菌蛋白>乙醇梭菌蛋白>酶解大豆>黄粉虫粉>小球藻>棉籽浓缩蛋白);水解总氨基酸表观消化率在70.52%—90.51%(荚膜甲基球菌蛋白>乙醇梭菌蛋白>黄粉虫粉>酶解大豆>小球藻>棉籽浓缩蛋白)。各原料17种氨基酸表观消化率变化趋势与蛋白质表观消化率变化趋势基本一致。综上所述, 荚膜甲基球菌蛋白和乙醇梭菌蛋白的脂肪、能量和氨基酸的表观消化率最高, 且和黄粉虫粉、酶解大豆及小球藻的脂肪、能量、氨基酸的表观消化率均优于棉籽浓缩蛋白。因此, 荚膜甲基球菌蛋白、乙醇梭菌蛋白、小球藻、酶解大豆和黄粉虫粉均是大口黑鲈比较理想的蛋白质来源, 可作为大口黑鲈饲料中替代鱼粉的候选物。